莊 嚴(yán),栗俊杰,張?jiān)娒?李小燕

(深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院,廣東 深圳518067)

肺炎支原體感染的兩種不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法分析

莊 嚴(yán),栗俊杰,張?jiān)娒?李小燕

(深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院,廣東 深圳518067)

目的 通過對(duì)被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)抗體與熒光定量PCR法檢測(cè)肺炎支原體核酸的對(duì)比分析，探討兩種不同肺炎支原體感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法在臨床診斷中的價(jià)值。方法 選擇我院兒科支氣管肺炎病例848例，進(jìn)行肺炎支原體抗體檢測(cè)、肺炎支原體核酸檢測(cè)，對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 在出院確診肺炎支原體感染的462例病例中，肺炎支原體MP核酸檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的55.63%，MP抗體檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的79.00%。二者結(jié)合檢測(cè)陽性檢測(cè)率為99.56%。兩種方法男女陽性感染率差異無顯著性；各年齡組檢測(cè)陽性分布，90%的肺炎支原體感染陽性結(jié)果集中在1至9歲，95%陽性集中在1-12歲。結(jié)論 兩種方法檢測(cè)肺炎支原體感染，都顯示肺炎支原體感染在年齡上以1-9歲兒童高發(fā)，性別上無差異；在臨床診斷上兩種方法相互彌補(bǔ)，建議同時(shí)選擇兩種方法以提高臨床的診斷率。

被動(dòng)凝集法;熒光定量PCR法;肺炎支原體

(ChinJLabDiagn,2017,21:0799)

肺炎支原體(mycoplasm pneumoniae MP)是引起原發(fā)性非典型性肺炎及其他呼吸道感染性疾病的常見病原微生物，多見于兒童和嬰幼兒。由于MP無細(xì)胞膜，作用于細(xì)胞膜的抗菌藥物對(duì)其無殺傷作用，故其感染的治療與其它細(xì)菌和病毒的感染治療方案不同。因此，實(shí)驗(yàn)室特異、快速的MP病原體的檢測(cè)，對(duì)于臨床診斷、治療肺炎支原體感染意義凸顯。本文通過對(duì)被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)抗體與熒光定量PCR法檢測(cè)肺炎支原體核酸的對(duì)比分析，探討兩種不同肺炎支原體感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法在臨床診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 研究對(duì)象

選取我院2015.06—2016.06期間兒科支氣管肺炎住院患者848例，其中出院確診為肺炎支原體肺炎(肺炎支原體感染)的病例462人?；純耗挲g范圍1月至14歲。

臨床確診為肺炎支原體肺炎(肺炎支原體感染)的依據(jù)[1]：①臨床癥狀和體征表現(xiàn)，如持續(xù)發(fā)熱、咳嗽、肺部聞及濕羅音、哮鳴音等；和(或)②用藥情況，青霉素類抗菌藥物3天以上均無效；和(或)③既往史，近半年內(nèi)有過肺炎支原體感染； ④實(shí)驗(yàn)室檢查，X線檢查可有云霧狀、扇形等多種形態(tài)浸潤影，呈節(jié)段性分布；病原學(xué)檢查，肺炎支原體抗體檢測(cè)陽性，滴度大于1∶160；和(或)肺炎支原體核酸檢測(cè)陽性。

1.1.2 標(biāo)本收集

肺炎支原體抗體檢測(cè)標(biāo)本采集用普通干燥管采集患者靜脈血3-5 ml，離心后血清標(biāo)本；肺炎支原體核酸檢測(cè)標(biāo)本收集病人咽拭子或痰標(biāo)本。

1.2 檢測(cè)方法及試劑來源

1.2.1 肺炎支原體抗體檢測(cè) 采用珠海麗珠試劑股份公司提供的富士瑞必歐株式會(huì)社的被動(dòng)凝集法肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒(商品名：賽樂迪亞-麥克II)；嚴(yán)格按試劑說明操作、判讀結(jié)果，結(jié)果大于等于1:40判讀陽性，陽性1∶160為確診肺支感染。

