王志芳， 劉 巖 ，肖 麗，孟祥玲，趙恩鋒 ，李勝水

1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院血液腫瘤科 (滄州 061000 ),2.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科 (滄州 061000 )

FOXP1與Livin在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義*

王志芳1， 劉 巖2，肖 麗1，孟祥玲1，趙恩鋒1，李勝水2

1.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院血液腫瘤科 (滄州 061000 ),2.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科 (滄州 061000 )

目的：探討FOXP1、Livin在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的表達(dá)及相關(guān)性。方法：選取經(jīng)病理確診的DLBCL患者76例作為觀察組，以反應(yīng)性淋巴結(jié)增生患者42例作為對(duì)照組。觀察組中根據(jù)不同指標(biāo)分組：低危組36例和高危組40例；Non-GCB組41例和GCB組35例；結(jié)內(nèi)組43例和結(jié)外組33例；無(wú)B癥狀組45例和有B癥狀組31例。每組均檢測(cè)FOXP1和Livin的表達(dá)及二者的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組中Livin、FOXPI表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Livin 、FOXPI在高危組、Non-GCB組高表達(dá)患者較多，和對(duì)應(yīng)的低危組、GCB組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Livin在有B癥狀組高表達(dá)患者較多，和無(wú)癥狀組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Livin 、FOXPI在Non-GCB型DLBCL中呈正相關(guān)。結(jié)論：FOXP1、Livin在DLBCL中均有高表達(dá)，且和DLBCL的原發(fā)部位、IPI評(píng)分、病理類型等有關(guān)；其有望成為判斷DLBCL預(yù)后的指標(biāo)。

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)屬于非霍奇金淋巴瘤中的一種疾病，在B細(xì)胞淋巴瘤中占約40%，惡性程度較高，異質(zhì)性明顯[1]。因此，為判斷其預(yù)后，尋找新的生物學(xué)指標(biāo)非常有必要。叉頭框蛋白P1(Forkhead box p1，F(xiàn)OXP1)屬于FOXP亞家族中的轉(zhuǎn)錄因子成員，并具有多種生物學(xué)功能。具研究顯示[2]，其能促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，但FOXP1的預(yù)后仍有爭(zhēng)論。Livin基因?qū)儆诘蛲鲆种频鞍准易逯谐蓡T，已有研究證實(shí)，Livin在DLBCL中高表達(dá)提示患者預(yù)后不良。為了給DLBCL的預(yù)后判定提供科學(xué)依據(jù)，本研究設(shè)計(jì)了FOXP1、Livin在DLBCL表達(dá)中的關(guān)系研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2001-2016年本院收治的并經(jīng)過(guò)病理確診的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者76例作為觀察組，以反應(yīng)性淋巴結(jié)增生患者42例作為對(duì)照組。觀察組男40例，女36例，年齡平均(38.9±3.7)歲；對(duì)照組中男23例，女19例，年齡25～75歲，平均(37.9±4.7)歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組中根據(jù)不同指標(biāo)分組：根據(jù)IPI評(píng)分分為低危組(0～2分)36例和高危組(3～5分)40例；根據(jù)病理類型分為non-GCB組41例和GCB組35例；根據(jù)原發(fā)部位分為結(jié)內(nèi)組43例和結(jié)外組33例；根據(jù)B癥狀有無(wú)分為無(wú)B癥狀組45例和有B癥狀組31例。觀察組各組間經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析性別、年齡等一般資料方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

入選標(biāo)準(zhǔn)： ①所有病例均根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床表現(xiàn)、及病理學(xué)檢查等符合DLBCL的診斷標(biāo)準(zhǔn)。②初次確診在本院治療，且用相同化療方案。③自愿接受免疫組織學(xué)檢查，臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)： ①嚴(yán)重肝、腎、心等嚴(yán)重功能不全者；②有急性感染、其他部位有惡性腫瘤等不適合參與研究的患者。

