趙 鳳,周 洲,*,李小義,孔 杰,楊秋紅,劉永濤

(1.貴州省水產(chǎn)研究所,貴州貴陽 550025;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部淡水魚類種質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心,湖北武漢 430223)

恩諾沙星及代謝物在西伯利亞鱘疾病模型內(nèi)的藥動學(xué)及殘留消除規(guī)律

趙 鳳1,周 洲1,*,李小義1,孔 杰1,楊秋紅2,劉永濤2

(1.貴州省水產(chǎn)研究所,貴州貴陽 550025;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部淡水魚類種質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心,湖北武漢 430223)

采用高效液相色譜法,研究了20 ℃條件下人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘口灌恩諾沙星(劑量10 mg/kg)后,其血液中藥代動力學(xué)規(guī)律,采用藥代動力學(xué)軟件3p97對藥物濃度時間數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。結(jié)果表明,恩諾沙星及代謝物環(huán)丙沙星在感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘體內(nèi)的藥時量曲線關(guān)系符合二室模型,達(dá)峰時間Tmax分別為0.37 h和1.12 h;峰濃度值Cmax分別為0.329和0.164 mg/L;表觀分布容積Vd分別為40.12和49.239 L/kg,吸收半衰期T(1/2)α分別為5.732和8.17 h;消除半衰期T(1/2)β分別為45.131和40.521 h。與健康西伯利亞鱘相比,恩諾沙星及代謝物在受感染的西伯利亞鱘體內(nèi),吸收相對緩慢,消除也慢。恩諾沙星在疾病模型西伯利亞鱘肝臟和肌肉中的消除方程分別為:C=0.13e-0.005t,C=2.31e-0.006t;R2≥0.825;環(huán)丙沙星在疾病模型西伯利亞鱘肝臟和肌肉中的的消除方程分別為:C=4.412e-0.007t;C=4.915e-0.004t;R2≥0.758。

恩諾沙星,西伯利亞鱘,疾病模型,藥動學(xué)

鱘魚是一種珍貴的稀有魚,具有重要的經(jīng)濟(jì)價值和藥用價值。近年來,隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,由于高密度養(yǎng)殖、投喂率增加、消毒劑和藥物濫用以及不適當(dāng)?shù)墓芾矸椒ǖ?使得養(yǎng)殖環(huán)境日益惡化,病害頻繁發(fā)生且日趨嚴(yán)重,尤其是由氣單胞菌屬細(xì)菌引起的鱘魚氣單胞菌病危害最為嚴(yán)重,每年給養(yǎng)殖從業(yè)者帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重阻礙鱘魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

恩諾沙星(enrofloxacin,EF)作為動物專用的喹諾酮類抗菌藥物,已廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖動物感染性疾病的預(yù)防和治療[1]對鱘魚氣單胞菌有很好的治療作用,但長期使用后,藥物殘留問題也越來越突出[2]。國內(nèi)外關(guān)于恩諾沙星在健康水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥動學(xué)研究很多,然而在患病鱘魚體內(nèi)的藥動學(xué)還未見報道。疾病會導(dǎo)致動物的機(jī)體發(fā)生變化,影響藥物的吸收代謝[3],因此研究患病狀態(tài)下的藥動學(xué)可以更好的為水產(chǎn)動物合理用藥提供科學(xué)依據(jù)[4]。本實(shí)驗(yàn)以在建立的人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘模型下,研究了疾病模型下的藥動學(xué)及殘留消除規(guī)律,闡明了健康與感染的動物的藥動學(xué)差異,為合理用藥提供更好的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

嗜水氣單胞菌(A.hydrophila) 中國普通微生物菌種保藏管理中心;西伯利亞鱘 由貴州省水產(chǎn)研究所惠水基地提供,平均體重為(40±10) g,實(shí)驗(yàn)前在水族箱內(nèi)(60 cm×80 cm×40 cm)暫養(yǎng)一周,實(shí)驗(yàn)用水為曝氣48 h自來水,連續(xù)充氧,保持水中溶氧大于6.0 mg/L,溫度為20 ℃;乙腈、正己烷、質(zhì)譜水 美國CNW公司,色譜純;無水硫酸鈉、磷酸、三乙胺 國藥集團(tuán)化學(xué)有限公司,分析純;恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品、環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品 Dr. Ehrenstorfer GmbH,純度>99.0%;恩諾沙星原粉 浙江國邦藥業(yè)有限公司,有效成分94%;血液生化指標(biāo)試劑盒 南京建成生物工程研究所。

