張俊波，宋海燕，況 丹，翟志軍，胡頌平*，胡殿明*

（1.江西農(nóng)業(yè)大學 生物科學與工程學院，江西 南昌 330045；2.宜春職業(yè)技術(shù)學院 食用菌研究所，江西 宜春 336000）

江西盤革菌一新記錄種及其樟樹感染率調(diào)查

張俊波1，宋海燕1，況 丹2，翟志軍1，胡頌平1*，胡殿明1*

（1.江西農(nóng)業(yè)大學 生物科學與工程學院，江西 南昌 330045；2.宜春職業(yè)技術(shù)學院 食用菌研究所，江西 宜春 336000）

樟樹（Cinnamomumcamphora(L.)J.Presl）是重要的園林綠化樹種，同時具有材用、藥用、化工原料等重要用途。真菌是樟樹的重要病原體之一。從江西農(nóng)業(yè)大學校園內(nèi)樟樹表皮上采集到一種真菌，經(jīng)形態(tài)和分子鑒定，確定該真菌為刺絲盤革菌（Aleurodiscus mirabilis(Berk.&M.A.Curtis)H?hn.）。

擔子菌；盤革菌；真菌分類；分子系統(tǒng)學

樟樹 (Cinnamomumcamphora(L.)Presl.)又叫做香樟、烏樟、樟木等，隸屬樟科樟屬，是國家二級保護樹種，在江西全省范圍內(nèi)已推廣大量種植多年，資源豐富，具有極高的開發(fā)利用價值[1-2]。樟樹的真菌性病害種類較多，例如：囊孢殼菌、膠孢炭疽菌、芒果球座菌、外擔子菌等[3-6]。這些真菌性病害常常具有高發(fā)病率、高危害性等特點，造成江西乃至全國樟樹的嚴重病害。

本研究團隊于2015年冬季在江西農(nóng)業(yè)大學校園內(nèi)觀察到許多樟樹表皮長有一種粉紅色真菌，目測染菌率非常高。為保護校園及我國樟樹，亟需對該真菌進行鑒定。本研究就采于江西農(nóng)業(yè)大學校園內(nèi)表皮生真菌從形態(tài)特征和分子系統(tǒng)發(fā)育兩個方面加以研究，以精準鑒定該真菌，為樟樹真菌病防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2015年11月22日采摘于江西農(nóng)業(yè)大學校園內(nèi)樟樹表皮，用刀直接將樹表皮削下，標本保藏于江西農(nóng)業(yè)大學真菌標本館（HFJAU0106）。

1.2 形態(tài)觀察與鑒定

對采摘于江西農(nóng)業(yè)大學樟樹表皮的新鮮子實體標本做形態(tài)學觀察，先對其外部形態(tài)特征觀察記錄并進行描述，再使用顯微鏡對標本進行顯微結(jié)構(gòu)觀察，測量大小。在樟樹表皮采集已萌發(fā)的孢子顯微觀察其菌絲結(jié)構(gòu)，從而綜合完成形態(tài)觀察描述，依據(jù)相關(guān)文獻進行形態(tài)鑒定。

1.3 分子系統(tǒng)學研究

1.3.1 DNA提取、序列擴增與測序本研究中以子實體干標本為材料，總DNA采用酶法提取，破壁酶為lyticase（sigma:L4025），破壁后采用基因組 DNA提取試劑盒純化；PCR擴增引物為：ITS1 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)。

PCR擴增條件為95℃預(yù)變性5 min，94℃變性10 s，53℃退火10 s，72℃延伸30 s， 35個循環(huán)，72℃后延伸10 min，10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結(jié)果；電泳回收PCR產(chǎn)物，使用了2xTaq DNAPCR MasterMix（MT201）、瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒（DH101）回收PCR產(chǎn)物。

PCR產(chǎn)物送北京博邁德生物有限公司測序，使用美國ABI公司測序儀器(ABI 3030XL)，及測序試劑盒 (ABI BigDye Terminator v3.1)進行測序。

