陳鑫，黃吉峰，閆起，李澤光*，張樂，陳思思，劉艷敏

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

烏龍丹對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的影響

陳鑫1，黃吉峰2，閆起1，李澤光2*，張樂1，陳思思1，劉艷敏1

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的:探討烏龍丹治療痰瘀痹阻型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機制。方法：將60例RA患者用隨機法分為治療組和對照組各30例。治療組烏龍丹聯(lián)合來氟米特片治療，對照組予來氟米特片治療。記錄兩組患者中醫(yī)證候積分、DAS28-3評分的改善情況，血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的數(shù)值變化。結(jié)果：治療組患者中醫(yī)證候積分、DAS28-3評分改善情況均優(yōu)于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療組患者的NF-κB/p65、IL-1、TNF-α水平顯著低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:烏龍丹聯(lián)合來氟米特片治療痰瘀痹阻型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具有一定的臨床效果，可改善患者的臨床癥狀，降低致炎因子。

烏龍丹；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；NF-κB；IL-1；TNF-α

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種有以“滑膜炎”為病理特征的全身性自身免疫病。可破壞關(guān)節(jié)軟骨和骨組織，最終造成關(guān)節(jié)功能障礙?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對其病因及發(fā)病機理尚不明確，但多數(shù)認(rèn)為，在RA的發(fā)病過程中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及細(xì)胞因子的異常發(fā)揮著重要的作用[1]。有研究證實，在RA患者滑膜組織中有高表達(dá)的NF-κB/p65，而NF-κB信號通路是RA關(guān)節(jié)炎癥的重要信號傳導(dǎo)通路，當(dāng)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被異常激活后,能增加IL-1、TNF-α等細(xì)胞因子的分泌[2]，而這些細(xì)胞因子已被公認(rèn)為是 RA 滑膜炎和關(guān)節(jié)骨破壞的重要介質(zhì)[3]。本課題通過對兩組患者治療前后血清中NF-κB、IL-1、TNF-α下降水平的檢測,提示烏龍丹能不同程度地影響RA患者血清中NF-κB、IL-1、TNF-α的表達(dá)，進(jìn)而探討烏龍丹對NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機制。

1 資料

1.1 一般資料

選取 2015年1月—2015年10月在本院就診的門診RA患者60例，隨機分為治療組和對照組，每組30例。治療組男9例，女21例；年齡18～65歲，平均(43.97±12.75)歲；病程5～53個月，平均(37.97±14.94)個月。對照組男6例，女24例；年齡18～64歲，平均(45.87±12.34)歲；病程3～60個月，平均(36.43±15.62)個月。兩組資料具有可比性(P>0.05)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2010年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的ACR/EULAR分類標(biāo)準(zhǔn)[4]；中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《實用中醫(yī)風(fēng)濕病學(xué)》第2版類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎痰瘀痹阻型證候特點[5]；RA的病情活動標(biāo)準(zhǔn)：采用歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟制定的改良疾病活動性標(biāo)準(zhǔn)(DAS28-3)[6]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)

①符合RA西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)與中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；②年齡在18～65歲；③病程在6月以上, 性別不限；④在本單位能夠配合完成治療療程者；⑤自愿并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

①不符合上述納入標(biāo)準(zhǔn)者；②合并其他風(fēng)濕免疫疾病；③合并有其他嚴(yán)重系統(tǒng)性慢性疾病;④妊娠或哺乳期婦女、精神病患者；⑤在1個月內(nèi)應(yīng)用激素或免疫抑制劑者；⑥過敏性體質(zhì)或?qū)σ阎囼炈幬锘蚪M成成分過敏者；⑦近1月內(nèi)曾參加過或正在參加其他臨床試驗者。

1.5 剔除標(biāo)準(zhǔn)

①納入后發(fā)現(xiàn)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的病例應(yīng)予剔除；②治療過程中接受其他方法治療者。

2 方法

2.1 治療方法

對照組: 給予來氟米特片(規(guī)格:10 mg/片,批號:H20000550,生產(chǎn)廠家:蘇州長征一欣凱制藥)，每日1次，1次20 mg，口服。

治療組:在對照組的基礎(chǔ)上加烏龍丹(烏骨藤、穿山龍、杜仲、續(xù)斷、威靈仙、秦艽、白芍、木瓜、粉萆薢和元胡等組成，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制藥廠加工，制成水丸，每丸6 g)，每日3次,1次20粒。兩組均治療12周。

2.2 觀察指標(biāo)

觀察對比兩組患者的中醫(yī)證候積分、DAS28-3評分的改善情況。實驗室觀測指標(biāo)：ELISA 法檢測治療前后兩組患者血清細(xì)胞因子NF-κB/p65、IL-1、TNF-α指標(biāo)的變化情況。嚴(yán)格按照試劑盒操作。安全性檢測：血、尿、大便常規(guī)，肝腎功能、心電圖等。

2.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

按《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》，證候療效標(biāo)準(zhǔn):臨床痊愈:臨床癥狀、體征消失或基本消失，證候積分減少≥95%；顯效:臨床癥狀、體征明顯改善，證候積分減少≥70%；有效:臨床癥狀、體征均有好轉(zhuǎn)，證候積分減少≥30%；無效:臨床癥狀、體征均惡明顯改善，甚或加重，證候積分減少<30%。(注：計算公式(尼莫地平法)：[(治療前積分-治療后積分)/治療前積分]×100%)。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 兩組中醫(yī)癥候療效積分比較

治療組較對照組下降明顯(△P<0.05)；較治療前明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(▲P<0.05)。見表1。

表1兩組中醫(yī)癥候療效積分比較±s,分)