高效液相色譜 美國Waters公司;精密電子天平 梅特勒-托利多公司;自動高速冷凍離心機(jī) 日本HITACH公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Heidolph公司;氮吹儀 杭州奧盛儀器有限公司;渦旋混合器 北方同正。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 人工感染、實(shí)驗(yàn)采樣 將嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)接種于LB平皿培養(yǎng)基上,30 ℃培養(yǎng)18 h后,離心,除去上清液,然后用PBS溶液制成含量為1.5×108～1012cfu/mL的菌懸液備用。實(shí)驗(yàn)分為感染組和對照組,感染組設(shè)菌液1.5×108、1.5×109、1.5×1010、1.5×1011、1.5×1012cfu/mL五個濃度,每個濃度30條西伯利亞鱘,對照組為30條。采用腹腔注射法,對感染組健康的西伯利亞鱘臀鰭靠腹部注射0.3 mL的菌懸液,對照組注射等量PBS溶液,注射24 h后觀察西伯利亞鱘的發(fā)病癥狀及死亡癥狀,連續(xù)觀察7 d,如果有死亡的西伯利亞鱘,對其解剖觀察并分離和鑒定病原菌類型。實(shí)驗(yàn)7 d結(jié)束后,分離未發(fā)生死亡的各個濃度組的血液的血清,每個濃度隨機(jī)取5條魚,采用試劑盒分析各個濃度組的血清總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶等生化指標(biāo)的變化水平。最佳的感染濃度為可以引起西伯利亞鱘發(fā)病但不能致其死亡的菌濃度,取具有典型嗜水氣單胞菌癥狀的西伯利亞鱘進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[5-6]。

實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)養(yǎng)魚房進(jìn)行,每個水族箱放養(yǎng)西伯利亞鱘10尾左右。稱取恩諾沙星原粉100 mg,用5%冰醋酸溶解后,定容至100 mL,此時恩諾沙星(EF)含量為1 mg/mL,使用10 mg/kg的劑量口灌給藥。在給藥0、15、30 min、1、2、4、6、8、10、12、24、48、96、144、192、288 h采集血液、肝臟、肌肉樣品。每個時間點(diǎn)取5尾西伯利亞鱘作為平行樣,分別取血液、肌肉和肝臟,保存于-20 ℃。

1.2.2 樣品處理 準(zhǔn)確稱取肌肉、肝臟樣品1.00 g(血液1.00 mL),依次加入3 g無水硫酸鈉和3 mL酸化乙腈,用渦旋儀混勻后,超聲5～10 min,8000 r/min離心5 min,去上層清液。往殘渣中繼續(xù)加3 mL酸化乙腈,重復(fù)操作,合并上層清液,于55 ℃氮吹儀上氮吹至干。用1.0 mL流動相充分溶解,渦旋并離心后,經(jīng)0.22 μm微孔過濾膜過濾后,供高效液相色譜儀測定。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 準(zhǔn)確稱取0.020 g恩諾沙星和環(huán)丙沙星,用乙腈稀釋,并定容至100 mL,配制成200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。配制時使用棕色容量瓶,低溫避光儲存,有效期為6個月。將恩諾沙星和環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)儲備液用流動相依次稀釋,配制恩諾沙星和環(huán)丙沙星濃度為5、10、20、50、100、200、500、1000、2000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用高效液相色譜熒光檢測器分析檢測,以峰面積為縱坐標(biāo),以藥物濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

1.2.4 回收率、精密度和檢測限 空白魚組織加入一定量的恩諾沙星、環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 mg/L),放置至少30 min,每個樣品同時做7個平行。再按照樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣,分別計算組織中恩諾沙星和環(huán)丙沙星的含量?？瞻讟悠分刑砑拥亩髦Z沙星和環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)液使其最終的質(zhì)量濃度分別為:1、5、20、100 μg/kg。樣品中實(shí)際測得的藥物濃度與添加的藥物濃度的比值為相對回收率。所有樣品在一天內(nèi)5個不同時間點(diǎn)重復(fù)測試,連續(xù)測試3 d,計算各組織中的恩諾沙星、環(huán)丙沙星的日內(nèi)精密度和日間精密度。以引起3倍基線噪音的藥量的質(zhì)量濃度作為最低檢測限。

