湯琛琛++++++劉亞敏++++++石玉琳++++++陳啟龍

[摘要] 表觀遺傳學是生物體表型或基因表達的遺傳改變，但是它的改變沒有影響DNA序列的變化，它強調(diào)了基因和環(huán)境的相互作用，已逐漸變?yōu)闊狳c內(nèi)容在生命科學前沿研究中。作為表觀遺傳研究進展內(nèi)容中的一部分和應答機體內(nèi)外環(huán)境變化的一種可逆修飾方式，DNA甲基化模式的異常與很多疾病有關。有研究表明，中藥可以通過干預DNA甲基化修飾過程來發(fā)揮其療效。本文分別從不同藥性中藥、中藥單體及中藥復方等方面對中藥在調(diào)控DNA甲基化修飾過程的研究進行綜述，以期為進一步研究中藥在疾病治療過程中的作用靶點及其機制提供理論依據(jù)。

[關鍵詞] 中藥；DNA甲基化；研究進展

[中圖分類號] Q523 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）06（c）-0030-04

[Abstract] Epigenetics is a genetic change of the organism phenotype or gene expression， but its alterations do not involve the changes of DNA sequences， which emphasizes the interaction between genes and environment， and it has been becoming a hot content in the frontier research of life sciences. As one content of the research progress of epigenetics and a kind of reversible modification in response to internal and external environmental changes， the abnormal of DNA methylation pattern is associated with many diseases. Previous studies show that the traditional Chinese medicine plays a role for disease treatment by DNA methylation modification. This paper summarizes the recent studies of traditional Chinese medicine in regulating the DNA methylation from the aspects of different drug properties of traditional Chinese medicine， traditional Chinese medicine monomer and Chinese compound formula， so as to provide theoretical basis for further studying the targets and mechanism of traditional Chinese medicine in the process of treatment.

[Key words] Traditional Chinese medicine； DNA methylation； Research progress

表觀遺傳學是將遺傳因素和環(huán)境因素的系統(tǒng)整合，使得生物系統(tǒng)不僅具有像基因組一樣復雜系統(tǒng)的穩(wěn)定性，同時還具有很好的適應性和精準的反應性[1]。因此，現(xiàn)代表觀遺傳學原理與中醫(yī)的整體觀念、天人相應等理論不謀而合。DNA甲基化是表觀遺傳學重要的研究內(nèi)容之一，通常是指由DNA甲基轉移酶的催化的DNA序列中腺嘌呤（A）或胞嘧啶（C）中的堿基與甲基（-CH3）發(fā)生共價結合，DNA甲基化可以通過細胞分裂傳遞給子細胞?，F(xiàn)代研究表明，中藥具有很強的調(diào)節(jié)DNA甲基化水平的能力。本文綜述了中藥在對DNA發(fā)生甲基化修飾所產(chǎn)生的影響，進而進一步探索了中藥與DNA甲基化修飾之間所具有的關系。

1 DNA甲基化的概述

DNA甲基化是表觀遺傳機制中最早被發(fā)現(xiàn)與基因沉默相關的內(nèi)容[2]，一般是在基因調(diào)控元件（如啟動子）的CpG區(qū)域發(fā)生-5mC的修飾，即在DNA甲基化轉移酶（DNA-methyl transferase，DNMT）作用下，甲基基團合成到CpG中胞嘧啶第5位碳原子上[3]的過程。因此，DNA甲基化轉移酶在對調(diào)控DNA甲基化、遺傳印記、胚胎發(fā)育、正常細胞功能的維持以及人類疾病的發(fā)生均起著重要作用。DNMT在哺乳動物家族中包含5個成員，分別為DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L，但具有甲基轉移活性只有DNMT1、DNMT3A和DNMT3B[4]。當細胞中非甲基化CpG被甲基化后，甲基結合蛋白便與之結合，染色質(zhì)構象發(fā)生改變并導致基因表達沉默。如果在啟動子區(qū)域發(fā)生DNA甲基化，轉錄因子與啟動子結合將直接受到阻礙，導致基因轉錄水平降低或不能轉錄[5-6]。研究表明，DNA甲基化修飾可通過多種途徑調(diào)控特定基因的表達，影響細胞發(fā)展進程，維持細胞穩(wěn)定，一旦甲基化修飾出現(xiàn)異常，就會引起相應疾病的發(fā)生[7]。DNMT家族在DNA甲基化修飾過程中起到了非常重要的調(diào)控作用，而中藥對DNA甲基化調(diào)控作用正是通過調(diào)節(jié)DNMT家族表達水平來實現(xiàn)的。

