閻思彤， 李 勝， 于浩淼， 徐雯娟， 朱翠玲， 林子豪， 徐先祥

(華僑大學(xué) 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院，福建 泉州 362021)

正交試驗優(yōu)選藤三七提取工藝

閻思彤， 李 勝， 于浩淼， 徐雯娟， 朱翠玲， 林子豪， 徐先祥*

(華僑大學(xué) 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院，福建 泉州 362021)

目的：優(yōu)選藤三七的提取工藝。方法：采用正交實驗法，以提取得率及總皂苷含量為評價指標(biāo)，考察乙醇濃度、提取時間、溫度和提取次數(shù)四種因素對提取工藝的影響。結(jié)果：溫度和提取次數(shù)對藤三七得率有顯著影響，最佳提取工藝條件為80 ℃水浴，以60%乙醇濃度提取藤三七3次，每次1.5 h。結(jié)論：優(yōu)選的工藝簡單可行。

藤三七；提取工藝；正交試驗；總皂苷

藤三七又名洋落葵、土三七等，因其珠芽、地下塊莖的外觀與名貴中藥三七相似而得名，來源為落葵科多年生蔓生植物藤三七[Anrederacordifolia(Ten.) Sreenis][1]，生長容易，福建省內(nèi)可常見其野生分布，福建民間有采食藤三七嫩葉和莖尖的習(xí)慣。藤三七珠芽可入藥，具有補(bǔ)肝腎、壯腰膝、抗疲勞、消腫散痰等功效，主治腰膝痹痛，病后體弱，跌打損傷等作用[2]，且安全無毒[3]。為進(jìn)一步研究開發(fā)研究藤三七，本文以正交試驗優(yōu)選了藤三七的醇提取工藝。

1 材 料

干燥藤三七藥材，由泉州市中醫(yī)院洪佳妮中藥師鑒定為藤三七[Anrederacordifolia(Ten.) Sreenis]珠芽，粉碎為粗粉備用。齊墩果酸對照品(含量測定用)，批號201206，中國食品藥品檢定研究院；香草醛、冰醋酸、高氯酸、95%乙醇、甲醇等試劑均為分析純。UV-1100紫外可見分光光度計，上海美譜達(dá)公司；BSA124S萬分之一電子天平，南京晟康生化科技公司；DUG-S2474電熱恒溫干燥箱，廈門科睿特儀器公司；HH-2 數(shù)字顯示恒溫水浴鍋，常州國華儀器有限公司。

2 方法及結(jié)果

2.1 正交試驗因素和水平

選取影響加熱回流提取的因素包括提取次數(shù)、提取溶劑、提取時間、溫度，建立四因素三水平L9(34)正交試驗，見表1。分別按照不同的提取條件，稱取藤三七藥材粗粉50 g,乙醇回流提取，過濾提取液，水浴濃縮，蒸干，計算得率。

表1 L9(34)正交試驗因素和水平表

2.2 對照品溶液的制備和比色標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱取干燥至恒重的齊墩果酸對照品1.041 mg，加甲醇溶解并定容至1 mL。對照品溶液2倍等比稀釋8個濃度，用熱風(fēng)吹去試管中溶劑，加入新配制5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL，60 ℃水浴中加熱15 min，立即冷卻，加冰醋酸5 mL并搖勻。以空白試劑調(diào)零，于400～760 nm進(jìn)行掃描，顯示在550 nm處有最大吸收，于550 nm波長處測定吸光度，以齊墩果酸濃度為橫坐標(biāo)X，以吸光度(A)值為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y=0.009X+0.092，相關(guān)系數(shù)γ=0.997 0，線性范圍為0.651～10.41 mg/mL。

2.3 供試品溶液制備和含量測定

精密稱取2.1項下制備的各藤三七提取干膏10.00 mg，置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，移至試管中，用熱風(fēng)吹去溶劑，按2.2項下方法測定A值，計算各提取物中總皂苷含量。

2.4 精密度試驗

取同一供試品溶液，按2.2項下方法連續(xù)測定6次A值，結(jié)果RSD=1.55%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按2.2項下方法，分別于0、10、15、20、25、30 min測定A，結(jié)果RSD=1.91%，表明供試品溶液在0.5 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 正交試驗結(jié)果分析

