王莉芳，李曉春，徐長(zhǎng)根

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710065)

莫西沙星是人工合成的含有8-甲氧基的第4代氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物，其抗菌譜廣、抗菌能力強(qiáng)，在保留了第3代抗革蘭陰性菌活性的 基礎(chǔ)上，增強(qiáng)了抗革蘭陽(yáng)性菌、厭氧菌的活性[1]，尤其是對(duì)難治性和對(duì) B-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物耐藥的病原體，具有較強(qiáng)的抗菌作用 。有病例使用莫西沙星注射液后發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，過(guò)敏性休克，四肢及軀干見(jiàn)大片紅色丘疹，并發(fā)肺部感染。為進(jìn)一步了解和評(píng)價(jià)鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液安全性，本文對(duì)其溶血、過(guò)敏及刺激性進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 藥物與試劑

250 mL:含莫西沙星0.4 g氯化鈉2.0 g；

陰性對(duì)照品：0.9%氯化鈉注射液 市售。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

家兔：雌雄兼用，體質(zhì)量2.0～2.4 kg；豚鼠：雌雄兼用，體質(zhì)量：300～350 g。

1.3 試驗(yàn)儀器

電子天平，德國(guó)塞多利斯公司，型號(hào)：BS2202S，分度值10mg；水合氯醛，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20131204；甲醛溶液，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20131118。

2 方法與結(jié)果

2.1 血管刺激性試驗(yàn)[2-5]

2.1.1 供試品配制

鹽酸莫西沙星注射液的供試品溶液的配制：原液。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)

圖1 病理學(xué)檢查結(jié)果

取體質(zhì)量2.0～2.4 kg健康合格、耳緣無(wú)損傷大耳白家兔4只，注射體積為5 mL/kg。采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法給藥，4只于右側(cè)耳緣靜脈以無(wú)菌操作方法緩緩注射鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的供試品溶液，于左側(cè)等速等量注射0.9%氯化鈉注射液。每天給藥一次，連續(xù)5天。給藥后肉眼觀察給藥局部血管有無(wú)血栓形成，周?chē)M織有無(wú)紅、腫、瘀血等炎癥反應(yīng)。末次給藥后24 h、48 h、72 h，及恢復(fù)期14天，病理組織學(xué)檢查:于72 h處死1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)家兔，分別于左右耳緣靜脈注射處，各取1 cm長(zhǎng)一段靜脈血管連同周?chē)M織，用10%的甲醛固定48 h，脫水、透明、包埋，3μm切片。觀察有無(wú)血栓形成、內(nèi)皮損傷及炎癥變化?？赡嫘园Y狀觀察及病理組織學(xué)取樣4號(hào)1只家兔，末次給藥觀察72 h后，每天進(jìn)行一般情況觀察和給藥部位血管刺激性癥狀觀察1次，連續(xù)觀察14天，觀察結(jié)束后同前述方法進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程度。病理學(xué)檢查結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下觀察，兔耳給藥?kù)o脈與對(duì)照靜脈血管均規(guī)則完整，血管壁無(wú)增厚，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，無(wú)血栓形成，血管周?chē)鸁o(wú)明顯炎癥反應(yīng)及其他病理變化，見(jiàn)圖1。

2.2 溶血與凝聚試驗(yàn)

取兔血約20 mL，放入燒杯中，用玻璃棒輕攪10min，除去纖維蛋白原，使之成為脫纖血液。加約10倍量的0.9%氯化鈉注射液，搖勻、離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用0.9%氯化鈉注射液同法洗滌3次，至上清液不呈紅色為止。將所得紅細(xì)胞用0.9%氯化鈉注射液稀釋成2%的混懸液，供實(shí)驗(yàn)當(dāng)天使用，用時(shí)搖勻。