1.2.5 色譜條件 色譜柱:反相色譜柱C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:乙腈∶磷酸三乙胺=15∶85(V/V);流速0.85 mL/min;激發(fā)波長280 nm,發(fā)射波長450 nm;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2016進(jìn)行記錄,分析藥物濃度與時間的關(guān)系,并繪制藥時曲線,初步確定藥物在體內(nèi)的代謝過程。使用藥動學(xué)軟件3p97對藥動學(xué)模型進(jìn)行擬合并計算相關(guān)系數(shù)。消除方程采用C=C0e-kt,C表示藥物濃度,C0為殘留消除對數(shù)曲線的截距(μg/kg或ng/mL),k表示消除速率常數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線

在該條件下,恩諾沙星(20 ng/mL)和環(huán)丙沙星(30 ng/mL)保留時間分別為10.21 min和14.32 min。色譜圖如圖1所示。

圖1 恩諾沙星及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 The standard chromatogram of enrofloxacin and its metabolites

恩諾沙星和環(huán)丙沙星的標(biāo)準(zhǔn)溶液在5～2000 ng/mL質(zhì)量濃度(X)與峰面積(Y)的線性回歸方程分別為Y=50.21X+0.39,Y=4032X+0.18,相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.9995和R2=0.9999,相關(guān)性良好。

表2 西伯利亞鱘的血液生化指標(biāo)

注:*表示同列數(shù)據(jù)具有顯著性差異(p<0.05)。

表3 組織中的恩諾沙星、環(huán)丙沙星的回收率和精密度

2.2 嗜水氣單胞菌人工感染濃度的確定

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示1.5×1010、1.5×1011、1.5×1012cfu/mL嗜水氣單胞菌會不同程度的引起魚體死亡,見表1,而且作者從死亡魚體中又分離到了與原攻毒的嗜水氣單胞菌菌株。而1.5×108、1.5×109cfu/mL嗜水氣單胞菌雖都未引起西伯利亞鱘死亡,但只有1.5×109cfu/mL嗜水氣單胞菌感染組引起魚體血清總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶這些生化指標(biāo)的顯著性變化,見表2。因此,將1.5×109cfu/mL作為人工感染西伯利亞鱘的最佳嗜水氣單胞菌濃度。

表1 西伯利亞鱘人工感染嗜水氣單胞菌的死亡情況

總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)移酶等血液生化指標(biāo)可以作為衡量機(jī)體健康與否的依據(jù)。當(dāng)肝功能受損時,體內(nèi)白蛋白的含量下降,總蛋白、谷丙轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶升高[7-8]。本研究發(fā)現(xiàn),西伯利亞鱘人工感染后,肝功能受損,其中血清總蛋白、谷丙轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)移酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶含量顯著上升,白蛋白的含量顯著下降。郭松林[9]等研究了患?xì)鈫伟〉聂~體的肝腎病變情況,與作者研究結(jié)論相同。

2.3 回收率與精密度

各組織中恩諾沙星和環(huán)丙沙星的回收率、精密度結(jié)果見表3。由表3中可以看出血漿、肝臟、肌肉中恩諾沙星和環(huán)丙沙星的回收率大部分在85%以上;恩諾沙星和環(huán)丙沙星在血漿、肝臟、肌肉中日內(nèi)、日間精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。這說明此實(shí)驗(yàn)方法檢測恩諾沙星和環(huán)丙沙星回收率高而且穩(wěn)定。各組織中恩諾沙星和環(huán)丙沙星的檢測限為5.0 μg/kg和1.0 μg/kg。

