張正玲+張翊玲+唐立俊+錢正敏

摘要：目的 探討卡介苗多糖核酸（BCG-PSN）是否對被動吸煙小鼠的慢性氣道炎癥有保護作用。方法 將45只雌性C57BL/6小鼠隨機分為三組：健康對照組、未治療對照組、卡介苗多糖核酸治療組。健康對照組不用任何處理，其余兩組每天進行被動吸煙1次，連續(xù)30 d。治療組：卡介苗多糖核酸0.2 ml，隔1 d肌注1次，連續(xù)30 d。實驗結束24 h內(nèi)將小鼠處死并收集標本。結果 與未治療組比較，卡介苗多糖核酸治療組小鼠肺組織、血清及肺泡灌洗液中誘生型一氧化氮合酶（iNOS）與一氧化氮（NO）顯著降低（P<0.05）。結論 卡介苗多糖核酸對被動吸煙小鼠的慢性炎癥具有一定的保護作用。

關鍵詞：卡介苗多糖核酸；小鼠；被動吸煙；一氧化氮；一氧化氮合酶

中圖分類號：R563.9 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）14-0047-03

Effects of BCG Polysaccharide Nucleic Acid on Lung Tissue，Bronchoalveolar Lavage Fluid，Serum NO and iNOS in Passive Smoking Mice

ZHANG Zheng-ling1，ZHANG Yi-ling2，TANG Li-jun1，QIAN Zheng-min1

（1.College of Life Science，Zunyi Normal University，Zunyi 563002，Guizhou，China；

2.Department of Respiratory Medicine，Guizhou Provincial People's Hospital，Guiyang 550002，Guizhou，China）

Abstract：Objective To investigate whether（BCG-PSN） has a protective effect on chronic airway inflammation in passive smoking mice.Methods 45 female C57BL/6 mice were randomly divided into three groups：healthy control group，untreated control group and BCG polysaccharide nucleic acid treatment group.Health control group without any treatment，the remaining two groups were passive smoking once a day for 30 d.Treatment group：BCG polysaccharide nucleic acid 0.2 ml，every 1 d intramuscular injection 1，for 30 d.Mice were sacrificed and samples were collected 24 h after the end of the experiment.Results Compared with the untreated group，the inducible nitric oxide synthase（iNOS）and nitric oxide（NO）were significantly decreased in lung tissue，serum and alveolar lavage fluid of BCG vaccine group（P<0.05）.Conclusion BCG polysaccharide nucleic acid has a protective effect on chronic inflammation in passive smoking mice.

Key words：BCG polysaccharide nucleic acid；Mice；Passive smoking；Nitric oxide；Nitric oxide synthase

一氧化氮（NO）在生理和病理過程中扮演不同的角色，正常水平的NO對降壓、擴張血管、抗炎及抗凝等方面發(fā)揮重要的作用。然而，高水平的NO對機體會產(chǎn)生損害作用。誘生型一氧化氮合酶（iNOS）的激活與炎癥介質、細胞因子、感染、休克、缺血、缺氧等刺激因素等密切相關。iNOS過度激活、引起大量的NO產(chǎn)生是機體損害的重要因素之一[1-3]。眾所周知，吸煙危害健康，煙霧中的尼古丁及焦油、煙堿和一氧化碳等有害物質是慢性呼吸道疾病重要的致病因素或危險因素，研究表明作為有害物質的煙霧顆粒可間接或直接通過激活iNOS mRNA表達從而產(chǎn)生大量的NO損傷肺組織[4-6]?？ń槊缍嗵呛怂幔˙CG-PSN）作為免疫調(diào)節(jié)劑廣泛應用于臨床，BCG-PSN是采用卡介苗經(jīng)熱酚法提取的多糖核酸類物質，具有活化巨噬細胞，增強T細胞、B細胞介導的細胞免疫和體液免疫功能[13-15]，有研究表明應用BCG-PSN在預防和治療慢性支氣管炎、哮喘、肺癌、自身免疫性疾病等方面有較好療效，但BCG-PSN是否通過降低iNOS及NO方式來發(fā)揮保護作用的文章未見報道，本研究旨在于了解卡介苗多糖核酸是否會保護小鼠氣道慢性炎癥，是否會降低iNOS及NO的表達水平，并圍繞此目的而展開。

1資料與方法

1.1一般資料

6w齡雌性C57BL/6小鼠45只（購買于北京，SPF級），體質量18～20 g，動物隨機分為三組：健康對照組、未治療對照組、卡介苗多糖核酸治療組。健康對照組不作任何處理，其余兩組進行被動吸煙1次/d，應用2根/次香煙形成煙霧（黃果樹牌香煙，焦油含量13 mg，由貴陽卷煙廠生產(chǎn)），由特制的玻璃裝置（35 cm×25 cm×15 cm，有香煙熏口與出口，保證香煙煙霧濃度均勻）進行熏煙，燃10根/d香煙，1次/d，連續(xù)30 d?？ń槊缍嗵呛怂幔˙CG-PSN）由湖南九芝堂斯奇康生產(chǎn)。BCG-PSN治療組于吸煙4 h/d以前，用卡介苗多糖核酸0.2 ml，隔1 d肌注1次（每只小鼠大腿左右各肌注0.1 ml），實驗時間為30 d（每只香煙焦油含量及牌子都固定不變）。被動吸煙時小鼠會出現(xiàn)呼吸頻率加快、腹式呼吸明顯，煩躁不安等癥狀。但30 d被動吸煙中未因為煙霧吸入導致呼吸困難方面的死亡。

1.2標本收集與處理

經(jīng)被動吸30 d后，于被動吸煙后的24 h內(nèi)將小鼠眼球取血處死，血清用于iNOS及NO檢測，其中8只小鼠肺組織部分應用于病理活檢及部分應用于勻漿后取上清液，-80℃保存?zhèn)錂z測；其余7只進行雙側肺泡灌洗液，每次應用1 ml PBS進行灌注并每次反復抽吸3遍后回收，回收率達85%以上，每只小鼠灌注3次，并將3次回收的灌注液混合后離心并取上清液，并儲存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3染色

肺組織切片后行HE染色及PAS染色，血清及肺泡灌洗液、肺組織iNOS及NO檢測試劑盒均購買于南京建成生物工程研究所。操作嚴格按照說明書執(zhí)行。肺組織勻漿上清液的iNOS western Blot檢測抗體及β-actin抗體均購買于美國Santa cruz公司。

1.4統(tǒng)計學分析

采用SPSS19.0軟件，數(shù)據(jù)以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間采用單因素方差分析，多個樣本均數(shù)兩兩比較采用q檢驗。

2結果

2.1小鼠肺組織切片進行H&E染色

卡介苗多糖核酸治療能改善肺支氣管周圍的炎癥細胞浸潤及血管滲出，減少肺泡水腫及肺間隔增厚、融合、斷裂等情況，通過病理檢測能直觀地反映BCG-PSN對支氣管哮喘的保護作用，見圖1。

2.2小鼠肺組織、肺泡灌洗液及血清中iNOS及NO表達情況

結果顯示，卡介苗多糖核酸治療組iNOS及NO表達水平顯著降低，見表1。