2 中藥對DNA甲基化的調(diào)控

2.1 不同藥性中藥對DNA甲基化的影響

中藥的藥性分為寒、熱、溫、涼，而不同藥性的中藥對DNMT家族的調(diào)控作用也不同。一般來說，寒、涼藥具有清熱、瀉火、利尿、化痰、涼血、滋陰、通便、開竅、熄風等作用。例如綠茶對DNMT表達起到抑制作用的是它的主要成分茶多酚和生物黃酮，進而調(diào)控DNA甲基化水平[8]。中藥野生甘菊的主要成分是小白菊內(nèi)酯，小白菊內(nèi)酯可利用其自身攜帶的γ-亞甲基內(nèi)酯環(huán)與Cys1226 巰基發(fā)生烷基化反應[9]，通過催化結構域硫醇鹽來干擾轉錄因子Sp1與DNMT1啟動區(qū)結合，抑制DNMT1表達，從而導致細胞在G1期出現(xiàn)靜息[10]。研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤根提取物雷公藤甲素可有效抑制乳腺癌細胞MCF-7中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B基因的表達，進而調(diào)控p53和p73基因啟動子區(qū)的甲基化水平，抑制MCF-7細胞增殖[11]。雷公藤甲素還可通過抑制人髓系白血病細胞系HL-60細胞DNMT1和DNMT3B基因表達來調(diào)控DAPK-1基因的甲基化水平，并促使DAPK-1基因表達水平上升來抑制HL-60細胞增殖及誘導細胞凋亡[12]。與寒涼藥不同，溫熱藥一般具有溫陽、散寒、利水、通絡以及暖肝散結、回陽救逆等作用。例如有一種很好的DNA甲基化抑制劑姜黃素，它主要從我國傳統(tǒng)中藥姜黃根莖中提取，能通過抑制DNMT1活性來調(diào)控整個基因組的DNA甲基化水平。在中藥丹參提取物丹參酮ⅡA處理后的肝癌HepG2細胞中，發(fā)現(xiàn)DNMT1的mRNA表達水平明顯下降，提示丹參酮可通過調(diào)控DNA甲基化水平來抑制HepG2細胞的增殖[13]。

2.2 中藥單體成分對DNA甲基化的調(diào)控作用

在惡性腫瘤中DNA甲基化水平的異常是很常見的現(xiàn)象，可呈現(xiàn)出局部CpG島甲基化不同程度增高以及整體甲基化水平低下[14]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的基因組DNA甲基化水平普遍較低，而中藥砒霜中的主要成分三氧化二砷則可以通過提高自發(fā)性狼瘡小鼠脾臟單個核細胞DNMT1基因表達水平來提升DNA甲基化水平[15]。研究發(fā)現(xiàn)，對乳腺癌細胞系T47D的p16基因啟動子區(qū)CpG島，中藥成分CDP有去甲基化作用[16]。同時，CDP對抑癌基因GSTPl啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)逆轉也具有一定的作用，從而提高其轉錄活性[17]。從中藥栝樓根提取的有效成分天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖，并誘導細胞凋亡，其主要作用機制就是通過TCS抑制DNMT家族的活性，進而調(diào)控SYK基因甲基化水平來實現(xiàn)的[18]。利用苦參堿處理白血病K562細胞后發(fā)現(xiàn)，DNA甲基化平均水平在整體細胞中出現(xiàn)明顯下降，并由此誘導了K562細胞的凋亡[19]。在不同濃度姜黃素處理的不同癌細胞中，均發(fā)現(xiàn)MGMT基因和p16基因的啟動子區(qū)CpG甲基化水平出現(xiàn)下降趨勢[20]。姜黃素還可降低鼻咽癌細胞中RECK基因的甲基化水平，通過調(diào)控MMP9的活性來抑制癌細胞生長，表明姜黃素在很多腫瘤細胞中均具有較好的去甲基化作用[21]。除此之外，在DU145前列腺癌細胞系中柚皮苷，香葉木苷和橙皮苷均具有去甲基化作用[22]。

中藥對DNA甲基化誘導的心血管疾病有逆轉作用，研究發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化和高血壓與11β-HSD2 基因有很強的關聯(lián)性，導致該基因轉錄活性及表達水平有所下降主要由該基因啟動子及第一外顯子區(qū)的CpG島發(fā)生甲基化引起，進而導致了血壓升高[23]。Liu等[24]通過將姜黃素和DNMT1的相互作用的分子對接發(fā)現(xiàn)，姜黃素發(fā)揮抑制DNMT的作用主要通過與DNMT1發(fā)生共價結合。賈鐳[25]發(fā)現(xiàn)影響DNMT3的表達是由可可及其產(chǎn)物來實現(xiàn)，DNMT3的表達可以改變動脈粥樣硬化進程。而在眼科疾病研究中，F(xiàn)arinelli等[26]發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜色素變性會導致DNMT3a的表達增加，而DNA發(fā)生甲基化的水平增加則會引起相對應的位點基因的轉錄下降。視網(wǎng)膜母細胞瘤及葡萄膜黑色素瘤甲基化的高發(fā)生率也已被證實，其中抑癌基因啟動子區(qū)甲基化是導致癌癥發(fā)生的重要因素之一[27-28]。吳文婷等[29]通過對具有調(diào)節(jié)甲基化作用的中藥進行總結后認為，依據(jù)中醫(yī)的“同病異治、異病同治”的經(jīng)典理論，具有補腎填精、益氣健脾活血、化痰散結等作用的中藥同樣也可作為眼科疾病的治療。

