摘 要 白芨的藥用價值較高，在化妝品中使用廣泛，觀賞價值也較高。由于白芨種子自然萌發(fā)難度較大，且采用傳統(tǒng)的分株繁殖速度較慢，只有采用組織培養(yǎng)技術(shù)工廠化繁育苗木才可以滿足生產(chǎn)的需要。從白芨組織培養(yǎng)中外植體的選擇，生長調(diào)節(jié)劑對白芨組織培養(yǎng)的影響以及組培苗的煉苗等方面簡介白芨組織培養(yǎng)技術(shù)方面的研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞 白芨；組織培養(yǎng)；外植體；生長調(diào)節(jié)劑；煉苗

中圖分類號：Q813.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.1.025

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白芨（Bletilla striata），也叫白及，別名連及草、白給、白根、地螺絲、白雞娃、羊角七、紫蘭等，蘭科白芨屬多年生草本植物，是我國珍貴的藥用植物。目前已有研究證實，白芨用做醫(yī)藥具有收斂止血、清熱解毒、抗菌、抗腫瘤、消腫生肌促進(jìn)傷口愈合、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長等多項功能。用于化妝品，白芨的膠作為增稠劑、懸浮劑、保濕劑和助乳化劑具有良好的效果。同時，因為不同品種的白芨開出來的花顏色不同，有紫色、白色、黃色等，花成序狀具有極高的觀賞價值。目前白芨的市場前景較好，近兩年白芨的市場價格為450～550元/kg。但是因為白芨的自然繁殖周期長、難度大，因此野生白芨遭到了瘋狂的挖掘，野生資源遭到嚴(yán)重破壞，白芨現(xiàn)已被列為國家重點保護(hù)野生植物。因此如何大量人工繁殖白芨顯得尤為重要。目前主要采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行白芨的繁育，以期解決白芨出苗困難的問題。本文從白芨組織培養(yǎng)中外植體的選擇，生長調(diào)節(jié)劑對白芨組織培養(yǎng)的影響以及組培苗的煉苗等方面進(jìn)行闡述。

1白芨組織培養(yǎng)研究進(jìn)展

1.1白芨不同外植體組織培養(yǎng)研究

目前關(guān)于白芨組織培養(yǎng)外植體的選取主要包括白芨種子、假鱗莖、側(cè)芽、幼根和葉片等。但是采用白芨種子作為外植體的研究較多，究其原因主要在于白芨的蒴果中含有大量的種子，如果能夠消毒徹底就可以獲得較多的種苗，還有一個原因是白芨種子萌發(fā)后直接成為幼苗，而其他的為先是愈傷組織然后再成苗，相對而言種子的萌發(fā)更為快捷。韋卡婭等[1]的研究表明，選用白芨種子萌發(fā)比塊莖萌發(fā)需要的時間更短，形成叢生芽的概率更高；采用新種子比陳種子更容易萌發(fā)，且白芨種子不宜低溫保存，否則難以萌發(fā)。田翠英等[2]的研究表明，選取白芨的幼根作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)，添加不同的生長調(diào)節(jié)劑也可以產(chǎn)生愈傷組織。張豆豆等[3]的研究表明，選取白芨種子作為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基時白芨種子能夠啟動萌發(fā)。余朝秀等[4]采用白芨莖尖和側(cè)芽均培養(yǎng)出無菌苗。石云平等[5]以白芨側(cè)芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，成苗后經(jīng)煉苗移栽到大田，成活率達(dá)到了87.5%。張燕等[6-8]利用白芨的幼葉作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，均不能誘導(dǎo)出愈傷組織。石云平等[9]的研究結(jié)果中指出，白芨葉片雖然只在特定的培養(yǎng)基中可以誘導(dǎo)出愈傷組織，但是誘導(dǎo)率僅為3.3%。因此，白芨葉片不適宜作為外植體來進(jìn)行組培快繁。