2.4 恩諾沙星在人工感染細(xì)菌性疾病的西伯利亞鱘肝臟和肌肉中的殘留消除規(guī)律

恩諾沙星以10 mg/kg劑量對人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘口灌給藥后,肌肉和肝臟中恩諾沙星濃度隨時間的變化關(guān)系見圖2。給藥后,肌肉和肝臟中恩諾沙星的吸收和消除情況大致相同,都是先上升后下降然后出現(xiàn)一個小的波動后,再逐漸平穩(wěn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,恩諾沙星在肌肉中第2 h即達(dá)最高(Cmax為0.824 mg/kg),在肝臟中第1 h即達(dá)到藥峰(Cmax為0.941 mg/kg)。數(shù)據(jù)經(jīng)處理后,得到肝臟和肌肉中藥物濃度與時間關(guān)系的消除方程、相關(guān)系數(shù)及消除半衰期:肝臟C=0.13e-0.005t(R2=0.885),消除半衰期T(1/2)β為300.194 h;肌肉C=2.31e-0.006t(R2=0.825),消除半衰期T(1/2)β為402.987 h;從圖2中還可以看出,肝臟和肌肉的藥物濃度都比較低,與本文作者已經(jīng)研究的恩諾沙星在健康的西伯利亞鱘[10]體內(nèi)的數(shù)據(jù)相比較,在患病條件下的西伯利亞鱘對藥物的吸收和消除變慢。

圖2 人工感染條件下口灌給藥后組織中恩諾沙星的藥時曲線Fig.2 Tissue enrofloxacin concentration-time profile following oral administration

關(guān)于恩諾沙星在水產(chǎn)動物體內(nèi)的殘留消除規(guī)律,國內(nèi)研究的比較多,如王洪艷[11]等人研究了恩諾沙星及其代謝物環(huán)丙沙星在牙鲆體內(nèi)代謝消除規(guī)律,研究結(jié)果表明恩諾沙星在牙鲆體內(nèi)的代謝緩慢,脫乙基代謝只是在一段時間發(fā)生。張德云[12]等人研究了恩諾沙星在日本鰻鱺體內(nèi)殘留消除規(guī)律,得出恩諾沙星在肌肉中的殘留要到90 d后才消除。但是很多研究[13-16]都是在健康的水產(chǎn)動物體內(nèi),而在實(shí)際生產(chǎn)中,藥物是在患病條件下使用的,所以本文在構(gòu)建疾病模型的基礎(chǔ)上,研究了恩諾沙星及其代謝物在疾病模型下的殘留消除規(guī)律,研究結(jié)果表明,恩諾沙星在肝臟中的消除半衰期在12 d以上,在肌肉中的半衰期在16 d以上,相比在健康的西伯利亞鱘[10]體內(nèi)半衰期要長48 h,所以建議休藥期的制定參考患病條件下的藥時數(shù)據(jù)。

2.5 環(huán)丙沙星在人工感染細(xì)菌性疾病的西伯利亞鱘肝臟和肌肉中的殘留消除規(guī)律

恩諾沙星以10 mg/kg劑量對人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘口灌給藥后,肌肉和肝臟中恩諾沙星代謝物環(huán)丙沙星的濃度隨時間的變化關(guān)系見圖3。給藥后,肌肉和肝臟中恩諾沙星的吸收和消除完全不同,肝臟中環(huán)丙沙星濃度在15 min迅速達(dá)到峰值然后下降,在7.5 h時又出現(xiàn)一個峰值,而肌肉中藥物濃度是先上升后下降,再逐漸平穩(wěn)。數(shù)據(jù)經(jīng)處理后,得到肝臟和肌肉中藥物濃度與時間關(guān)系的消除方程、相關(guān)系數(shù)及消除半衰期:肝臟C=4.412e-0.007t(R2=0.758),消除半衰期T(1/2)β為148.4 h;肌肉C=4.915e-0.004t(R2=0.805)消除半衰期T(1/2)β為219.904 h;從中還可以看出,給藥后,恩諾沙星首先在肝臟中代謝為環(huán)丙沙星,然后逐漸吸收,隨著代謝的持續(xù),出現(xiàn)另一個峰值,而在肌肉中恩諾沙星代謝為患病沙星的吸收較少,出現(xiàn)峰值后,消除也比較緩慢。

圖3 人工感染條件下口灌給藥后組織中環(huán)丙沙星的藥時曲線Fig.3 Tissue ciprofloxacin concentration-time profile following oral administration