2.3 中藥復方成分對DNA甲基化的調(diào)控作用

中藥相對于西藥能夠作用多靶點，具有不容易產(chǎn)生耐藥性和副作用小等特點[30]。由茵陳、黨參、梔子等13味中藥組成的復方愈肝顆粒則可以同時調(diào)控DNMT1、DNMT3A和DNMT3B等3個DNA甲基化轉移酶的表達水平，進而從多個維度調(diào)節(jié)肝細胞DNA甲基化水平以達到保肝防癌的作用[31]。由半夏、天南星、茯苓、白芥子、陳皮、全蝎、雞內(nèi)金、炙甘草等組成消痰散結方，郭維[32]運用消痰散結方對胃癌細胞系的抗癌作用機制進行研究，發(fā)現(xiàn)其可以逆轉p16基因甲化，提高了p16mRNA的表達量，這個研究目前僅限于對單個癌細胞甲基化p16基因的逆轉，消痰散結方對于癌癥的別的基因的甲基化是否有逆轉作用，目前具體作用機制尚不明確，DNA去甲基化對癌基因抑制功能恢復的研究以及對新的去甲基化藥物篩選的研究均將成為新型腫瘤基因的治療手段。

在骨髓增生異常綜合征的治療中，由不同比例青黛和雄黃組成的青黃散對患者的治療效果不同，藥物中雄黃的比例越大，作用效果越明顯。高飛[33]研究發(fā)現(xiàn)，含雄黃比例高的青黃散通過抑制DNMT1 mRNA的表達，減少了SAM向DNA甲基化，降低了DNA的甲基，從而改變了患者的高基化狀態(tài)，使得患者的外周血象發(fā)生改變，達到治療的目的。雄黃為含砷劑的化合物，砷可以在機體中競爭甲基體進一步影響SAM及其代謝產(chǎn)物的變化，達到競爭甲基基團的作用。汪琛穎等[34]研究發(fā)現(xiàn)，由太子參、黃芪、玄參、丹參、僵蠶、水蛭等組成的中藥復方糖維康在治療糖尿病的過程中能通過脫去CpG島甲基來活化一些基因，從而對疾病的治療起到了作用。王蕾等[35]研究表明，由人參、鹿茸、杜仲、巴戟天等藥組成的參茸補血丸通過抑制DNA甲基化酶的活力來降低DNA甲基化水平，進而使肝腎組織中的RNA聚合酶活力提高，促進了相關功能基因的表達，促進生殖器官發(fā)育或提高組織修復。

由此可見，中藥既可以通過提高DNA甲基化水平來抑制基因的過表達，也可以通過降低DNA甲基化水平來促進低表達水平基因的表達。人體達到“陰陽”平衡的狀態(tài)并實現(xiàn)對疾病調(diào)控作用在多基因、多靶點、多成分方面，可以通過中藥不同組合。

3 小結與展望

目前，研究發(fā)現(xiàn)的對某些抑癌基因高甲基化具有作用的特異性抑制DNA甲基轉移酶，這些具有特異性抑制的酶尚未發(fā)現(xiàn)對基因組和原癌基因的低甲基化表現(xiàn)出治療作用，雖然已經(jīng)開發(fā)出一些針對DNA甲基轉移酶調(diào)控基因的表觀遺傳學機制的藥物，但這些藥物作用位點多體現(xiàn)在某一特定的位置，臨床應用發(fā)現(xiàn)這些藥物毒副作用相對較強，另外，相比這些單味中藥復方的優(yōu)勢可能更為顯著，對于疾病而言，不同藥物的組合從多種途徑共同作用卻是中藥研究的重點難點[36]。陰陽平衡狀態(tài)多依據(jù)中醫(yī)所遵循的整體觀念，從整體調(diào)節(jié)，通過中醫(yī)的五行相生相克關系，中醫(yī)藥通過調(diào)節(jié)各個臟腑的功能實現(xiàn)對疾病或不同疾病證候的治療，從微觀角度看，達到治療的目的主要通過調(diào)控基因的轉錄及其表達，使之重新恢復平衡狀態(tài)。相信隨著DNA甲基化在中藥干預下的研究不斷延伸和擴展，以及對中藥及其復方與DNA甲基化系統(tǒng)性研究的力度的變大，DNA甲基化和DNA去甲基化未來在中藥及其復方干預下它們的具體靶點和機制也會逐漸被明確，這些都將會促進對中藥的性質(zhì)闡述及其客觀化判別進程。通過藥物或基因療法等手段有目的地改變基因的甲基化狀態(tài)進而影響疾病發(fā)展進程是一項很有吸引力的研究工作，具有廣闊的應用前景。

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