齊悅，張慧，孫凱牡丹江醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院；牡丹江醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

輔酶Q10對缺血性腦卒中大鼠血漿CRP、NF-κΒ、TNF-α水平的影響

齊悅1，張慧1，孫凱2
1牡丹江醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院；2牡丹江醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

目的：研究輔酶Q10對缺血性腦卒中大鼠血漿CRP、NF-κΒ、TNF-α水平的影響，為臨床應(yīng)用該藥物預(yù)防和治療缺血性腦血管病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：采用線栓法栓塞大鼠大腦中動脈建立局灶性缺血性腦卒中模型。用longa五級四分法對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。用ELISA法檢測血清中CRP、NF-κB、TNF-α水平在不同組間的變化。用SPSS13.0軟件，方差分析法對各組間結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：各組神經(jīng)學(xué)評分差異具有顯著性。各組血漿CRP、NF-κΒ、TNF-α水平也具有顯著性差異。干預(yù)組CRP、NF-κΒ、TNF-α水平隨劑量的升高而降低。結(jié)論：大鼠血漿CRP、NF-κΒ、TNF-α的含量，其降低水平與輔酶Q10含量有關(guān)。說明輔酶Q10對缺血性腦卒中具有保護(hù)作用。

輔酶Q10；缺血性腦卒中；大鼠

腦卒中（Stroke）是一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病,是人類致死致殘的重要因素。C-反應(yīng)蛋白（CRP）是一種靈敏的炎性標(biāo)志物,在缺血性腦組織損傷的級聯(lián)反應(yīng)中的重要環(huán)節(jié)[1]。核轉(zhuǎn)錄因子-kappaB（NF-κB）與腦卒中的關(guān)系在報道很少，但最新研究表明阻斷核轉(zhuǎn)錄因子-κB通路成為治療缺血性腦卒中的靶點(diǎn)[2]。腫瘤壞死因子（TNF-α）是人體內(nèi)最重要的具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，它與高血壓、動脈粥樣硬化和缺血性腦卒中等多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)[3]。輔酶Q10具有自由基清除、穩(wěn)定細(xì)胞膜維持鈣離子通道完整性、免疫增強(qiáng)、促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶、改善微循環(huán)障礙等作用[4]。本課題通過研究輔酶Q10對缺血性腦卒中大鼠血清CRP、NF-Κβ、TNF-α水平的影響及不同劑量的影響程度，確定輔酶Q10對缺血性腦卒中是否具有保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用該藥物預(yù)防和治療缺血性腦血管病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

一、材料與方法

1材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物：體重250-350g雌雄各半的健康成年Wister大鼠，由牡丹江醫(yī)學(xué)院動物中心提供。

1.2 試劑及藥品：大鼠CRPELISA、NF-κΒELISA、TNF-αELISA試劑盒，輔酶Q10，玉米油等。

1.3 儀器設(shè)備：離心機(jī)，-80℃超低溫冰箱，酶標(biāo)儀，恒溫水浴箱，電子天平，微量加樣器等。

2方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組：將30大鼠編號。隨機(jī)分五組，每組N=6、假手術(shù)組和模型組給予玉米油灌胃7天，各干預(yù)組分別給予不同劑量的輔酶Q10（10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg以相同的玉米油為溶劑）溶液灌胃7天。

2.2 大鼠缺血性腦卒中模型的制備：利用線栓法制備大鼠缺血性腦卒中模型。

2.3 神經(jīng)功能評分：參考Longa的5級4分法。

2.4 標(biāo)本采集：腹腔麻醉，腹主動脈采血,離心。將血漿與剩余血細(xì)胞放入標(biāo)記后-80℃冰箱保存。

2.5 標(biāo)本檢測：按試劑盒說明書進(jìn)行操作檢測。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料用xˉ±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行重復(fù)測量方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，P＜0.05認(rèn)為差異有顯著性。不同組間的計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1 神經(jīng)學(xué)評分各組神經(jīng)學(xué)評分差異具有顯著性，經(jīng)多重比較，模型組神經(jīng)功能評分明顯高于假手術(shù)組，輔酶Q10干預(yù)組神經(jīng)功能評分明顯低于模型組而高于假手術(shù)組。干預(yù)組內(nèi)神經(jīng)功能評分隨輔酶Q10劑量增加而降低。見表1。

