陳彥彬

【摘要】 目的 分析三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌血清中microRNA-21與microRNAlet-7a的表達(dá)。方法 40例女性乳腺癌患者， 其中20例三陰性乳腺癌患者作為觀察組， 另20例LuminalA型乳腺癌患者作為對(duì)照組， 另選取同時(shí)期體檢結(jié)果健康的20例女性作為健康組。檢測(cè)三組血清中的miRNA-21與microRNAlet-7a表達(dá)水平。結(jié)果 觀察組血清的microRNA-21水平分別高于對(duì)照組和健康組（P<0.05）。

觀察組、對(duì)照組與健康組血清中的microRNAlet-7a表達(dá)水平分別為（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 觀察組血清中的microRNAlet-7a表達(dá)水平低于健康組（P<0.05）。觀察組Ⅰ期microRNA-21的表達(dá)量明顯低于Ⅱ～Ⅲ期的表達(dá)量， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 microRNA-21與microRNAlet-7a的表達(dá)水平可作為三陰性乳腺癌特異性治療的候選靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】 三陰性乳腺癌；LuminalA型乳腺癌；microRNA-21；microRNAlet-7a

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.31.020

乳腺癌是乳腺上皮細(xì)胞在多種致癌因子的作用下發(fā)生基因突變， 使細(xì)胞增生失去控制， 出現(xiàn)無(wú)限制的惡性增生， 是威脅女性健康的常見(jiàn)惡性腫瘤[1]。本次作者以三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌為例， 分析這兩種乳腺癌在血清中microRNA-21與microRNAlet-7a的表達(dá)水平， 將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2015～2016年收治的40例女性乳腺癌患者， 其中20例三陰性乳腺癌患者作為觀察組， 另20例

LuminalA型乳腺癌患者作為對(duì)照組， 另選取同時(shí)期體檢結(jié)果健康的20例女性作為健康組。觀察組年齡25～68歲， 平均年齡（45.2±8.5）歲。對(duì)照組年齡24～69歲， 平均年齡（46.0±

8.0）歲。健康組年齡24～68歲， 平均年齡（45.5±8.0）歲。觀察組患者雌激素受體[ER]（-）、孕激素受體[PR]（-）、人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體[HER-2]（-）。對(duì)照組患者ER（+）、PR（+）、HER-2（-）。排除妊娠、感染、嚴(yán)重肝腎功能不全者， 排除糖尿病、心血管疾病等并發(fā)癥及合并其他腫瘤患者。三組受檢者對(duì)于本研究均知情且簽署知情同意書(shū)。三組受檢者一般資料比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 收集三組受檢者5 ml靜脈血， 離心后取上層血清250 μl， 予以Trizol LS（Invitrogen）混勻后進(jìn)行溫室裂解， 使用RNA（QiaGen miReasy Mini Kit）提取試劑盒常規(guī)提取RNA， 并置于零下20℃保存， 使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（U6 snRA， PCR primer set， has-miR-21， LNATM PCR primer set）， 實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒（Roche公司）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)反錄， 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系參照Clontech2641A， qRT-PCR， 反應(yīng)體系參照Takara RR820a， 95℃ 5 s， 60℃ 6 s， 40個(gè)循環(huán)， 引物序列：

hsa-miR-21（5-CGGCGTAGCTTATCAGACTGATG-3）；hsa-let-7a

（5-GCCGGTGAGGTAGTAGGTTGTATAG-3）；內(nèi)參：hsa-miR-1610（5-TAGCAGCACTAAA TATTGGCG-3）。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布選擇秩次非參數(shù)檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三組microRNA-21與microRNAlet-7a的表達(dá)水平比較 觀察組、對(duì)照組與健康組血清中的microRNA-21表達(dá)水平分別為（1.23±0.65）、（0.75±0.50）、（0.40±0.30）， 觀察組血清的microRNA-21水平分別高于對(duì)照組和健康組（t=2.618、5.185，

P=0.000<0.05）。觀察組、對(duì)照組與健康組血清中的microRNAlet-7a表達(dá)水平分別為（0.06±0.03）、（0.09±0.07）、（0.14±0.13）， 觀察組血清中的microRNAlet-7a表達(dá)水平低于健康組（t=-2.682， P=0.000<0.05）；觀察組與對(duì)照組的microRNAlet-7a表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.053， P=0.356>0.05）。

2. 2 觀察組和對(duì)照組在年齡、TNM腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中microRNA-21的表達(dá)量比較 觀察組中microRNA-21

