駱延波　胡明　齊靜　李璐璐　+張印　+張慶　劉玉慶

摘要：

為考察長期使用扶正解毒顆粒的毒性，選取體重（18±2）g昆明小鼠160只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組（對照組及高、中、低3個劑量藥物組），每組雌雄小鼠各20只，分籠飼養(yǎng)。根據(jù)毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)參考文獻(xiàn)，其中高劑量為推薦臨床用藥量（即4 g/L飲水）的20倍，中劑量為推薦臨床用藥量的10倍，低劑量為推薦臨床用藥量的5倍。給藥周期為90 d，將藥物混于飲水中自由飲用，采食不限。主要從一般指標(biāo)、增重及飼料利用、血液學(xué)常規(guī)、血液生化檢查等方面研究該制劑對昆明小鼠的慢性毒性反應(yīng)。結(jié)果顯示：無論30 d末還是90 d末，受試藥物的3個劑量組的上述各項指標(biāo)測定結(jié)果均與對照組無顯著差異（P>0.05），表明該新制劑無明顯毒性，在臨床上長期應(yīng)用是安全的。

關(guān)鍵詞：扶正解毒顆粒；小鼠；血液指標(biāo)

中圖分類號：S816.75 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942（2017）04-0116-04

Impact of Fuzhengjiedu Granule on Blood Index of Mice

Luo Yanbo， Hu Ming， Qi Jing， Li Lulu， Zhang Yin， Zhang Qing， Liu Yuqing

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Shandong Academy of Agricultural Sciences/

Shandong Key Laboratory of Animal Breeding and Disease Control， Jinan 250100， China）

Abstract This research was aimed to investigate the toxicity of Fuzhengjiedu Granule for long-term use. One hundred and sixty Kunming mice with half males and half females weighed （18±2） g were randomly divided into four groups as high-， medium- and low-dose groups and control group respectively. Every group had 20 male and 20 femal mice， and they were housed in cages separately. According to the toxicological evaluation criteria and relevant references， high dose was 20 times of recommended clinical dosage （4 g/L water）， medium dose was 10 times of recommended clinical dosage， and low dose was 5 times of recommended clinical dosage. The drug was used for 90 days through mixed in drinking water freely and feeding without limitation. Its chronic toxicity to Kunming mice was analyzed from general indexes， weight gain and feed utilization， routine hematology and blood chemistry. The results showed that either in the end of 30 days or 90 days， there were no significant differences in these indicators between drug groups and control group. It indicated that the drug showed no significant toxicity， and it was safe for clinical application.

Keywords Fuzhengjiedu Granule；Mice；Hematological indexes

扶正解毒顆粒是將《中國獸藥典》扶正解毒散經(jīng)過劑型改造而研究開發(fā)的新獸藥，在臨床上主要用于提升家禽免疫力。為考察扶正解毒顆粒臨床上長時間應(yīng)用的安全性，進(jìn)行了該制劑的亞慢性毒性試驗[1-3]。本試驗通過將高劑量扶正解毒顆粒在一定時間內(nèi)反復(fù)飲喂給試驗動物，觀察動物出現(xiàn)損害的靶組織或靶器官及劑量效應(yīng)關(guān)系，并了解試驗動物對扶正解毒顆粒能夠耐受的劑量范圍，從而為評價扶正解毒顆粒能否安全應(yīng)用于臨床提供科學(xué)依據(jù)，以保證用藥安全。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 體重（18±2）g的昆明小鼠160只，雌雄各半，購自河北醫(yī)科大學(xué)試驗動物中心（合格證編號1207032）。小鼠購入后觀察飼養(yǎng)一周，投入試驗。

