姚彩霞，廖 娟，謝玉梅，張鑫焱，王 鋼

（樂山師范學(xué)院，川南地方品種雞產(chǎn)業(yè)化四川省高等學(xué)校工程研究中心，四川 樂山 614004）

峨眉黑雞糞源大腸桿菌的耐藥性分析

姚彩霞，廖 娟，謝玉梅，張鑫焱，王 鋼*

（樂山師范學(xué)院，川南地方品種雞產(chǎn)業(yè)化四川省高等學(xué)校工程研究中心，四川 樂山 614004）

為分析峨眉黑雞糞源大腸桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性，本試驗(yàn)采集峨眉黑雞直腸拭子樣本，分離并鑒定大腸桿菌，采用Kirby-Bauer法對細(xì)菌菌株進(jìn)行18種抗生素的藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明：峨眉黑雞糞源大腸桿菌對環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明具有極強(qiáng)的耐藥性，而對諾氟沙星和氯霉素的敏感性較高；峨眉黑雞糞源大腸桿菌對18種常用抗菌藥物具有耐藥性的占22.2%，而具有敏感性的占77.7%，其中高度敏感占11.1個(gè)百分點(diǎn)，中度敏感占22.2個(gè)百分點(diǎn)，低度敏感占44.4個(gè)百分點(diǎn)。

峨眉黑雞；大腸桿菌；藥敏試驗(yàn)；耐藥性

峨眉黑雞屬兼用型地方品種，原產(chǎn)地及中心產(chǎn)區(qū)為四川省峨眉山市。70年代被列入四川地方畜禽品種志。峨眉黑雞飼養(yǎng)管理粗放，采食性廣，適應(yīng)性強(qiáng)，且具有體大、肉嫩、油多、蛋重等特點(diǎn)，相傳古代為納貢的珍品[1]。近年來，隨著峨眉黑雞的集約化生產(chǎn)和大規(guī)模養(yǎng)殖，雞大腸桿菌病已成為危害其健康的細(xì)菌性疾病之一[2]。防治該病主要使用抗生素，但藥物的大量和頻繁使用，容易導(dǎo)致耐藥性增強(qiáng)，同時(shí)也破壞雞腸道菌群平衡。張俊豐[3]、郝永正[4]等對雞大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行了鑒定分析，卻少有研究峨眉黑雞大腸桿菌耐藥性的文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本文對峨眉黑雞糞源大腸桿菌的耐藥情況進(jìn)行了調(diào)查分析，為本地區(qū)峨眉黑雞大腸桿菌病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)菌株 試驗(yàn)菌株采集自峨眉山市某養(yǎng)殖基地的峨眉黑雞直腸拭子。

1.1.2 培養(yǎng)基 麥康凱瓊脂、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.1.3 細(xì)菌生化鑒定管 腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管購于杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.1.4 藥敏紙片 共18種供試藥物，包括頭孢菌素類4種：頭孢唑啉（CEZ）、頭孢噻肟（CTX）、頭孢曲松（CRO）、頭孢哌酮（CFP）；氨基糖苷類5種：慶大霉素（GEN）、卡那霉素（KAN）、鏈霉素（STR）、阿米卡星（AMK）、妥布霉素（TOB）；氟喹諾酮類4種：諾氟沙星（NOR）、環(huán)丙沙星（CIP）、恩諾沙星（ENR）、氧氟沙星（OFL）；酰胺醇類2種：氯霉素（CHL）、氟苯尼考（FFN）；磺胺類：復(fù)方新諾明（SXT）；利福霉素類：利福平（RFP）；四環(huán)素類：強(qiáng)力霉素（DOX）。以上藥敏紙片均購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌的分離與純化 將無菌采集的峨眉黑雞直腸拭子置于滅菌的普通營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)16～18h。用無菌接種環(huán)挑取菌液劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，37℃下培養(yǎng)24h，觀察菌落的生長情況；挑取單個(gè)光滑粉紅色菌落再經(jīng)麥康凱培養(yǎng)基純培養(yǎng)，革蘭氏染色、鏡檢，觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特性，對分離菌進(jìn)行初步鑒定；將符合大腸桿菌特點(diǎn)的菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃下培養(yǎng)24h，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 細(xì)菌鑒定 采用腸桿菌科細(xì)菌生化編碼微量鑒定管進(jìn)行細(xì)菌鑒定[5]，對不確定菌株進(jìn)一步作生化鑒定予以判斷。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 采用美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）推薦的Kirby-Bauer法。取已鑒定為大腸桿菌的菌液，采用涂布接種法，將其均勻地涂布于瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)18～24h，觀察紙片周圍有無抑菌圈，并用三線法測量藥物紙片的抑菌圈直徑（取平均值）。結(jié)果判定：抑菌圈直徑大于20mm為高度敏感，抑菌圈直徑在16～20mm為中度敏感，抑菌圈直徑在11～15mm為低度敏感，抑菌圈直徑小于10mm為耐藥。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌的分離與鑒定 菌落在麥康凱平板上的形態(tài)為鮮桃紅色或微紅色、圓形、扁平、邊緣整齊、表面光滑、濕潤不透明，革蘭氏染色后鏡檢呈紅色、兩端鈍圓、粗短的小桿菌，結(jié)果表明所分離的菌株為大腸桿菌。