注：與對照組比較，△P<0.05；與治療前比較，▲P<0.05

3.2 兩組DAS28-3評分比較

治療組較對照組評分顯著減少(△P<0.05)；較治療前明顯降低，均有統(tǒng)計學(xué)意義(▲P<0.05)。見表2。

表2 兩組DAS28-3評分比較,分)

注：與對照組比較，△P<0.05；與治療前比較，▲P<0.05

3.3 兩組血清中細(xì)胞因子水平的比較

治療組中IL-1較治療前水平明顯降低 (▲P<0.05)；較對照組下降比較 (△P<0.05)；治療組中TNF-α較治療前水平明顯降低 (▲P<0.05)；較對照組下降比較(△P<0.05)；治療組中NF-κB/p65較治療前水平明顯降低 (▲P<0.05)；較對照組下降比較(△P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清中IL-1、TNF-α、NF-κB/p65水平的比較

注：與對照組比較，△P<0.05；與治療前比較，▲P<0.05

4 討論

RA是一種侵蝕性、非特異性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的自身免疫病，以持續(xù)性的慢性滑膜炎為主要病理表現(xiàn)。隨著對RA的病因及發(fā)病機制深入探索，發(fā)現(xiàn)信號通路的異常以及炎性細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生和相互作用在RA患者的關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)及軟骨破壞中起著重要作用。NF-κB信號通路能夠影響滑膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)，NF-κB是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控著許多參與免疫反應(yīng)的早期和炎癥反應(yīng)各階段的分子[7]。當(dāng)NF-κB被激活后能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)靶蛋白IL-1、TNF-α等的合成,從而參與炎性反應(yīng)的調(diào)控，反過來這些炎癥因子又可以增強NF-κB的活性，進(jìn)一步產(chǎn)生 TNF-α、IL-1等炎癥因子加重RA 進(jìn)展。已有證實活動期 RA 患者中NF-κB、IL-1、TNF-α較穩(wěn)定期 RA 或正常人偏高[8]，免疫組化分析證實NF-κB/p65蛋白活性與RA活動性呈正相關(guān)。TNF-α是一種多效性的炎癥介質(zhì),能引起內(nèi)皮細(xì)胞、炎性因子合成與釋放，導(dǎo)致局部滑膜炎癥，促使骨破壞，抑制骨和軟骨修復(fù)，促進(jìn)血管翳形成。IL-1可以激活滑膜細(xì)胞，進(jìn)而增加并分泌多種炎性調(diào)控因子的表達(dá)，從而引發(fā)RA的滑膜炎癥反應(yīng)[9]，而且TNF-α和IL-1有協(xié)同作用，它們能誘導(dǎo)活化滑膜細(xì)胞產(chǎn)生的炎性介質(zhì)，從而降解關(guān)節(jié)軟骨、蛋白多糖以及膠原，可以進(jìn)一步刺激滑膜巨噬細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞而破壞邊緣骨質(zhì)[10]。已有研究顯示,烏龍丹能降低膠原誘導(dǎo)性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)滑液及血清中 IL-6、IL-1β的含量，從而抑制或延緩RA炎癥和關(guān)節(jié)破壞的作用[11]。

RA在中醫(yī)學(xué)屬“尪痹”范疇[12-13]?！稘健吩?“皆因體虛,腠理空疏,受風(fēng)寒濕氣而成痹也?！薄额愖C治裁·癖癥》指出“諸痹……由營衛(wèi)先虛,腠理不密,風(fēng)寒濕乘虛而襲,正氣為邪氣所阻,不能宣行,因而留滯,氣血凝滯,久而成痹。”以上理論指出RA發(fā)病的內(nèi)因是先天稟賦不足、氣血虛弱，外因為感受風(fēng)寒濕熱之邪，留滯關(guān)節(jié)，導(dǎo)致氣血不通，痹阻脈絡(luò)，造成局部或全身關(guān)節(jié)腫痛[14-15]。李澤光教授在以上理論基礎(chǔ)上并結(jié)合多年豐富臨床經(jīng)驗，以標(biāo)本同治為原則，自制烏龍丹，取得較好療效。烏龍丹以重用烏骨藤和穿山龍二藥共為君藥，祛風(fēng)除濕、活血化瘀通絡(luò)；臣以杜仲、川續(xù)斷、威靈仙和元胡，補肝腎，祛風(fēng)濕止痛；佐使為白芍、木瓜、秦艽和粉萆薢組成，養(yǎng)血舒筋，袪風(fēng)除濕，止痹痛?？v觀全方寒溫并用、散中有收、寓通于補，共奏祛風(fēng)、散寒、除濕、補腎、通絡(luò)而止痹痛之功效。

本研究結(jié)果顯示，烏龍丹聯(lián)合來氟米特片治療痰瘀痹阻型RA患者12周后，能明顯降低患者中醫(yī)癥候積分及DAS28-3評分，并且治療組RA患者血清IL-1、TNF-α、NF-κB/p65較治療前數(shù)值明顯下降，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療組較對照組明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明烏龍丹聯(lián)合來氟米特片治療RA療效更顯著，烏龍丹可能通過降低NF-κB的異?；罨?，進(jìn)而影響NF-κB通路，從而降低IL-1、TNF-α的表達(dá)，減輕RA滑膜炎癥反應(yīng)，這可能是該方治療RA的機制之一。通過本課題研究，為臨床應(yīng)用烏龍丹治療RA提供了實驗依據(jù)，也為今后更加深入地研究烏龍丹奠定了基礎(chǔ)。

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2016-11-10

2017-01-20

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目(12531Z011)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)新藥研究基金(X201201)

陳鑫(1988-)，女，碩士研究生，專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床。

*通訊作者：李澤光(1964-)，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療風(fēng)濕免疫。

R285.6;R593.22

A

1002-2392(2017)02-0071-03