表1 各組的神經(jīng)功能學(xué)評分

3.2 血漿CRP、NF-kB、TNF-α水平比較各組間血漿CRP、NF-kB、TNF-α水平差異具有顯著性。血漿CRP、NF-kB、TNF-α水平均為模型組高于假手術(shù)組，輔酶Q10干預(yù)組高于假手術(shù)組低于模型組。干預(yù)組內(nèi)水平隨輔酶Q10劑量增加而降低。見表2。

表2 各組間血漿CRP、NF-kB、TNF-α水平比較（xˉ±s，ng/ml）

二、討論

從行為學(xué)上觀察及數(shù)據(jù)可知：模型組神經(jīng)功能評分明顯高于假手術(shù)組，說明局部腦組織缺血后造成了明顯的神經(jīng)功能障礙；輔酶Q10處理后，神經(jīng)功能評分明顯低于模型組（P=0.000）,提示輔酶Q10能夠改善局灶性缺血性損傷后的神經(jīng)功能。我們分析輔酶Q10對神經(jīng)的保護(hù)作用可能是因?yàn)槠渚哂蟹€(wěn)定細(xì)胞膜維持鈣離子通道完整性的功能。

缺血性腦卒中大鼠血漿CRP、NF-kB、TNF-α水平：模型組均高于假手術(shù)組（P=0.000）；輔酶Q10干預(yù)組均高于假手術(shù)組（P= 0.000）低于模型組（P=0.000）；輔酶Q10干預(yù)組內(nèi)水平均隨輔酶Q10劑量增加而降低。假手術(shù)組由于具有創(chuàng)口能夠引起炎癥反應(yīng)，因而會引起CRP、NF-kB、TNF-α等炎癥因子水平升高。

已有研究表明[5]，通過注射輔酶Q10，能夠清除自由基和增強(qiáng)免疫，降低血漿CRP水平。

參與免疫反應(yīng)的早期和炎癥反應(yīng)各階段的許多分子都受NF-κB的調(diào)控，所以要降低NF-κB水平就一定要做到增強(qiáng)免疫和抗炎。輔酶Q10具有免疫增強(qiáng)作用，在降低NF-kB水平中起到重要作用。

李海龍,等在文獻(xiàn)中提到，隨著PSD患者抑郁病情程度逐漸加重,血清IL-2、IL-6、TNF-α表達(dá)水平呈明顯升高趨勢（P＜0.05）[6]。所以有效調(diào)節(jié)血清細(xì)胞因子水平可成為治療PSD的新途徑。

三、小結(jié)

神經(jīng)功能評分顯示局部腦組織缺血后造成了明顯的神經(jīng)功能障礙而輔酶Q10能夠改善局灶性缺血性損傷后的神經(jīng)功能。改善水平隨劑量增加而升高。

血漿中CRP、NF-kB、TNF-α水平測定顯示：輔酶Q10可以降低缺血性腦卒中大鼠血清CRP、NF-κΒ、TNF-α的水平。并且降低的程度與輔酶Q10劑量相關(guān)，劑量越高影響越大。

[1]郭娜飛,王倩,周海霞等.進(jìn)展性缺血性腦卒中的危險因素分析[J].臨床合理用藥，2017,10（1）：9-12.

[2]裴雯雯,董莎,劉瑞珍.炎性信號通路與缺血性腦卒中[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2014,12（9）：1141-1142.

[3]牛瑩瑩,姚立言,郭毓鵬等.C-反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子-α與缺血性腦卒中的關(guān)系病例對照研究[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2014,35（2）：38-40.

[4]蔡麗敏.阿伐他丁單用及與輔酶Q10連用對急性腦卒中血脂和肝功能的影響[D].山東：泰山醫(yī)學(xué)院，2014：16.

[5]樂凱艷,夏章平.輔酶Q10注射液對侵襲性牙周炎患者齦溝液TNF-α、hs-CRP影響研究[J].中國生化藥物雜志,2016,36（3）：149-150.

[6]李海龍,姚慧娟.腦卒中后抑郁患者血清細(xì)胞因子的水平變化及臨床意義[J].西南軍醫(yī),2016,5（3）：249-250.

孫凱。