1.1.2 主要藥物及試劑 扶正解毒顆粒：山東明發(fā)獸藥股份有限公司生產(chǎn)的中試產(chǎn)品（含量：每克含原生藥0.5 g；批號：120603）。門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（產(chǎn)品編號001234）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（產(chǎn)品編號001254）、尿素氮試劑盒（產(chǎn)品編號001245）、肌酐試劑盒（產(chǎn)品編號001217）：購于北京北化康泰臨床試劑有限公司。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 BC-2800Vet獸用全自動血液細(xì)胞分析儀：深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；A-6半自動生化分析儀：北京松上技術(shù)有限公司；721型分光光度計：上海第三分析儀器廠制造；OLYMPUS生物顯微鏡：日本制造；KD-202輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)：浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司；電子天平型號：Precisa 92SM-202A。

1.2 試驗方法 [4-8]

1.2.1 給藥方法選擇 由于扶正解毒顆粒在臨床實際應(yīng)用中，需要在雞的飲水中連續(xù)添加2周，所以將本試驗的給藥周期定為90 d?？紤]到長達(dá)90 d的灌胃難以確保不對小鼠食道及胃造成損傷，同時巨大的應(yīng)激也會影響試驗結(jié)果，因此不建議采用常規(guī)的灌胃給藥方法。經(jīng)前期預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)，將扶正解毒顆粒以8%濃度給小鼠飲用，飲水總量與不加藥對照無明顯變化，故給藥方法選擇飲水給藥。

1.2.2 試驗動物分組 體重（18±2）g昆明小鼠160只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組雌雄小鼠各20只，分籠飼養(yǎng)。

1.2.3 試驗劑量及給藥方式 依據(jù)《獸藥實驗技術(shù)規(guī)范匯編》新獸藥一般毒性試驗技術(shù)要求，確保給藥量不影響動物正常的營養(yǎng)需要，并根據(jù)毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)參考文獻(xiàn)設(shè)置高、中、低3個劑量以及一個空白對照組，其中高劑量為推薦臨床用藥量（即4 g/L飲水）的20倍，即在飲水中加80 g/L扶正解毒顆粒；中劑量為推薦臨床用藥量的10倍，即在飲水中加40 g/L扶正解毒顆粒；低劑量為推薦臨床用藥量的5倍，即在飲水中加20 g/L扶正解毒顆粒。給藥周期為90 d，將藥物混于飲水中自由飲用，采食不限。

1.2.4 觀察指標(biāo)與測定方法 ① 臨床表現(xiàn)。每天觀察各組小鼠的活動、采食、飲水及發(fā)病情況。包括被毛是否貼身或稀疏豎散，是否神態(tài)萎靡、蜷縮不動、過度興奮、躁動驚跳、肌肉麻痹或震顫、步態(tài)異常。出現(xiàn)中毒反應(yīng)的小鼠取出單籠飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)死亡或瀕死小鼠時在1 h內(nèi)尸檢。

②體重及飼料利用率測定。分別于給藥30 d和90 d末對各組小鼠進(jìn)行稱重，比較其體重變化情況。同時全程記錄各組飼料消耗量，計算各組飼料利用率。

③血液常規(guī)指標(biāo)檢測。于給藥30 d和90 d末，每組隨機(jī)選取20只小鼠（雌雄各半）斷尾采血，用全自動血液細(xì)胞分析儀測定白細(xì)胞計數(shù)及分類、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量。

④血液生化指標(biāo)檢測。于給藥30 d和90 d末，每組隨機(jī)選取20只小鼠（雌雄各半）斷頭取血，分離血清，用門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒、尿素氮試劑盒和肌酐試劑盒測定門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）和肌酐（CRE）等血液生化指標(biāo)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 11.5進(jìn)行單因素方差分析，采用多個試驗組和一個對照組間的兩兩比較方法統(tǒng)計。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)變化情況

在整個試驗過程中，高、中、低劑量試驗組和對照組的小鼠，毛色始終潔凈，四肢、眼和瞳孔正常，能自由攝食、飲水，糞便成粒正常，無皮膚過敏反應(yīng)。整個試驗過程所有小鼠均存活，未出現(xiàn)中毒性臨床癥狀。