1.3.2 序列比對與系統(tǒng)樹構(gòu)建利用Clustal X軟件[7-23]，將本研究得到的序列與從GenBank中下載的本屬參考序列及外群序列(Heterobasidionparviporum)進行比對，視情況進行手工校正，使結(jié)果盡可能配對。利用軟件 PAUP*4.0b10[24]采用最大簡約法(mp)并經(jīng)1 000次 Bootstrap驗證，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，所有位點都作為無序、不加權(quán)處理，堿基缺失視為數(shù)據(jù)缺失[25]。利用Treeview軟件[26]顯示系統(tǒng)樹，并在 Adobe Illustrator CS3軟件中進行編輯。

2 結(jié)果與討論

2.1 分子系統(tǒng)學

Aleurodiscus屬系統(tǒng)樹（圖1)包括該屬13種共19個代表菌株以及一個外群Heterobasidionparviporum。通過比對并切除模糊區(qū)域后，序列共有611個位點。經(jīng)最大簡約法分析，共構(gòu)建4棵相似的系統(tǒng)發(fā)育樹，其中的一顆（Length=967，CI=0.601，RI=0.688，RC=0.413，HI=0.399）如圖1所示，系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，本研究采集的標本（HFIAU0106)與Aleurodiscus mirabilis(Berk.&M.A.Curtis)H?hn.種的另一個代表菌株（KU559350）聚于同一分枝，并且Bootstrap支持率達到100%。

2.2 系統(tǒng)分類

刺絲盤革菌（圖2）Aleurodiscus mirabilis(Berk.&M.A. Curtis)H?hn.,Sber.Akad.Wiss.Wien,Math.-naturw.Kl.,Abt.1 118:818(1909)。

擔子果小型至中等，一年生，平伏，邊緣卷起成盤狀，一般為數(shù)個連生，單生較少而小，新鮮時無嗅無味，革質(zhì)，干燥后變?yōu)槟舅ㄙ|(zhì)；新鮮時表面為橘紅色至桃紅色，邊緣顏色略淺，干后變?yōu)榈S色，光滑；單個菌盤直徑可達1~4 cm，厚度可達1~2 mm。形狀不規(guī)則，表面在解剖鏡下呈絨毛狀，顏色多樣，多為粉紅色，邊緣為白色，較柔軟；菌肉粉紅色，柔軟，較?。挥芍睆?5~21 μm桿狀細胞及長滿長2~10 μm小刺粗3~7 μm菌絲組成；亞子實層菌絲與菌肉菌絲相似，子實層中具大量刺囊體，通常呈棍棒狀，薄壁至厚壁，具各種分刺和分枝，有些分枝類似纏繞菌絲，大小為60～88 μm×15～21 μm；擔子棍棒形，具4個擔孢子梗，基部具一鎖狀聯(lián)合，大小為65～85 μm×15～25 μm；擬擔子占大多數(shù)，與擔子的形狀相似，擔子略大。孢子為橢圓形至半月形13~15 μm×30~33 μm，無色，表面被有細小絨毛，兩端都有突出，連接擔子端細長，另一端粗短。標本：中國江西省南昌市，江西農(nóng)業(yè)大學校園內(nèi)，樟樹樹干，張俊波，2015年11月22號，HFJAU0106。

已知分布：安徽[7]、廣東[7]、廣西[7-8]、海南[9]、吉林[10]、浙江[9,11-12]、澳大利亞[13]等地。生境：樟樹樹干表面。基質(zhì)：樟樹樹干表皮。

2.3 調(diào)查樟樹感染率

對江西農(nóng)業(yè)大學北區(qū)校園內(nèi)綠化樟樹進行初步統(tǒng)計，得到北區(qū)校園綠化總樟樹樹木為1 585棵，沒有感染刺絲盤革菌的有250棵，感染刺絲盤革菌的為1 335棵。從而得到江西農(nóng)業(yè)大學北區(qū)校園樟樹刺絲盤革菌感染率為84.23%，只有15.77%沒有被感染。通過觀察發(fā)現(xiàn)幼年的樟樹不易被感染，特別是直徑在10 cm左右的幼年樹基本沒有感染，而那些較大的樟樹基本全部感染且樹干上刺絲盤革菌子實體非常多。此調(diào)查發(fā)現(xiàn)刺絲盤革菌大量生長在樟樹的表皮，其感染率極高，對樹木健康造成了嚴重影響。