2 研究方法 檢側(cè)標(biāo)本取得后，用10%甲醛(中性)溶液固定，切片用石蠟包埋，厚度約3～4μm。烘烤2h，置恒溫箱(60℃)中24h，然后脫蠟(用二甲苯)、脫水(用梯度乙醇)、修復(fù)(用枸櫞酸修復(fù)液，進(jìn)行高壓修復(fù)2min)。用H2O2(濃度3%)阻斷內(nèi)源性的過(guò)氧化氫酶，PBS處理，加封閉用羊血清，進(jìn)行一抗孵育(FOXP1多克隆抗體、Livin多克隆抗體均由武漢博士德生物公司提供)，置于冰箱中(4℃)過(guò)夜、復(fù)溫(37℃恒溫箱中)、沖洗(用PBS沖洗。時(shí)間5min)。二抗孵育(用50μl生物素處理)，置于恒溫箱(37℃)中孵育10min，經(jīng)PBS沖洗3次后，用鏈霉素抗生物素-過(guò)氧化物的酶溶液(50μl)，恒溫箱中孵育約20min，沖洗3次。之后，在切片中加入DAB溶液2滴，放入顯微鏡下觀察，陽(yáng)性顯色棕黃色或棕褐色。自來(lái)水沖洗，后復(fù)染、透明、封片。定位用低倍顯微鏡觀察，然后用高倍顯微鏡觀察。

3 結(jié)果判定 200倍光鏡下，隨機(jī)選5～10個(gè)視野，癌細(xì)胞計(jì)數(shù)100～200個(gè)，F(xiàn)OXP1和Livin表達(dá)用二級(jí)計(jì)分法進(jìn)行分析；染色強(qiáng)度有4個(gè)等級(jí)：無(wú)染色表示0分，淺黃色表示1分，黃色表示2分，棕黃色和棕褐色表示3分；陽(yáng)性細(xì)胞百分率表示: 陽(yáng)性細(xì)胞≤5% 表示0分，6%～25% 表示1分，26%～50% 表示2分，>50% 表示3分；表達(dá)情況用二者乘積: 0分表示(-)，1～4表示(+)，5～8表示中度陽(yáng)性() ，9～12表示強(qiáng)陽(yáng)性() ; 為便于臨床統(tǒng)計(jì)分析，(-)和(+)歸于低表達(dá)，()和()歸于高表達(dá)。

4 觀察指標(biāo) 分析對(duì)照組及觀察組Livin、FOXPI的表達(dá)情況；分析觀察組各組中Livin、FOXPI的表達(dá)情況；分析在DLBCL中Livin、FOXPI高表達(dá)的相關(guān)性。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩變量間的相關(guān)性采用Spearman檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 對(duì)照組及觀察組Livin 、FOXPI的表達(dá)情況 觀察組中Livin 高表達(dá)60.53%，F(xiàn)OXPI高表達(dá)76.32%，均分別高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 兩組Livin 、FOXPI的表達(dá)情況[例(%)]

2 觀察組中各組Livin 、FOXPI的表達(dá)情況 Livin 、FOXPI在高危組、Non-GCB組高表達(dá)患者較多，和對(duì)應(yīng)的低危組、GCB組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Livin在有B癥狀組高表達(dá)患者較多，和無(wú)癥狀組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 觀察組各組Livin 、FOXPI的表達(dá)情況[例(%)]

注：與對(duì)應(yīng)組比較，*P<0.05

3 Livin、FOXPI的表達(dá)相關(guān)性 在76例DLBCL標(biāo)本中有40例DLBCL患者(均屬于Non-GCB型)同時(shí)存在FOXP1和Livin高表達(dá)。Spearman檢驗(yàn)可知，40例non-GCB型DLBCL組織切片中FOXP1和Livin高表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.825,P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 Livin 、FOXPI的表達(dá)在non-GCB型DLBCL中的相關(guān)性(例)

討 論

彌漫性大B細(xì)胞瘤進(jìn)展迅速[3]，侵襲性較強(qiáng)，預(yù)后較差。FOXP1是FOX家族中成員，能夠參與多種人體正常生理過(guò)程[4]。胡成如[5]報(bào)道，F(xiàn)OXP1表達(dá)和惡性腫瘤臨床特點(diǎn)及預(yù)后密切相關(guān)。Livin 為凋亡抑制蛋白家族中成員，主要通過(guò)對(duì)蛋白酶、信號(hào)傳導(dǎo)的抑制來(lái)抵抗細(xì)胞凋亡。王鋒剛[6]研究顯示，Livin在很多腫瘤患者中，呈現(xiàn)較高的表達(dá)。這可能是因?yàn)長(zhǎng)ivin 正常的凋亡機(jī)制受到損傷，使惡性潛能積累，發(fā)生腫瘤。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)OXP1、Livin 在DLBCL中的表達(dá)與反應(yīng)性淋巴結(jié)增生中的FOXP1、Livin比較，明顯升高(P<0.05)，此結(jié)果和張亞楠[7]的研究一致。本研究還顯示，F(xiàn)OXP1、Livin在DLBCL的高危組、有B癥狀組、Non-GCB組有較高的表達(dá)，提示FOXP1、Livin和DLBCL臨床病理特征有關(guān)。和夏靖媛[8]的研究結(jié)果相似。本研究中FOXP1在DLBCL中B癥狀的有無(wú)方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Livin在B癥狀有無(wú)方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FOXP1高表達(dá)提示腫瘤細(xì)胞有免疫逃逸現(xiàn)象，Livin 高表達(dá)則說(shuō)明細(xì)胞凋亡機(jī)制出現(xiàn)障礙。FOXP1和Livin的表達(dá)在Non-GCB型DLBCL中呈正相關(guān)。這可能是因?yàn)镕OXP1參與了NF-κB信號(hào)通路活化，在轉(zhuǎn)錄水平上FOXP1高表達(dá)能夠使抗凋亡基因Livin的表達(dá)上調(diào)，使AKT途徑被激活，另外Livin也能通過(guò)其他抗凋亡途徑參與抗凋亡活動(dòng)，從而使腫瘤細(xì)胞逃逸凋亡。因此檢測(cè)FOXP1、Livin表達(dá)可能評(píng)估腫瘤預(yù)后。