章海鑫[17]等人在研究雙氟沙星在人工感染嗜水氣單胞菌的異育銀鯽藥動學(xué)時發(fā)現(xiàn),藥物在人工感染的異育銀鯽體內(nèi)的吸收、分布、代謝、消除等減慢。趙青松[18]等人在研究氟苯尼考在三疣梭子蟹疾病模型內(nèi)的代謝動力學(xué)時發(fā)現(xiàn),患病體內(nèi)各組織中氟苯尼考的達(dá)峰時間、半衰期等延長,表觀分布容積和藥時曲線面積增大。而國外Uno[19]的研究不同,他認(rèn)為OTC在健康和患病的香魚體內(nèi)的消除半衰期差不多,只是與健康魚相比,生物利用度有所下降。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果,通過比較健康[10]和人工感染嗜水氣單胞菌西伯利亞鱘體內(nèi)的藥動學(xué)數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)與健康組相比較,恩諾沙星及代謝物環(huán)丙沙星的吸收和消除減慢,達(dá)峰時間、半衰期延長,表觀分布容積、藥時曲線面積變大,最高藥物總體清除率下降。這與Ferran[20]等和Kesteman[21]等的研究類似,動物感染部位的菌量會影響藥物藥動學(xué)參數(shù)。也與劉彥[22]等人的研究達(dá)氟沙星在患病牙鲆中的總體消除率下降結(jié)果類似。大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明,疾病會使得動物的機(jī)體發(fā)生變化,肝受損,進(jìn)而影響藥物的吸收和代謝。

2.6 恩諾沙星及其代謝物環(huán)丙沙星在人工感染西伯利亞鱘和健康體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征比較

關(guān)于恩諾沙星在疾病模型水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥動學(xué),國內(nèi)報道較少。本實(shí)驗(yàn)以恩諾沙星10 mg/kg劑量對人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘口灌給藥后,藥時數(shù)據(jù)用3P97藥物代謝動力學(xué)軟件分析,血漿中恩諾沙星和環(huán)丙沙星藥物濃度時間關(guān)系符合有吸收二室模型,恩諾沙星和環(huán)丙沙星的藥動學(xué)方程分別為:C=0.928e-0.160t+0.257e-0.0115t-1.185e-12.481t(R2=0.902)和C=0.676e-0.0848t+0.00162e-0.00412t-0.682e-0.120t(R2=0.881)。藥物代謝動力學(xué)參數(shù)結(jié)果見表4。

表4 恩諾沙星及代謝物環(huán)丙沙星在健康和感染西伯利亞鱘體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)參數(shù)

注:A,B為藥時曲線對數(shù)圖上曲線在橫軸和縱軸上的截距;α,β分別為分布相、消除相的一級速率常數(shù);K21由周邊室向中央室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級速率常數(shù);K10由中央室消除的一級速率常數(shù);K12由中央室向周邊室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級速率常數(shù);Vd表觀分布容積;AUC藥-時曲線下面積;Lag time滯后時間;Ka為一級吸收速率常數(shù);T(1/2)Ka為藥物在中央室的吸收半衰期;T(1/2)α、T(1/2)β分別為總的吸收和消除半衰期;Tmax出現(xiàn)最高血藥質(zhì)量濃度的時間;Cmax最高血藥質(zhì)量濃度;CL為總體清除率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在血漿中,與健康組藥動學(xué)數(shù)據(jù)相比較,恩諾沙星的達(dá)峰時間Tmax由0.25 h升至0.365 h,峰濃度值Cmax值由1.119 mg/L降至0.329 mg/L,表觀分布容積Vd由26.219 L/kg增至40.12 L/kg,吸收半衰期T(1/2)α由3.643 h推遲至5.732 h;消除半衰期T(1/2)β由32.046 h推遲至45.131 h。環(huán)丙沙星的達(dá)峰時間Tmax由0.5 h降至1.123 h,峰濃度值Cmax值由0.089 mg/L增為0.164 mg/L,吸收半衰期T(1/2)α由7.643 h推遲至8.17 h;消除半衰期T(1/2)β由32.046 h推遲至40.521 h。這與章海鑫[17]、劉彥[22]等的研究結(jié)果相同,與健康的藥動學(xué)數(shù)據(jù)相比較,患病體內(nèi)的藥動學(xué)數(shù)據(jù)都發(fā)生了變化。除了水產(chǎn)動物,也有學(xué)者研究了小鼠、雞、牛等的健康與疾病的藥動學(xué)比較,如瞿穎[23]等人研究馬坡沙星在健康和感染多殺性巴氏桿菌小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)比較,研究結(jié)果表明感染組能顯著改變馬坡沙星在動物體內(nèi)的分布、消除和代謝。薛偉芳[24]的研究結(jié)果顯示,靜注給藥后,與健康組相比,感染組的甲砜霉素在體內(nèi)的消除率降低。劉滌潔[25]的研究結(jié)果靜注給藥的金黃色葡萄球菌感染組比健康組藥物消除減慢。

