廖穎妍 譚穎賢 方宇希 李榮東

摘要[目的]建立沅江荻蘆嫩莖總氨基酸含量測(cè)定方法，研究4種荻蘆的貯存方法對(duì)荻蘆嫩莖總氨基酸含量的影響。[方法]采用茚三酮比色法測(cè)定荻蘆中總氨基酸的含量，篩選以谷氨酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液的最佳工作條件，在401 nm 處測(cè)定各樣品吸光度。[結(jié)果]新鮮荻蘆中總氨基酸含量占22.0%，各貯存方式下的總氨基酸含量為4.9%～21.2%。平均回收率為99.3%～99.6%，RSD為0.06%～0.52%。[結(jié)論]通過比對(duì)4種貯存方式下的總氨基酸含量，減壓貯存是最有利于減少營(yíng)養(yǎng)成分氨基酸的貯存方式。該方法簡(jiǎn)便有效，污染少，可行性好。

關(guān)鍵詞荻蘆；嫩莖；總氨基酸；茚三酮比色法；貯存方式

中圖分類號(hào)S509.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）05-0120-01

Abstract[Objective] To establish a method for determination of total amino acid content in tender stem of Triarrhena lutarioriparia from Yuanjiang， to study the effects of four storage methods on amino acid content.[Method] Using ninhydrin colorimetry method to determinate total amino acid content in T. lutarioriparia，screen the best working conditions by glutamate as the standard solution，and measure absorbance at its maximum absorption wavelength at 401 nm.[Result] The total content of amino acid in fresh T. lutarioriparia accounted for 22.0%，the amino acid content under each storage method was in 4.9%-21.2%， average recovery was in 99.3%-99.6%， RSD was in 0.06%-0.52%. [Conclusion] By comparing the contents of total amino acids in four ways， reduced pressure storage is the most beneficial way to reduce the amino acid. The method is simple and effective， less pollution and good feasibility.

Key wordsTriarrhena lutarioriparia L.；Tender stem；Amino acid；Ninhydrin colorimetry method；Storage mode

基金項(xiàng)目沅江市政府科研合作基金項(xiàng)目（科函〔2015〕14號(hào)）。

作者簡(jiǎn)介廖穎妍（1992—），女，湖南益陽(yáng)人，碩士研究生，研究方向：新藥研究與開發(fā)工作。

*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事創(chuàng)新藥物的研究與開發(fā)工作。

收稿日期2016-12-05

荻蘆（Triarrhena lutarioriparia L.Liu，sp.nor.），禾本科、黍亞科、須芒草超族、甘蔗族、芒亞族、荻屬，也叫作南荻，其嫩莖因?yàn)樾嗡菩≈窆S所以也被稱為蘆筍[1]。荻蘆中含有豐富的多糖、黃酮、氨基酸等活性成分，是荻蘆發(fā)揮藥理藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)[2]。與其他蔬菜相比，荻蘆富含18種氨基酸，總氨基酸含量高于許多蔬菜。目前食品中氨基酸的測(cè)定主要有茚三酮顯色法、甲醛滴定法和HPLC法[3-4]。

因新鮮荻蘆嫩莖含水量高，采后由于呼吸作用增強(qiáng)，極易失水、失鮮、腐爛和組織木質(zhì)化增加，常溫下荻蘆采后的保鮮期僅為24～48 h，隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)，荻蘆品質(zhì)逐漸下降。長(zhǎng)期受到貯藏問題的干擾，現(xiàn)已影響了荻蘆的經(jīng)濟(jì)效益。目前對(duì)荻蘆營(yíng)養(yǎng)成分的研究很少，對(duì)于產(chǎn)品的保鮮技術(shù)也缺乏相應(yīng)的科學(xué)研究。筆者采用茚三酮比色法測(cè)定荻蘆中總氨基酸的含量[5]，篩選以谷氨酸為標(biāo)準(zhǔn)溶液的最佳工作條件，在401 nm處測(cè)定各樣品吸光度，建立沅江荻蘆嫩莖總氨基酸含量測(cè)定方法，研究不同保存方法對(duì)荻蘆嫩莖總氨基酸含量的影響，以期為采后產(chǎn)業(yè)化、延長(zhǎng)荻蘆貯藏時(shí)間和提高食用品質(zhì)提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)，也可為荻蘆的質(zhì)量控制提供參考。