2.4 討論

本研究采集到的標本具有典型的盤革菌屬鈕扣狀至盤狀的形態(tài)、棍棒形擔子等結(jié)構(gòu)特征[7,13-14]。分子系統(tǒng)樹（圖1）表明，本研究所采集到的標本（HFIAU0106)與Aleurodiscus mirabilis(Berk.&M.A.Curtis) H?hn.種的另一個菌株(KU559350)聚于同一分枝，并且Bootstrap支持率達到100%，從而確定本研究所采集的標本為刺絲盤革菌。

很多文獻對刺絲盤革菌都有報道[7,10-20]，在中國藥用真菌圖志中對其有具體的形態(tài)描述，并對孢子、擔子、分枝菌絲等做了手繪圖[7]，分枝菌絲大小為35~52 μm×7~10 μm、擔子大小為68~83 μm×17～21 μm、擬擔子比擔子略小、擔孢子大小為23~27 μm×11～13.5 μm、子實體從春季到秋季菌出現(xiàn)[7]；在外文文獻中也對采集于日本刺絲盤革菌做出了報道，菌落大小1cm、擔孢子大小為31 μm×15 μm[15]；而本研究所采集的標本子實體較大直徑可達1~4 cm，分枝菌絲大小為60～88 μm×15～21 μm，擔子大小為65～85 μm×15～25 μm，孢子大小為13~15 μm×30~33 μm，相比較本研究的標本子實體更大，特征結(jié)構(gòu)基本形態(tài)相似但較大于報道，本研究標本子實體為冬季出現(xiàn)一年生，本研究采用顯微拍照記錄所有特征結(jié)構(gòu)真實的展示各個結(jié)構(gòu)，為刺絲盤革菌的分類學奠定基礎(chǔ)。

刺絲盤革菌在安徽、廣東、廣西、吉林、海南、浙江等地均有分布[7,10,20]，在澳大利亞等其它國家也有報道分布[12-14]，江西首次報道[21]，一些文獻定義其為一種木腐真菌，根據(jù)寄生于樹木樹干生長形成子實體從而影響樹木健康的樹干病害這一概念[22]，本研究標本采集于樟樹樹干可將刺絲盤革菌定義為樹干病害真菌。江西樟樹的種植面積較大，本研究為防治該菌所引起的病害奠定了基礎(chǔ)。在中國藥用真菌圖志中記載其也是一種藥用真菌[8]，具有抗細菌作用[7,16]。因此，本研究為刺絲盤革菌分類學研究以及防治病害奠定了基礎(chǔ)，后期應(yīng)該有更多的研究來更好的利用其藥用價值。

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Investigation into Newly Recorded Species of Aleurodiscus mirabilis and Its Infection Rate of Cinnamomum camphora

ZHANG Jun-bo1,SONG Hai-yan1,Shan Dan2,ZHAI Zhi-jun1, HU Song-ping1*,HU Dian-ming1*
(1.College of Biological Science and Engineering,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045, China;2.Institute of Edible Fungi,Yichun Vocational and Technical College,Yichun,Jiangxi 336000,China)

Cinnamomum camphora(L.)J.Presl is a kind of important landscape treesand also an important resource for timber,and pharmaceutical and chemical raw materials.Fungi are important pathogens of C. camphora.In this study,an epidermal fungus was collected from C.camphoraon in the campus of Jiangxi Agricultural University.Based on morphological and molecular data,the fungus was identified as Aleurodiscus mirabilis(Berk.&M.A.Curtis)H?hn.

Basidiomycetes;Aleurodiscus mirabilis;fungi classification;molecular systematic

Q949.32

A

2095-3704（2017）01-0036-05

10.3969/j.issn.2095-3704.2017.01.008

張俊波,宋海燕,況丹,等.江西盤革菌一新記錄種及其樟樹感染率調(diào)查[J].生物災(zāi)害科學,2017,40(1):36-40.

2016-12-14

江西省科技廳重點研發(fā)計劃項目（2016BBF60078）

張俊波，碩士，主要從事大型真菌資源調(diào)查與利用研究，1051263272@qq.com；*通信作者：胡頌平，教授，碩導(dǎo)，282004652@qq.com；胡殿明，副教授，碩導(dǎo)，hudianming1@163.com。