2.2 動物的體增重及飼料利用率測定結(jié)果

連續(xù)飼喂扶正解毒顆粒30 d末和90 d末，各組小鼠平均日增重和飼料日耗量測定結(jié)果見表1?？芍?， 1～30 d及30～90 d期間，無論雌性還是雄性小鼠，各試驗組的平均日增重和飼料利用率均與對照組無顯著差異（P>0.05）。

2.3 試驗小鼠血液常規(guī)指標(biāo)檢測結(jié)果

連續(xù)飲喂扶正解毒顆粒30 d和90 d后，血液學(xué)指標(biāo)測定結(jié)果見表2?？芍?，給藥30 d和90 d后各試驗組與對照組及各試驗組之間的白細(xì)胞計數(shù)及分類、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量均差異不顯著（P>0.05）。說明，長期飼喂扶正解毒顆粒對小白鼠的血液學(xué)指標(biāo)無明顯不良影響。

2.4 試驗動物血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果

由表3可知，給予受試小鼠扶正解毒顆粒30 d和90 d后，試驗組的門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）和肌酐（CRE）的含量均與對照組差異不顯著（P>0.05），且各試驗組各劑量水平之間差異也不顯著（P>0.05）。說明，長期飼喂扶正解毒顆粒對小鼠的肝腎功能沒有明顯不良影響。

3 討論與結(jié)論

3.1 本研究依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)研究扶正解毒顆粒對動物的影響，試驗設(shè)計和方法參考相關(guān)資料[9，10]，整個試驗操作規(guī)范，數(shù)據(jù)真實可靠。

3.2 對新獸藥扶正解毒顆粒進(jìn)行為期90 d的亞慢性毒性試驗研究，主要從一般指標(biāo)、增重及飼料利用、血液學(xué)常規(guī)、血液生化檢查等方面研究該新獸藥對昆明小鼠的慢性毒性反應(yīng)。結(jié)果顯示，無論30 d末，還是90 d末，受試藥物的3個劑量組的上述各項指標(biāo)測定結(jié)果均與對照組無顯著差異（P>0.05）。說明，該制劑無明顯毒性，在臨床上應(yīng)用是安全的，這可能與該制劑的成分是黃芪多糖、淫羊藿苷等成分有關(guān)。這些成分能夠提高機(jī)體免疫力，毒副作用較小，因此對血液等指標(biāo)未造成影響。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1]

農(nóng)業(yè)部獸藥審評委員會辦公室.獸藥試驗技術(shù)規(guī)范匯編[G]. 2001.

[2] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.飼料安全性評價 亞急性毒性試驗[S].NY1T 1031-2006.

[3] 胡元亮主編.中藥飼料添加劑的開發(fā)與利用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[4] 許巧麗，王加才，張宗和，等. N，O-羧甲基殼聚糖對小鼠的亞慢性毒性試驗[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2006，38（9）：40-43.

[5] 袁伯俊，顧長虹. 新藥長期毒性實驗的劑量設(shè)計[J]. 國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊，1997，24（2）：97-101.

[6] 李建科，盧健雄，楊具田，等.甘肅棘豆飼喂小白鼠的亞慢性毒性試驗的血液學(xué)分析[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，1996（3）：6-9.

[7] 王新春，郭淑麗，楊競春，等.愈痹丸亞慢性毒性實驗研究[J]. 中國醫(yī)師雜志，2003，5（4）：566-568.

[8] 趙峰，劉丹，黃所含，等.構(gòu)樹葉飼喂小白鼠的亞慢性毒性試驗[J].糧食與飼料工業(yè)，2006（6）：30-32.

[9] 李娜. 天然綠色飼料添加劑——蜂膠的毒性試驗研究[D].延吉：延邊大學(xué)，2005.

[10]陳杖榴主編.獸醫(yī)藥理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.