綜上所述，F(xiàn)OXP1、Livin在DLBCL中均有高表達(dá)，且和DLBCL病理類型及臨床特征有關(guān)；FOXP1和Livin表達(dá)在Non-GCB型DLBCL中呈正相關(guān)。提示二者有望成為判斷DLBCL預(yù)后的指標(biāo)。

[1] 胡成如,王靖華. 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)預(yù)后因素的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2010, 23(10): 1098-1103.

[2] 胡成如,王靖華.FOXP1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2011, 16(11): 1052-1055.

[3] 曹 斌,張 曙,章建國(guó),等.乳腺癌中Livin和PTEN蛋白表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2012, 20(5):967-970.

[4] 趙 茜,侯 健.彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后相關(guān)因素研究進(jìn)展[J].腫瘤防治研究,2013, 40(6): 514-515.

[5] 胡成如,王靖華,耿懷成,等.叉頭框轉(zhuǎn)錄蛋白1在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志, 2012, 17(4): 339-342.

[6] 王鋒剛，王天昶，昊 磊，等.淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)鼻咽癌預(yù)后的研究在[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2016,45(4)：474-475.

[7] 張亞楠，劉漢鋒.FOXP1蛋白在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015,44(6)：2368-2370.

[8] 夏靖媛，徐 薪.FOXP1與Livin 基因表達(dá)對(duì)淋巴瘤病理特征及臨床預(yù)后評(píng)價(jià)價(jià)值[J].武警醫(yī)學(xué)，2016,27(12)：1237-1238.

(收稿：2017-02-03)

The relationship and clinical significance of FOXP1 and Livin two expression in diffuse large B cell lymphoma

Wang Zhifang,Liu Yan, Xiao Li,et al.

Department of Hematology and Oncology,Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine in Hebei Province(Cangzhou 061000)

Objective:To investigate the expression and correlation of FOXP1 and Livin in diffuse large B cell lymphoma (DLBCL).Methods: 76 cases of DLBCL diagnosed by pathology were selected as observation group,42 cases of reactive lymph node hyperplasia were used as control group.The observation group was grouped according to different indexes: Low risk group 36 cases and high risk group of 40 cases;Group non-GCB 41 cases and GCB group of 35 cases;There were 43 cases in the intra node group and the other in the extranodal group (n=33);There were no B symptoms in 45 cases and 31 cases of B symptom group.The expression of FOXP1 and livin were detected in each group and the correlation between the two groups. Results:The expression of Livin and foxpi in the observation group were significantly higher than those in the control group,the difference was statistically significant(P<0.05);Livin, FOXPI in high-risk group,non-GCB group of patients with high expression was more,They were compared with the corresponding low risk group,GCB group(P<0.05);Livin was higher in patients with B symptoms,compared with asymptomatic group(P<0.05);Livin,FOXPI was positively correlated with type DLBCL non-GCB .Conclusion:FOXP1 and Livin have high expression in DLBCL,It is related to the primary site of DLBCL,IPI score,pathological type and so on;It is expected to be a prognostic indicator for DLBCL.

Lymphoma,large B cell Diffuse livin/Pathology @Apoptosis-inhibitory protein F-box proteins/analysis Prognosis

*河北省滄州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(151302180)

淋巴瘤,大B細(xì)胞彌漫性/病理學(xué) @凋亡抑制蛋白 F-框蛋白質(zhì)類/分析 預(yù)后

R363

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.053