這表明,恩諾沙星在感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘體內(nèi)的吸收和消除速度減慢、半衰期延長、達(dá)峰時間延遲、表觀分布容積和藥時曲線下面積變大,說明疾病條件能顯著改變藥物在西伯利亞鱘體內(nèi)的吸收、消除過程。

3 結(jié)論

嗜水氣單胞菌人工感染西伯利亞鱘后,肝功能受損,血液的生化指標(biāo)發(fā)生了變化,因此可以將1.5×109cfu/mL作為感染濃度,建立疾病模型。

在20 ℃條件下人工感染嗜水氣單胞菌的西伯利亞鱘,然后以10 mg/kg計量口灌恩諾沙星,其藥動學(xué)數(shù)據(jù)表明符合有吸收二室模型。與健康西伯利亞鱘相比,恩諾沙星及代謝物在受感染的西伯利亞鱘體內(nèi),吸收相對緩慢,消除也慢。因?yàn)樗幬锸窃隰~體患病條件下使用的,所以建議休藥期依據(jù)疾病模型下的藥物學(xué)數(shù)據(jù)。

[1]劉開永,汪開毓.恩諾沙星在水產(chǎn)中的應(yīng)用與研究[J].中國獸藥雜志,2004,38(10):32-34.

[2]宋紅波,吳光紅,沈美芳,等.恩諾沙星在水產(chǎn)品中殘留的風(fēng)險評估[J].漁業(yè)現(xiàn)代化,2008,35(5):39-42.

[3]Baggot J D. Distribution of antimicrobial agents in normal and diseased animals[J]. J Am Vet Med Assoc,1980,176(10):1085-1090.

[4]Plakas S M,El Said K R,Musser S M.Pharmacokinetics,tissue distribution,and metabolism of flumequine in channel catfish(Ictaluruspunctatus)[J].Aquaculture,2000,187(1/2):1-14.

[5]秦方錦.氟苯尼考在健康和弧菌感染梭子蟹體內(nèi)的藥動學(xué)比較研究[D].寧波:寧波大學(xué),2009.

[6]李圓圓,曹海鵬,鄧璐,等.西伯利亞鱘源嗜水氣單胞菌致病菌的分離及其全菌苗的免疫效果[J].動物學(xué)雜志,2008,43(6):1-9.

[7]金珊,王國良,趙青松,等.鱸細(xì)菌性類結(jié)節(jié)病的病原及血液病理研究[J].水產(chǎn)學(xué)報,2004,28(6):703-708.

[8]周玉,郭文場,楊振國,等.歐洲鰻鱺 “狂游病”血液生化指標(biāo)研究[J].水生生物學(xué)報,2002,26(3):314-316.

[9]郭松林,關(guān)瑞章,馮建軍,等.嗜水氣單胞菌感染對美洲鰻鱺血液和生化指標(biāo)的影響[J].集美大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,14(2):93-97.

[10]趙鳳,周洲,李小義,等. 恩諾沙星及代謝物在健康西伯利亞鱘體內(nèi)的藥動學(xué)研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2017,30(4).

[11]王洪艷,李兆新,邢麗紅,等.恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星在牙鲆體內(nèi)代謝消除規(guī)律[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展,2014,35(3):44-49.

[12]張德云,匡維華,鄭映欽.恩諾沙星在日本鰻鱺體內(nèi)殘留消除規(guī)律研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2007,26(4):210-213.

[13]Intone L,Cechini S,Bertini S.Pharmacokinetics of enrofloxacin in the seabass[J].Aquaculture,2000,182:49-59.

[14]Rocca G,Della A D,Salvo J,et al The disposition of enrofloxacin in sea bream of after single intravenous injection of from medicated feed administration[J].Aquaculture,2004,32(7):53-62.

[15]李娜,李健,王群.恩諾沙星在養(yǎng)殖大菱鲆體內(nèi)的殘留及消除規(guī)律[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展,2009,30(2):26-33.

[16]徐維海,林黎明,朱校斌,等.恩諾沙星及其代謝產(chǎn)物在吉富羅非魚、中國對蝦體內(nèi)的殘留規(guī)律研究[J].水產(chǎn)科學(xué),2004,23(7):5-8.

[17]章海鑫,曹海鵬,阮記名,等.雙氟沙星在人工感染嗜水氣單胞菌的異育銀鯽體內(nèi)的藥代動力學(xué)[J].動物學(xué)雜志,2012,47(6):72-77.