從表2和表3中藤三七提取得率結(jié)果看出，A與B因素有顯著性差異，C與D無顯著性差異，各因素影響作用主次順序為D>C>B>A, 直觀分析最優(yōu)工藝條件為 A3B2C3D2水平。而從總皂苷含量結(jié)果看，A、B、C、D因素均無顯著性差異，最優(yōu)工藝條件為A1B1C1D3。考慮到中藥提取大生產(chǎn)的實際情況以及生產(chǎn)成本，選擇最佳提取條件為A3B3C3D2，即以80 ℃水浴，60%乙醇濃度提取藤三七3次，每次1.5 h。

表2 正交試驗結(jié)果

干膏得率K11140.91128.32153.0297.58K12138.45160.02105.90234.62K13163.28154.30183.72110.44R18.27610.56625.94045.680總皂苷含量K2169.5462.5461.0142.43K2252.6848.4351.5454.34K2342.9854.2352.6568.43R28.8534.7033.1568.666

表3 方差分析

2.7 驗證試驗

稱取藤三七粗粉100 g，按優(yōu)選提取條件溫度80 ℃，提取次數(shù)為3次，單次提取時間為1.5 h，乙醇濃度為60%的工藝進(jìn)行提取，平行3份。結(jié)果浸膏得率分別為1.057%,1.564%，1.342%，其中的總皂苷含量分別為15.44，15.76，16.10 mg/mL，平均提取量15.77 mg/mL，RSD=1.38%，表明優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定可行。

3 討 論

國內(nèi)外對藤三七的化學(xué)成分研究較少，化學(xué)預(yù)試驗結(jié)果表明藤三七含有多量的皂苷和糖類[4]，以及黃酮類等成分[5]。皂苷類是一類具有多種藥理作用的中藥成分，因此本試驗參考文獻(xiàn)方法[6]采用乙醇對藤三七進(jìn)行提取，溫度和提取次數(shù)對藤三七干膏得率有顯著影響，而乙醇濃度、溫度、提取次數(shù)、提取時間 4 因素對總皂苷含量無顯著影響，綜合考慮選擇合理穩(wěn)定的藤三七醇提工藝，優(yōu)化的工藝簡單易行，可用于提取藤三七的工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。

[1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草：第2卷[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:760-761.

[2]吳萍，嚴(yán)建業(yè)，黃丹，等.藤三七的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].科技導(dǎo)報，2012，30(16)：76-79.

[3]梁毅，陳君麗，吳思洋，等.落葵薯化學(xué)成分及急性毒性實驗研究[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2010,17(1)：57-58.

[4]王麗蘭，揚(yáng)鳳和，王春霖，等.藤三七的化學(xué)成分分析[J].中國藥學(xué)雜志，1990，2(11)：673.

[5] 蔣珍藕，邱宏聰，鄧聿胤.藤三七總皂苷和總黃酮提取工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(19):28-30.

[6] 蔣珍藕，邱宏聰，鄧聿胤.藤三七總皂苷的大孔樹脂純化工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20(1):26-29.

Optimization of Extraction Process forAnrederacordifoliaby Orthogonal Design

Yan Sitong,Li Sheng, Yu Haomiao,Xu Wenjuan, Zhu Cuiling, Lin Zihao, Xu Xianxiang*

(School of Biomedical Science, Huaqiao University, Quanzhou 362021, China)

Objective:To optimize extraction process forAnrederacordifolia. Method:Orthogonal design was used to study the influence of ethanol concentration, extraction times, temperature and extractive time. The extract yield and component content of total saponins were indexed as detective markers.Results: The extraction temperature and times have remarkable influence on extract yield ofAnrederacordifolia. The best extractive process conditions were heated in water bath in 80℃, extracting three times with 60% ethanol, for 1.5 hours per time. Conclusion:The optimized extraction process was reasonable and feasible．

Anrederacordifolia; extracion process;orthogonal test; total saponins

10.3969/j.issn.1006-9690.2017.01.010

2016-06-08

福建省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃項目(201510385045)。

閻思彤(1996—)，女，華僑大學(xué)生物醫(yī)學(xué)學(xué)院2014級藥學(xué)本科生。E-mail：824148103@qq.com

*通訊作者： 徐先祥(1978—)，博士，助理研究員，主要從事中藥藥理研究與中藥新藥研制開發(fā)。E-mail: xuxianxiang@163.com

R284.2

A

1006-9690(2017)01- 0035-02