1材料與方法

1.1試材

標(biāo)準(zhǔn)品谷氨酸（上海金穗生物科技有限公司）、無(wú)水乙醇（安徽安特食品有限公司）、磷酸二氫鉀（國(guó)藥集團(tuán)）、十二水合磷酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)）、氯化亞錫（南京化學(xué)試劑有限公司）、茚三酮（上海邦景有限公司），荻蘆來(lái)自沅江河灘濕地。

1.2儀器與設(shè)備

TU-1900紫外分光光度計(jì)（日本島津）；PB203-N電子精密天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；超聲波清洗機(jī)（杭州法蘭特超聲波有限公司）；DELTA 320PH計(jì)（杭州聯(lián)測(cè)自動(dòng)化科技有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.3方法

1.3.1貯存方法。

1.3.1.1

（新鮮荻蘆）減壓冷藏貯存。將荻蘆放入真空袋中，抽真空，放入冰箱（0～2 ℃）貯存。

1.3.1.2

（速凍荻蘆）速凍貯存。將荻蘆去除老皮，再將荻蘆放于漂燙筐中，置于140 ℃左右。漂燙結(jié)束后立即轉(zhuǎn)到10 ℃以下的冷水進(jìn)行冷卻。待其冷卻后，將它從水中撈出，瀝干表面水分，在-30 ℃條件下迅速冷凍，使荻蘆的中心溫度達(dá)-18 ℃，然后將速凍后的荻蘆裝入真空袋中，封口后置于冰箱中。

1.3.1.3

（甩干荻蘆）土法貯存。將荻蘆去除老皮，再將荻蘆放于漂燙筐中，置于140 ℃左右。漂燙結(jié)束后立即轉(zhuǎn)到10 ℃以下的冷水進(jìn)行冷卻。冷卻后將荻蘆用紗布包裹并扎緊于甩干機(jī)中甩干水分，然后用較高濃度的食鹽混合均勻，用真空袋裝好，窖藏保存。

1.3.1.4

（新鮮荻蘆）化學(xué)保鮮。將荻蘆去外皮后，置于燙漂筐內(nèi)燙漂60 min，然后立即用冰水冷卻，瀝干水分后用1%脫氫乙酸鈉浸泡，并分裝成真空包裝，放在冷藏箱中保存。

1.3.2緩沖溶液和茚三酮溶液的制備。

2%茚三酮溶液制備：稱取茚三酮1.000 g加入35 mL熱水的燒杯使其溶解，加入0.040 g氯化亞錫（防腐劑），攪拌過濾，濾液置冷暗處過夜（12 h），隔天再加水至50 mL，搖勻，備用。

pH 8.04磷酸緩沖溶液制備：準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鉀0184 g于燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。準(zhǔn)確稱取十二水合磷酸鈉（Na2HPO4·12H2O）1.203 g于燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。

取上述配好的磷酸二氫鉀溶液2.0 mL與120 mL磷酸氫二鉀溶液混合均勻，再用pH計(jì)配制成pH為8.04的磷酸緩沖溶液。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)品的配制。

稱取干燥至恒重谷氨酸對(duì)照品0.010 7 g，加蒸餾水制成6.42 μg/mL的溶液作為對(duì)照品。

1.3.4檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。

先以未加入谷氨酸對(duì)照品溶液的空白溶液做基線掃描，再將谷氨酸對(duì)照品溶液置比色皿中，從800～200 nm進(jìn)行光譜掃描，最后檢出波峰波谷位置，確定最大吸光度為401 nm。

1.3.5供試品溶液的配制。

取4種不同保存方式下貯存0、30、90、180 d的荻蘆適量，各打成勻漿，各取0.5 g精密稱定，置于錐形瓶中，各加已配制好的70%乙醇30 mL，然后超聲處理60 min。過濾，收集濾液，再用少量乙醇反復(fù)洗滌濾液，合并濾液并用70%乙醇定容至50 mL，混勻，作為供試品溶液。

1.3.6方法學(xué)考察。

1.3.6.1線性關(guān)系考察。

精密稱取干燥至恒重的谷氨酸對(duì)照品0.010 7 g，定容至10 mL容量瓶。取對(duì)照品溶液1 mL置于試管中，加0.5 mL茚三酮、1 mL磷酸緩沖溶液，沸水加熱15 min，再取出用冰水冷卻15 min，冷卻至室溫，再定容至10 mL容量瓶中。分別精密量取0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻。按紫外分光光度法規(guī)定進(jìn)行操作，在波長(zhǎng)401 nm處測(cè)定吸光度。以谷氨酸對(duì)照品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.6.2精密度試驗(yàn)。