1.2生長調(diào)節(jié)劑對白芨組培效果的影響

不同生長調(diào)節(jié)劑及其不同濃度在白芨植物組織培養(yǎng)的過程中作用有差異。張豆豆等[3]的研究表明，在培養(yǎng)基中分別添加濃度為1.0 mg/的6-BA和2 mg/L的2，4-D的時，對促進(jìn)幼苗的快速分裂生長和愈傷組織的形成有一定的作用。以原球莖為外植體，在MS基本培養(yǎng)基中添加2 mg/L的2，4-D和0.5 mg/L的6-BA，愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)到85%。1.0 mg/L的6-BA和0.15 mg/L的NAA配比，可以誘導(dǎo)叢生芽的生長和增殖；添加了70 g/L香蕉泥和0.5 mg/L NAA的1/2MS培養(yǎng)基可有效促進(jìn)根的生長。徐德林等[10]對白芨愈傷組織誘導(dǎo)、增殖和分化培養(yǎng)基中的最佳生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度配比進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：在MS中同時中添加6-BA和2，4-D時白芨愈傷的誘導(dǎo)率最高達(dá)89.89%，其中2，4-D是誘導(dǎo)白芨愈傷生成的關(guān)鍵生長調(diào)節(jié)劑，因為單添加6-BA時并不能誘導(dǎo)愈傷組織的生成，但是同時添加2，4-D和6-BA能有效促進(jìn)愈傷的誘導(dǎo)，且愈傷誘導(dǎo)率隨著2，4-D濃度的增加而逐漸增加，但優(yōu)質(zhì)愈傷率也隨之降低。在分化培養(yǎng)基中添加NAA和TDZ有利于白芨愈傷組織分化，分化率隨著二者濃度的增加而增加，且NAA的促分化效果優(yōu)于TDZ。楊舒婷等[11]以不同濃度的“6-BA+NAA”和“TDZ+NAA”對白芨增殖擴(kuò)繁的影響進(jìn)行研究，結(jié)果顯示白芨球莖在“3 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA”和“0.3 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA”培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)率能達(dá)到90%，增殖繁芽數(shù)目最多，增殖率高。代建麗等[12]研究植物生長調(diào)節(jié)劑和光照對白芨種子無菌萌發(fā)的影響，結(jié)果表明：種子分散良好，光照顯著促進(jìn)白芨種子的萌發(fā)，6-BA是影響種子萌發(fā)的主要因素，赤霉素對種子萌發(fā)作用不明顯。也有研究表明，生長調(diào)節(jié)劑對白芨種子的萌發(fā)作用不大，認(rèn)為白芨胚的薄壁細(xì)胞貯存大量的蛋白質(zhì)、油脂和碳水化合物，可作為種子萌發(fā)的營養(yǎng)成分，影響種子萌發(fā)的最主要因素是種子的成熟度和種子萌發(fā)時的濕度[13]，研究結(jié)論還需要進(jìn)一步驗證。

1.3不同培養(yǎng)基對白芨組織培養(yǎng)的影響

王楷等[14]研究表明，將在不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加6-BA及椰汁乳的培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌播種形成的白芨原球莖，轉(zhuǎn)到不同培養(yǎng)基上進(jìn)行擴(kuò)增繁殖，結(jié)果表明：種子萌發(fā)最佳培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基“1/2MS+6-BA 1.0 mg/L”，且添加10%的椰汁乳能提高萌發(fā)率，促進(jìn)原球莖的生長。宋志琴等[15]在培養(yǎng)基中添加不同的香蕉泥、馬鈴薯泥、胡蘿卜泥、番茄泥等后研究發(fā)現(xiàn)，不同添加物對白芨組培苗生長均有一定影響，其中以香蕉泥對白芨組培苗的生長影響最顯著，濃度為30 g/L和60 g/L時組培苗生長快速，苗整齊且粗壯，葉色嫩綠。魯光耀等[16]采用白芨種子為材料，在不同液體培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌播種，通過調(diào)節(jié)光照時長和pH來篩選白芨種子萌發(fā)的最佳條件，結(jié)果表明白芨最佳液體快速繁殖條件為：MS液體培養(yǎng)基，12 h光照時長，pH值5.8～6.5；誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均可以用MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。李雨晴等[17]的研究表明，1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加生長調(diào)節(jié)劑后有利于種子萌發(fā)；添加椰汁有利于誘導(dǎo)原球莖。

1.4白芨煉苗移栽

白芨組培苗在移入大田栽植前需要進(jìn)行煉苗，一般當(dāng)組培苗產(chǎn)生了假鱗莖且生根后方可移栽。適合白芨組培苗煉苗的基質(zhì)：腐殖土、珍珠巖、蛭石、河沙配比為5∶2∶2∶1[18]。余朝秀[4]的研究表明，移栽基質(zhì)宜選取碎磚、蕨根、碎炭、粗椰糠混合?；|(zhì)用黃土-炭渣-椰殼（2∶2∶1），珍珠巖-泥炭土（1∶3），以及袁寧等的實驗中應(yīng)用的“60%腐葉土+30%珍珠巖+10%素紅土”等都能使移栽的成活率達(dá)到90%以上[19]；而移栽的季節(jié)需盡量選在春季，氣溫逐漸回升有利試管苗適應(yīng)自然環(huán)境，最宜移栽[20]，如在冬季煉苗則必須加溫。曹倩等[21]的研究表明，將白芨組培苗開瓶鍛煉6 d，然后采用水苔為有機(jī)介質(zhì)，珍珠巖、營養(yǎng)土比例1∶1為無機(jī)介質(zhì)，及去頂處理的組培苗移栽成活率較高，生長情況較好。孟彪等[22]的研究表明，透氣又保水的移栽基質(zhì)有利于白芨組培苗的成活。