1.2.2 肺炎支原體核酸檢測(cè) 采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供的肺炎支原體核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)；嚴(yán)格按試劑說明操作、判讀，結(jié)果大于500 copy/μl為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)肺炎支原體感染陽性結(jié)果比較 兩種方法陽性符合率35.06%；陰性符合率0.43%；不符合率64.50%(其中MP核酸檢測(cè)陽性抗體檢測(cè)陰性占20.56%，MP抗體檢測(cè)陽性核酸檢測(cè)陰性占43.94%)；MP核酸檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的55.63%，MP抗體檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的79.00%。二者結(jié)合檢測(cè)陽性檢測(cè)率為99.56%。見表1和表2。

表1 2種方法在支氣管肺炎中檢出肺炎支原體感染的結(jié)果比較

表2 2種方法在肺炎支原體感染患兒中的檢測(cè)結(jié)果

2.2 2種方法檢測(cè)MP感染在年齡及性別之間的陽性分布比較(表3)

表3 2種方法在檢測(cè)不同年齡組不同性別間肺炎支原體感染情況比較 [陽性數(shù)(構(gòu)成比%)]

2種方法檢測(cè)，男女性別間比較P>0.05，無顯著差異。各年齡組檢測(cè)陽性分布，70%的肺炎支原體感染患兒集中在1-6歲，90%的陽性結(jié)果集中在1至9歲，95%陽性集中在1-12歲。

3 討論

現(xiàn)階段，MP實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要包括：經(jīng)典的MP分離培養(yǎng)和鑒定法、血清學(xué)MP抗體檢測(cè)、MP抗原檢測(cè)、MP核酸檢測(cè)。

經(jīng)典的MP分離培養(yǎng)和鑒定法，特異性強(qiáng)，是公認(rèn)的支原體鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于其培養(yǎng)難度大、耗時(shí)(一般要3-4周)，MP含量極少、培養(yǎng)基及操作不當(dāng)?shù)惹闆r下也存在一定的假陰性，臨床工作中大部分醫(yī)院已經(jīng)不再選擇此方法[2]。MP抗原檢測(cè)，標(biāo)本主要采集咽部拭子，采用熒光免疫的方法，由于取材及方法學(xué)上的存在一定的缺陷，導(dǎo)致其陽性率不高，所以現(xiàn)階段臨床工作中選擇更多是血清學(xué)MP抗體檢測(cè)和MP核酸檢測(cè)。本文就后兩種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行了1年的回顧性對(duì)比分析顯示。

3.1 在臨床診斷上兩種方法相互彌補(bǔ)，建議同時(shí)選擇兩種方法以提高臨床的診斷率

在本組對(duì)比分析中，兩種方法陽性符合率35.06%；陰性符合率0.43%；陽性不符合率64.50%(其中MP核酸檢測(cè)陽性抗體檢測(cè)陰性占20.56%，MP抗體檢測(cè)陽性核酸檢測(cè)陰性占43.94%)。對(duì)陽性陰性的符合性標(biāo)本，基本可以作為肺炎支原體陽性及陰性的預(yù)測(cè)，對(duì)于陽性不符合的標(biāo)本，核酸陽性的標(biāo)本可以作為陽性預(yù)測(cè)，但是抗體檢測(cè)陽性的標(biāo)本必須結(jié)合臨床表現(xiàn)進(jìn)行適當(dāng)?shù)膮^(qū)分。同時(shí)有2例2種方法檢測(cè)均為陰性，但結(jié)合臨床癥狀及影像結(jié)果，應(yīng)用大環(huán)內(nèi)脂類抗生素治療有效，治愈后血清學(xué)檢測(cè)抗體陽性，出院診斷肺炎支原體感染。

肺炎支原體抗體檢測(cè)采用被動(dòng)凝集方法，此方法的局限性是抗體為IgG、IgM兩種， 一般在發(fā)病后7天以后IgM出現(xiàn)，21-28天達(dá)到高峰，而MP感染的潛伏期為2-3周，IgM可以作為早期診斷的指標(biāo)；但同時(shí)IgG開始出現(xiàn)，以至于治愈后仍有一定的抗體滴度[3,4]，所以對(duì)感染早期以及免疫力低下的患者的感染可能存在假陰性，而對(duì)治愈后的標(biāo)本可能存在假陽性。另外鑒于抗體檢測(cè)不是直接檢測(cè)的肺炎支原體病原體，一些專家建議檢測(cè)急性期及恢復(fù)期雙份血清來明確診斷，因此診斷時(shí)間會(huì)延長。此方法的優(yōu)點(diǎn)在于采用標(biāo)本為血清，具有相對(duì)的穩(wěn)定性。