2.2 藥敏試驗(yàn) 18種抗生素的藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 峨眉黑雞腸道細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 mm

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，峨眉黑雞糞源大腸桿菌對環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明具有極強(qiáng)的耐藥性，對四環(huán)素類的強(qiáng)力霉素和酰胺醇類的氟苯尼考具有較強(qiáng)的耐藥性，而對諾氟沙星和氯霉素的敏感性較高，對頭孢唑啉、頭孢噻肟、卡那霉素和妥布霉素為中度敏感。峨眉黑雞糞源大腸桿菌對18種常用抗菌藥物具有耐藥性的占22.2%，而具有敏感性的占77.7%，其中高度敏感占11.1個(gè)百分點(diǎn)，中度敏感占22.2個(gè)百分點(diǎn)，低度敏感占44.4個(gè)百分點(diǎn)。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，峨眉黑雞糞源大腸桿菌對多種藥物具有耐藥性，尤其是環(huán)丙沙星和復(fù)方新諾明。而對諾氟沙星、氯霉素（兩者現(xiàn)已禁用）、頭孢唑啉、頭孢噻肟、卡那霉素和妥布霉素等具有較高的敏感性。因此，若在雞群中發(fā)生大腸桿菌病，應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇幾種比較敏感的藥物聯(lián)合使用或交替使用，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生?！?/p>

[1] 陳元昌，夏淑文.峨眉黑雞[J].養(yǎng)禽與禽病防治，1987（5）：32.

[2] 李哲，葛慎峰，朱俊靜，等.天津地區(qū)雞大腸桿菌分離鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2014（8）：18.

[3] 張俊豐，黃東璋，陳琳，等.雞腸道大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（11）：179-184.

[4] 郝永正，李廣香.雞致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性試驗(yàn)[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2014（11）：12-13.

[5] 王鋼，伏秦超，曹成全.峨眉山藏獼猴糞源大腸桿菌耐藥性的調(diào)查研究[J].四川動(dòng)物，2013，32（1）：82-85.

Drug Resistance of Escherichia coli Strains Isolated From Emei Black Chicken

Yao Caixia，Liao Juan，Xie Yumei，et al.
（Leshan Normal University，Engineering Research Center of Sichuan Higher School for Local Chicken Breeds Industrialization in South Sichuan，Sichuan Leshan 614004，China）

In order to analyse the drug resistance of Escherichia coli strains isolated from Emei black chicken to common antibiotics，the rectal swabs of Emei black chicken were collected for isolation and identification of E.coli.Antimicrobial sensitivity test were conducted by using the Kirby-Bauer method to examine the susceptibility against 18 antibiotics.The results showed that Emei black chicken′s E.coli had extremely strong resistance to CIP and SXT，and high susceptibility to NOR and CHL.The drug resistance account for 22.2%in 18 common antibiotics，but the sensitivity account for 77.7%，including 11.1 percent points of high susceptibility，22.2 percent points of moderate susceptibility，44.4 percent points of low susceptibility.

Emei black chicken；Escherichia coli；Drug sensitivity test；Drug resistance

S859.796

：B

：1001-8964（2017）04-0034-02

2017-01-11

樂山師范學(xué)院校地合作項(xiàng)目（Z1530）

姚彩霞（1992-），女，四川南充人，本科在讀，動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫專業(yè)。

*通訊作者：王鋼（1979-），男，副教授，碩士，研究方向：動(dòng)物疫病檢測與防控，養(yǎng)殖業(yè)廢棄物處理與資源化利用。