2前景和展望

白芨的藥用價值較高，在化妝品中使用廣泛，觀賞價值也較高。由于白芨自然萌發(fā)難度較大，且采用傳統(tǒng)的分株繁殖速度較慢，只有采用組織培養(yǎng)技術(shù)工廠化繁育苗木才可以滿足生產(chǎn)的需要。目前人工栽培白芨逐漸興起，因此市場對白芨種苗的需求也在不斷擴(kuò)大。白芨在今后的藥材產(chǎn)業(yè)發(fā)展中具有一定的優(yōu)勢，可以大規(guī)模生產(chǎn)滿足市場的需求。但是白芨組培苗價格偏高，在實際的生產(chǎn)中應(yīng)用還需解決價格這個主要的問題，而要降低組培苗成本還需從白芨工廠化育苗技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行探索，加大優(yōu)良品種資源的選育和供應(yīng)，以便適應(yīng)市場的需求。

參考文獻(xiàn)：

[1]韋卡婭，劉燕琴，秦靜，等.白芨組培外植體的篩選研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2008，10（5）：13-14.

[2]田翠英，袁雄強(qiáng).白芨組織快繁技術(shù)研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（4）：75-77.

[3]張豆豆，彭曉英，朱永州，等.白芨的離體培養(yǎng)[J].湖南林業(yè)科技，2016，43（5）：47-51.

[4]余朝秀，李枝林，王玉英.野生白芨組培快繁技術(shù)研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2005，27（5）：601-604.

[5]石云平，李鋒，凌征柱.白芨組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，40（11）：1408-1410.

[6]張燕，黎斌，李汝娟，等.白芨種子的無菌萌發(fā)過程觀察和組培快繁研究[J].北方園藝，2013（3）：158-160.

[7]雷湘，黃夢瑤，昌艷霞，等.白芨幼根組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].中國藥師.2014，17（4）：613-614.

[8]劉軍凱.白芨細(xì)胞懸浮體系的建立及其次生代謝產(chǎn)物的測定[D].昆明：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[9]徐德林，沈訪，錢剛，等.不同生長調(diào)節(jié)劑配比對白芨愈傷組織誘導(dǎo)、增殖和分化的影響[J].北方園藝，2016（12）：157-161.

[10]楊舒婷，王華新，陳爾，等.不同生長調(diào)節(jié)劑配比的培養(yǎng)基對白芨增殖擴(kuò)繁的影[J].廣西林業(yè)科學(xué)，2016，45（2）：208-211.

[11]代建麗，張露，郭鮮浦，等.赤霉素及光照對白芨種子無菌萌發(fā)的影響[J].種子，2016（7）：18-21.

[12]郭順星，徐錦堂.白芨種子染菌萌發(fā)過程中細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化的研究[J].植物學(xué)報，1990，32（8）：594-598.

[13]王楷，李玥，張云峰，等.白芨種子的高效萌發(fā)及其無性繁殖體系的構(gòu)建[J].云南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2014（4）：71-78.

[14]宋智琴，楊平飛，羅鳴，等.不同添加物對白芨組培壯苗培養(yǎng)的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（3）：138-140.

[15]魯光耀，楊仙，蔣瑞彬，等.白芨組培快速繁殖體系研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015（5）：383-390.

[16]李雨晴，楊嘉偉，王康才，等.白芨種子無菌萌發(fā)特性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（4）：253-255.

[17]云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院花卉研究所.白芨規(guī)范化栽培技術(shù)[J].農(nóng)村實用技術(shù)，2015（3）：33-34.

[18]余朝秀，李枝林，王玉英.野生白芨組培快繁技術(shù)研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2005，27（5）：601-604.

[19]袁寧，何銳，李萍，等.白芨組織快繁育苗技術(shù)研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，22（3）：781-785.

[20]蒙愛東.石斛試管苗快速繁殖研究概況[J].廣西科學(xué)院學(xué)報，1996，12（4/3）：35-39.

[21]曹婧，李婷，包彩云，等.白芨組培苗移栽馴化技術(shù)研究[J].內(nèi)江師范學(xué)院學(xué)報，2015，30（4）：39-41.

[22]孟彪，苗桂林，許東東，等.白芨組培苗移栽技術(shù)研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，12（2）：56-58.

（責(zé)任編輯：丁志祥）