2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法

取試管7支，1～5號(hào)管為供試品管，6號(hào)管為陰性對(duì)照管，7號(hào)管為陽(yáng)性對(duì)照管。按表4用量依次加入2%紅細(xì)胞混懸液和0.9%氯化鈉注射液或蒸餾水，混勻后，立即置37℃±0.5℃恒溫箱中進(jìn)行溫育，開(kāi)始每隔15min觀察一次，1h后，每隔1h觀察一次，連續(xù)觀察3 h，如溶液呈澄明紅色，表明有溶血發(fā)生，如溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細(xì)胞凝聚發(fā)生。結(jié)果見(jiàn)表1和圖2。

表1 鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液溶血與凝聚試驗(yàn)

注：+溶血，++凝聚，-不溶血。

圖2 各管至恒溫箱溫育180min拍照

2.3 過(guò)敏性試驗(yàn)[6]

鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的供試品溶液的配制：原液。

取體重300～350g健康豚鼠24只，分為四組，每組6只。第一組為陽(yáng)性對(duì)照組，注射1%新鮮雞蛋清0.5 mL/只；第二組為陰性對(duì)照組，注射0.9%氯化鈉注射液0.5 mL/只；第三組為鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液高劑量組，注射劑量為1.0 mL/只；第四組為鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液低劑量組，注射劑量為0.5 mL/只。隔日每只每次腹腔注射，共3次，進(jìn)行致敏。各組分別在末次致敏后10天靜脈攻擊，第一組為陽(yáng)性對(duì)照組，注射1%新鮮雞蛋清1.0 mL/只；第二組為陰性對(duì)照組，注射0.9%氯化鈉注射液1.0 mL/只；第三組為供試品高劑量組2.0 mL/只，第四組為供試品低劑量組1.0mL/只。除陽(yáng)性對(duì)照組外，其余各組豚鼠均不得出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。第一組攻擊后觀察有豎毛、呼吸困難、抽搐、虛脫，3～5min后全部死亡，結(jié)果為陽(yáng)性；第二組攻擊后均無(wú)過(guò)敏反應(yīng)，健康存活，結(jié)果為陰性；第三、四組攻擊后均無(wú)過(guò)敏反應(yīng)，健康存活，結(jié)果為陰性。 按全身致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判為“0”，過(guò)敏反應(yīng)為陰性。試驗(yàn)期間豚鼠體重增長(zhǎng)良好，供試品組與陰性對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯異常。未引起豚鼠的過(guò)敏性反應(yīng)。

3 討論

鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的藥理作用已有廣泛的研究報(bào)道，但對(duì)其安全性的研究還少，鹽酸莫西沙星注射液是我國(guó)于 2013 年審批上市的仿制藥品種，加上近幾年過(guò)敏反應(yīng)增多，過(guò)敏反應(yīng)的原因主要是合成、生產(chǎn)過(guò)程中引入的雜質(zhì)，所以，有必要進(jìn)行鹽酸莫西沙星注射液的溶血、過(guò)敏和刺激反應(yīng)的研究。鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液在本實(shí)驗(yàn)條件下,在臨床擬用量下，體外沒(méi)有溶血作用和凝聚反應(yīng)。不引起豚鼠主動(dòng)過(guò)敏反應(yīng)。對(duì)兔耳血管均無(wú)刺激作用。

參考文獻(xiàn)

[1]朱文靜,王少華,張淑立,等.鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液治療下呼吸道感染的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)研究[J].中國(guó)藥房,2013,24(22):2065-2067.

[2]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[EB/OL].[2014-05-13].http://www.sda.gov.cn/WS01/CL1616/101018.html.

[3]袁伯俊,廖明陽(yáng),李 波.藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2007:255-256.

[4]朱玉云,高允生,成立軍,等.利巴韋林葡萄糖注射液的安全性評(píng)價(jià)[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999,20(3):199-201.

[5]李學(xué)蘭,姜隆梅,張 紅,等.乳糖酸紅霉素藥物濃度和給藥次數(shù)對(duì)血管刺激性的影響[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,23(3):227-228.

[6]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.中藥.天然藥物免疫毒性(過(guò)敏性、光過(guò)敏性反應(yīng))研究技術(shù)指導(dǎo)原則[EB/OL].(2005-03-12)[2012-02-23].https://wenku.baidu.com/view/c6721524af45b307e8719725.html.