[18]趙青松,金珊,陳寅兒,等.氟苯尼考在三疣梭子蟹疾病模型內(nèi)的代謝動力學(xué)[J].海洋與湖沼,2014,45(3):568-573.

[19]Uno K. Pharmacokinetic study of oxytetracycline in healthy and vibriosis-infected ayu(Plecoglossusaltivelis)[J]. Aquaculture,1996,143(1):33-42.

[20]Freeman A A,KESTEMAN A S,TOUTAIN P L,et al. Pharmacokinetic/pharmacodynamic analysis of the influence of inoculum size on the selection of resistance inEscherichiacoliby a quinolone in a mouse thigh bacterial infection model[J]. Antimicrob Agents Chemother,2009,53(8):3384-3390.

[21]Keshena A S,Fran A A,Perringuyomar D A,et al. Influence of inoculum size and marbofloxacin plasma exposure on the amplification of resistant subpopulations ofKlebsiellapneumoniaein a rat lung infection model[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(11):4740-4748.

[22]劉彥,李健,王群,等,達(dá)氟沙星在健康和鰻弧菌感染牙鲆體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)比較[J].水產(chǎn)學(xué)報,2006,30(4):509-514.

[23]瞿穎,盧燕,孫美珍,等,馬坡沙星在健康小鼠和感染多殺性巴氏桿菌小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)比較[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2016,37(2):14-19.

[24]薛偉芳.甲砜霉素在健康及多殺性巴氏桿菌感染雞的藥動學(xué)[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2008.

[25]劉滌潔,馮淇輝,陳杖榴.恩諾沙星在健康及實(shí)驗(yàn)性感染乳房炎奶山羊間的比較藥動學(xué)[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2003,36(9):1100-1104.

Pharmacokinetics of enrofloxacin and its metabolite ciprofloxacin inAcipenserbaeri

ZHAO Feng1,ZHOU Zhou1,*,LI Xiao-yi1,KONG Jie1,YANG Qiu-hong2,LIU Yong-tao2

(1.Fisheries Research Institute of Guizhou Province,Guiyang 550025,China;2.Yangtze River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Freshwater Fish,Wuhan 430223,China)

In this article,Acipenserbaeriwas treated orally with enrofloxacin(EF)via stomach tube at a single dose of 10 mg/kg at 20 ℃.Concentration of the drugs in muscle,liver and blood was determined by high performance liquid chromatography(HPLC).The concentration-time data were analyzed with 3p97.The results were as follows:the EF and its metabolite in blood concentration-time data were best described by two-compartment model,the time of peak concentration(Tmax)were 0.37 h and 1.12 h,the maximum EF and its metabolite concentration(Cmax)were 0.329 mg/L and 0.164 mg/L,the distribution half-life(T(1/2)α)were 5.732 h and 8.17 h,the elimination half-life(T(1/2)β)were 45.131 h and 40.521 h. Compared with the healthyAcipenserbaeri,the rate of absorption and elimination in diseasedAcipenserbaerislowed,maximum drug concentration decreased and half-liveextended,clean-up ratio and the peak time delayed,apparent volume of distribution and the area under the curve increased.The Elimination equations of EF in kidney and muscle were C=0.13e-0.005t,C=2.31e-0.006t. Those correlation coefficienta(R2)were≥0.825. The Elimination equations of CF in kidney and muscle were C=4.412e-0.007t,C=4.915e-0.004t,those correlation coefficienta(R2)were≥0.758.

enrofloxacin;Acipenserbaeri;disease model;pharmacokinetics

2016-08-12

趙鳳(1987-),女,研究實(shí)習(xí)員,研究方向:水產(chǎn)品質(zhì)量安全,E-mail:f0328eng@126.com。

*通訊作者:周洲(1985-),女,助理研究員,主要從事鱘魚的繁殖及質(zhì)量安全控制方面的研究,E-mail:zz1126277@163.com。

貴州省基金(黔科合J字[2013]2190號);省體系——疾病防控功能實(shí)驗(yàn)室(GZCYTX2013-01102);黔農(nóng)科院院專項(xiàng)([2013]005號);貴州省攻關(guān)(黔科合NY[2015]3003-2)。

TS254.1

A

1002-0306(2017)06-0124-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.06.015