Ⅰ期的表達(dá)量為（0.50±0.20）， 低于Ⅱ～Ⅲ期的（1.65±0.56）（t=-8.649， P=0.00<0.05）。觀察組血清中microRNA-21的表達(dá)增高與臨床分期呈正相關(guān)；觀察組microRNA-21在<45歲患者中表達(dá)量為（1.15±0.52）， 與≥45歲患者的（1.21±0.60）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.351， P=0.813>0.05）；觀察組microRNA-21淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N1～3的表達(dá)量為（0.82±0.40）， 與N0的（1.01±0.50）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.178， P=0.222>0.05）。對(duì)照組microRNA-21Ⅰ期表達(dá)量為（0.55±

0.18），與Ⅱ～Ⅲ期的（0.58±0.20）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.241， P=1.352>0.05）。對(duì)照組microRNA-21在年齡≥45歲

患者中的表達(dá)量為（0.60±0.22），與<45歲的（0.65±0.25）比較

差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.010， P=0.351>0.05）。對(duì)照組microRNA-21淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N1～3的表達(dá)量為（0.58±0.38）， 與N0的（0.62±

0.45）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.310， P=0.301>0.05）。

3 討論

乳腺癌作為女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤， 在臨床中具有較高的發(fā)病率， 成為對(duì)女性健康威脅最大的疾病之一。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步， 基因分子水平檢測(cè)方法的提高， 臨床對(duì)于乳腺癌發(fā)病機(jī)制的研究也取得了一定的進(jìn)展。乳腺癌在臨床主要分為L(zhǎng)uminalA型、LuminalB型、HER-2過(guò)表達(dá)和三陰性4種亞型， 不同的類(lèi)型乳腺癌的治療手段不同。三陰性乳腺癌以發(fā)病年輕、轉(zhuǎn)移快、復(fù)發(fā)率高為主要臨床特點(diǎn)， 且該型在治療方面缺乏特異性， 治療預(yù)后差。而LuminalA型乳腺癌與三陰性乳腺癌相比治療的預(yù)后效果好。

隨著研究發(fā)現(xiàn)miR是由2個(gè)核苷酸組成的非編碼小RNA， 可與靶mRNA的3端非法醫(yī)區(qū)（3untranalated regions， UTRs）進(jìn)行序列特異性結(jié)合， 從而抑制據(jù)銀的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)， 可調(diào)控約60%的蛋白表達(dá)， 在乳腺癌患者中一些miRs的表達(dá)呈特異性[2]， miR-21與調(diào)控Bcl等的癌基因有關(guān)， 在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。microRNAlet-7a可通過(guò)下調(diào)原癌基因RAS/c-MYC和HMGA-2的蛋白表達(dá)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖， 對(duì)癌細(xì)胞的基因有抑制作用， microRNAlet-7a表達(dá)水平與腫瘤的代謝、乳腺癌患者的生存時(shí)間有關(guān)[3]。

在作者的研究中， microRNA-21在觀察組中的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組和健康組（P<0.05）， 說(shuō)明microRNA-21與臨床分期晚、短期生存率低等呈正相關(guān)。而microRNAlet-7a在觀察組中表達(dá)量顯著低于健康組（P<0.05）， 說(shuō)明microRNAlet-7a對(duì)乳腺癌細(xì)胞的增殖有一定抑制作用。在病理資料方面觀察組中microRNA-21Ⅰ期的表達(dá)量明顯低于Ⅱ～Ⅲ期的表達(dá)量（P<0.05）， 說(shuō)明microRNA-21的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)， 分期越晚， microRNA-21的表達(dá)量就越高。

綜上所述， microRNA-21與microRNAlet-7a的表達(dá)水平可作為三陰性乳腺癌特異性治療的候選靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 何佩娜， 竇拉加， 盛撿云. microRNA-21在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者血清中的表達(dá)及臨床意義.醫(yī)學(xué)研究雜志， 2014， 43（6）：97-100.

[2] 王雷， 馬菲. microRNA在三陰型乳腺癌中的研究進(jìn)展.中國(guó)普通外科雜志， 2013， 22（11）：1490-1494.

[3] 曾梓涵， 趙枚， 彭華， 等. microRNA-21、microRNAlet-7a在三陰性乳腺癌與LuminalA型乳腺癌血清中的表達(dá)差異.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2015， 31（21）：3499-3502.

[收稿日期：2016-8-16]