肺炎支原體核酸檢測(cè)，采用熒光定量PCR法。此方法特異性、敏感性高，尤其在感染早期早于抗體可以檢測(cè)出陽性結(jié)果。本分析中MP核酸檢測(cè)陽性抗體檢測(cè)陰性占20.65%，對(duì)于早期肺炎支原體感染診斷很有價(jià)值。此方法取樣為痰液或咽拭子，在本文統(tǒng)計(jì)中發(fā)現(xiàn)痰標(biāo)本陽性檢出比較高，也有同行證實(shí)[5]，但臨床上兒童尤其是幼兒留取痰標(biāo)本困難，基本留取咽拭子，由于取材原因檢測(cè)陽性率不高，存在一定的假陰性。

本分析中MP核酸檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的55.63%，MP抗體檢測(cè)陽性占總檢出肺炎支原體感染的79.00%。二者結(jié)合檢測(cè)陽性檢測(cè)率為99.56%。

綜上分析，鑒于兩種方法可以相互補(bǔ)充，建議臨床在肺炎支原體的診斷時(shí)針對(duì)實(shí)驗(yàn)室方面應(yīng)選擇抗體和熒光定量PCR兩種方法，以提高診斷率。

3.2 兩種方法檢測(cè)肺炎支原體感染，都顯示肺炎支原體感染在兒童易發(fā)年齡集中在1-9歲，性別上無差異。與文獻(xiàn)報(bào)道基本吻合[6]。

[1]葛軍波，徐永健.《內(nèi)科學(xué)》[M].第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，49-50.

[2]孫紅妹.肺炎支原體感染的實(shí)驗(yàn)室診斷[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2007，22(4):245.

[3]宋世軍，張 旋，謝世瑩.兒童肺炎支原體抗體檢測(cè)與肺炎支原體培養(yǎng)對(duì)照研究[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007,15(7):98.

[4]胡元生，溫 和，周銀娣,等.三種肺炎支原體檢測(cè)方法的比較[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2008,10(1):9.

[5]張學(xué)紅， 聶曉晶， 張國成,等.咽拭子及痰液標(biāo)本肺炎支原體培養(yǎng)對(duì)支原體肺炎診斷的影響[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2009,12：1122.

[6]李 穎,荊紅波,馬紅梅,等.2011年北京市順義區(qū)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)肺炎支原體檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志 2012，9：2102.

Analysis of two different laboratory dignosis methods in detection of mycoplasma pneumoniae infection

ZHUANGYan,LIJun-jie,ZHANGShi-meng,etal.

(ShenzhenShekou’sHospital,Shenzhen518067，China)

Objective To explore the clinical diagnosis value in two different clinical lab’s diagnosis of mycoplasma pneumoniae through comparative analysis of detecting mycoplasma pneumoniae antibody by Passive Particle Agglutination and detecting mycoplasma pneumoniae DNA by PCR Fluorescence Quantification.Methods Detect mycoplasma pneumoniae antibody and mycoplasma pneumoniae DNA in 848 cases in-patient children of bronchopneumonia and analysis the result by statistics method.Results Positive rate of mycoplasma pneumoniae antibody is 55.63% and mycoplasma pneumoniae DNA is 79.00% in 462 cases those had been diagnosised infection of mycoplasma pneumoniae.Two methods together had detected 99.56% infection of mycoplasma pneumoniae.And the positive rates between two methods had no statistical significance difference in different sex.About 90% mycoplasma pneumoniae infection children’s age were from 1 to 9 years old,and 95% of them were from 1 to 12 years old by two methods showing.Conclusion Two methods both showed infection of mycoplasma pneumoniae usually from 1 to 9 years old and having no sex difference;And detecting mycoplasma pneumoniae antibody by Passive Particle Agglutination and detecting mycoplasma pneumoniae DNA by PCR Fluorescence Quantification can make up eath other’s shortage,we suggest choicing two methods together in dignosis of infection of mycoplasma pneumoniae.

Passive Particle Agglutination;PCR Fluorescence Quantification;mycoplasma pneumoniae

1007-4287(2017)05-0799-03

R446

A

莊嚴(yán)，女，46歲，碩士，副主任技師，研究方向：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)。

2016-10-09)