精密吸取谷氨酸對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為6.42 μg/mL）5份，按照茚三酮比色法顯色，并隨行做空白試驗(yàn)，分別在波長(zhǎng)401 nm處測(cè)定吸光度。

1.3.6.3穩(wěn)定性試驗(yàn)。

精密吸取新鮮荻蘆樣品溶液6份，按照茚三酮比色法顯色，并隨行做空白試驗(yàn)，再分別精密吸取樣品溶液和空白試劑3.0 mL置50 mL容量瓶中，每隔一段時(shí)間在波長(zhǎng)401 nm處測(cè)定吸光度。

1.3.6.4重復(fù)性試驗(yàn)。

取新鮮荻蘆勻漿6份，每份各稱定05 g，按照“1.3.5”方法配制供試品溶液，按照茚三酮比色法顯

〖LL〗

色，并隨行做空白試驗(yàn)，分別在波長(zhǎng)401 nm處測(cè)定吸光度。

1.3.6.5回收率試驗(yàn)。

稱取新鮮荻蘆勻漿0.5 g共9份，按照“1.3.5”方法配制，分別取1 mL供試品溶液，加入濃度分別為96.37、96.88、97.51、129.83、130.76、128.45、160.80、161.33、160.52 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，按照茚三酮比色法在波長(zhǎng)401 nm處檢測(cè)。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

2.1.1線性關(guān)系的考察。按照“1.3.6.1”方法操作，以谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得出線性方程為Y=0.110 75X-0.134 9（r=0.999 9），表明谷氨酸濃度在3.21～16.05 μg/mL時(shí)與吸光度有良好的線性關(guān)系。

2.1.2

精密度試驗(yàn)。按照“1.3.6.2”方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD為1.61%，表明該方法精密度良好。

2.1.3穩(wěn)定性試驗(yàn)。按照“1.3.6.3”方法精密吸取新鮮荻蘆樣品溶液6份，測(cè)得不同放置時(shí)間下的樣品吸光度，計(jì)算RSD為0.14%，表明荻蘆樣品中總氨基酸含量在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4重復(fù)性試驗(yàn)。按照“1.3.6.4”方法操作，計(jì)算平均氨基酸含量為21.24%，RSD為0.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.5

回收率試驗(yàn)。按照“1.3.6.5”方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表1），加入低、中、高3個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均回收率分別為996%、99.3%、99.5%，RSD分別為0.06%、0.52%、0.32%。表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于測(cè)定荻蘆中總氨基酸含量。

2.2樣品含量測(cè)定

由表2可見，同一品種、同一產(chǎn)地所采集的荻蘆，經(jīng)不同的處理方式（減壓冷藏貯存、速凍貯存、土法貯存、化學(xué)貯存），得到其各自提取液均在401 nm附近有最大吸收；通過比較可知，減壓冷藏貯存法保存的荻蘆所含總氨基酸含量較高。

3小結(jié)與討論

該試驗(yàn)通過對(duì)荻蘆采用不同的綠色保鮮技術(shù)，測(cè)定一段時(shí)間內(nèi)總氨基酸含量，來(lái)尋求最佳的保鮮技術(shù)。從試驗(yàn)結(jié)果可知，在3個(gè)月內(nèi)，減壓冷藏貯存和土法貯存都可以有效地減少新鮮荻蘆中總氨基酸的損失，既保持產(chǎn)品良好的外觀，提高消費(fèi)者購(gòu)買欲望，又是綠色無(wú)添加的荻蘆保鮮方法。目前荻蘆加工產(chǎn)品在市場(chǎng)上比較少，對(duì)荻蘆中有效成分的提取開發(fā)還不夠深入。因此，荻蘆作為一種經(jīng)濟(jì)作物，有著非常好的發(fā)展前景和開發(fā)利用價(jià)值[6]。而該研究建立了紫外分光光度法測(cè)定谷氨酸含量的具體方法，并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確度較高、重復(fù)性好，且相對(duì)于其他方法，紫外分光光度法成本較低，適于氨基酸的測(cè)定，可廣泛應(yīng)用。但要注意試驗(yàn)前必須除去樣品中的糖類、苷類、生物堿及醇溶性蛋白等干擾性成分，該研究采用70%乙醇提取除去雜質(zhì)。

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