柳清青 海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站812100

青海牦牛牛病毒性腹瀉病毒的血清學(xué)調(diào)查

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為掌握青海牦牛群中牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的感染情況，采用ELISA試劑盒對采集于青海省6個規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場和11戶散養(yǎng)戶的559份血清樣品進行了BVDV抗體檢測。檢測結(jié)果顯示，559份血清樣品平均陽性率為36.14%，規(guī)模牦牛場平均陽性率為34.19%，散養(yǎng)戶平均陽性率為39.42%。表明青海牦牛群中普遍存在BVDV感染，應(yīng)該引起重視。

青海牦牛；牛病毒性腹瀉病毒；血清學(xué)調(diào)查

牛病毒性腹瀉是由牛病毒性腹瀉病毒引起牛的一種急性、熱性傳染病[1]，牛感染BVDV后表現(xiàn)為腹瀉、進行性消瘦、脫水，嚴重的導(dǎo)致死亡[2]。BVDV可以引起免疫耐受和免疫抑制，母畜流產(chǎn)和奶牛產(chǎn)奶量下降，每年都給全球養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[3.4]。為了掌握青海牦牛中BVDV的感染情況，為青海牦牛BVDV的綜合防控提供參考依據(jù)，本研究對采集于青海省6個規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場和11戶散養(yǎng)戶的559份血清樣品進行了ELISA抗體檢測。

1 材料和方法

（1）2016年3～12月，采集青海省6個規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場和11戶散養(yǎng)戶的血清樣品共計559份。牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒為美國IDEXX公司產(chǎn)品；ELx800酶標儀為美國BIOtek公司產(chǎn)品。

（2）檢測方法。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書操作，首先在96孔酶標板每個孔加100μL樣品稀釋液，之后檢測孔加25μL血清樣品，陽性對照孔和陰性對照孔各加25μL陽性和陰性對照血清，加完后在室溫下作用90分鐘，之后棄去酶標板液體，每孔加300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。在每個酶標孔加100μL酶標抗體，室溫下作用30分鐘，之后棄去酶標板液體，每孔加300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。每孔加100μL TMB底物，室溫下避光10分鐘顯色，之后每孔加100μL終止液終止反應(yīng)，酶標儀在450nm波長讀數(shù)，記錄分析檢測結(jié)果。

（3）結(jié)果判定。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書要求，陰性對照平均值≤0.25，陽性對照平均值－陰性對照平均值≥0.15試驗結(jié)果成立，計算檢測血清樣品的S/P值。公式為S/P=樣品OD值－陰性平均OD值/陽性平均OD值-陰性平均OD值。S/P≥0.3，檢測樣品為陽性；S/P＜0.2，檢測樣品為陰性；0.2≤S/P＜0.3，檢測樣品為可疑；可疑樣品需要重新檢測。

2 結(jié)果和分析

6個規(guī)模養(yǎng)殖場和11戶散養(yǎng)戶均存在BVDV抗體陽性牛。共計檢測559份樣品，陽性樣品202份，平均陽性率為36.14%。其中，6個規(guī)模牦牛場的BVDV血清抗體陽性率最高的為47.27%，最低的為16.67%，平均陽性率為34.19%。11戶散養(yǎng)戶的BVDV血清抗體陽性率最高的為57.89%，最低的為27.78%，平均陽性率為39.42%。散養(yǎng)戶與規(guī)模牛場相比，無論是最高陽性率，還是最低陽性率都高于后者，其中散養(yǎng)戶的平均陽性率較規(guī)模牛場高5.23個百分點。因采集血清樣品的牦牛養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶牛群均未免疫過BVDV疫苗，該抗體陽性表明均由BVDV野毒感染所致（見表1）。

表1 血清樣品抗體檢測結(jié)果

3 討論

BVDV是牛群普遍易感的疾病，也是危害養(yǎng)牛業(yè)最主重的疾病之一，BVDV抗體普查具有十分重要的意義。通過BVDV抗體普查，可以了解牛群BVDV感染情況。由于該病的臨床癥狀不明顯，有時還不表現(xiàn)臨床癥狀，在實際生產(chǎn)中常常不易診斷。從青海牦牛的血清BVDV抗體檢測結(jié)果可以看出，559份血清樣品的平均陽性率為36.14%，規(guī)模牦牛場的陽性率為34.19%，散養(yǎng)戶的陽性率為39.42%，散養(yǎng)戶的平均陽性率較規(guī)模牛場高5.23個百分點，說明青海牦牛中存在嚴重的BVDV感染，尤其是散養(yǎng)戶牛群的感染狀況更為嚴重。BVDV感染后能夠?qū)е略摬≡谂Ｈ褐袧摲腥?，引起免疫抑制，雖然暫時不發(fā)病，但在牛群受到刺激時引發(fā)急性發(fā)作。建議根據(jù)檢測結(jié)果對牛群進行凈化處理，對BVDV抗體陽性的牛逐漸予以淘汰，不能留作種用。本次牛群的血清學(xué)調(diào)查工作，為今后牛群的凈化奠定了基礎(chǔ)。

BVDV在牛群中的潛伏感染常常導(dǎo)致該病很難凈化。該病可以通過母牛垂直傳播，感染BVDV的母牛會出現(xiàn)產(chǎn)死胎及弱仔現(xiàn)象，嚴重影響規(guī)模養(yǎng)牛場的發(fā)展。首先要加強對新購牛的檢疫，最好堅持自繁自養(yǎng)，對引進的犢牛一定要做好BVDV抗體檢測工作，血清抗體檢測呈陰性方可飼養(yǎng)。防治BVDV最有效的手段就是牛群凈化，將BVDV陽性牛逐步淘汰。同時，加強飼養(yǎng)管理，經(jīng)常消毒，保持良好的環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常清理養(yǎng)牛場的糞便，保持牛舍通風(fēng)良好。該病重在預(yù)防，發(fā)病后目前主要采取對癥治療措施，及時補液防止脫水。

[1]殷震，劉景華主編.動物病毒學(xué)[M].第二版，北京：科學(xué)出版社，1997，688-690.

[2]蔡寶祥.動物傳染病學(xué)[M].第四版，北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001，300-301.

[3]王競晗，李素，何文瑞，等.進口胎牛血清中牛病毒性腹瀉病毒的分離及鑒定[J].中國生物制品學(xué)雜志，2016，29（3）：89-92.

[4]張國華，吳丹丹，周玉龍，等.牛病毒性腹瀉病毒黑龍江分離株的分離鑒定[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2015，37（10）：805-807.