趙 克， 劉康棟

(鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科， 河南 鄭州 450008)

MicroRNA-483-3p對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的作用*

趙 克， 劉康棟△

(鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院神經(jīng)外科， 河南 鄭州 450008)

目的： 探討microRNA (miRNA)-483-3p對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172生長和遷移能力的影響及潛在作用機制。方法: 實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-qPCR)檢測人腎胚細胞系HEK-293和不同神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株(A172、U251和SHG44)中miRNA-483-3p的表達水平。轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p抑制序列(miRNA-483-3p inhibitor)下調(diào)A172細胞中miRNA-483-3p的表達，采用CCK-8法和流式細胞術(shù)檢測細胞活力和周期分布；Transwell實驗檢測細胞的遷移；Western blot檢測周期相關(guān)調(diào)控因子及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的水平。雙螢光素酶報告基因分析法預(yù)測及驗證其可能的靶基因。結(jié)果: miRNA-483-3p在各型神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中高表達。沉默miRNA-483-3p后，A172細胞的活力下降并呈現(xiàn)出明顯的周期阻滯，且細胞遷移率也顯著降低。同時細胞中cyclin D1、周期蛋白依賴性激酶4、磷酸化視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白、N-cadherin及vimentin的蛋白表達水平均顯著降低，E-cadherin和β-catenin的蛋白表達水平顯著升高。雙螢光素酶報告基因分析顯示Smad4是miRNA-483-3p的可能作用靶點，A172細胞共轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p inhibitor和Smad4 siRNA可部分逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p介導(dǎo)的細胞增殖及遷移抑制。結(jié)論: 沉默miRNA-483-3p可通過靶向Smad4抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株A172的生長及遷移。

MicroRNA-483-3p; 神經(jīng)膠質(zhì)瘤; 細胞活力; 細胞遷移; Smad4

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，也是顱腦腫瘤死亡的主要原因之一，且復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差，嚴重危害著人們的身體健康[1-2]。腫瘤細胞的惡性生物學(xué)特性則是導(dǎo)致膠質(zhì)瘤治療困難的根本原因，其中基因遺傳學(xué)的改變，對深入研究膠質(zhì)瘤發(fā)病機制與其惡性表型關(guān)系具有重要的意義，特別是對基因具有調(diào)控能力的微小RNA(microRNA，mi-RNA)。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中同樣可檢測到一些表達及功能異常的microRNA，且這些異常表達的microRNA 亦被證明參與調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的生物學(xué)行為[3-4]。

miRNA-483-3p是miRNA-483大家族的一種，位于常染色體11p15.5，IGF2基因的內(nèi)含子區(qū)域，廣泛參與調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[5]。研究顯示，miRNA-483-3p可發(fā)揮癌基因作用，如在食管鱗狀細胞癌、直腸癌及胰腺癌中可檢測到miRNA-483-3p的高表達[6-8]。Wang等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中miRNA-483家族的另一員miRNA-483-5p可抑制細胞的增殖，但關(guān)于miRNA-483-3p與神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞相關(guān)生物學(xué)行為的研究還很少?；谝陨峡蒲斜尘凹氨緦嶒炇仪捌诘难芯抗ぷ鳎狙芯恐荚陉U明miRNA-483-3p對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系A(chǔ)172生長和遷移的影響，并通過生物信息學(xué)分析方法預(yù)測及驗證其可能的靶基因。

材 料 和 方 法

1 材料與試劑

人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系SHG44、U251、A172及人腎胚細胞系HEK-293均購于中科院；四季青胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、DMEM培養(yǎng)基及Opti-NEM培養(yǎng)基均購于浙江天杭生物科技股份有限公司；Lipofectamine 2000及相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑購于Invitrogen； 抗cyclin D1、周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)4、視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，Rb)、p-Rb、E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、vimentin、Smad4及GAPDH抗體購于江蘇碧云天生物技術(shù)研究所；CCK-8細胞活力分析試劑盒購于廣州賴德生物技術(shù)有限公司；細胞周期檢測試劑盒購于南京凱基公司；miRNA-483-3p抑制序列(miRNA-483-3p inhibitor，483-i)、SYBR Green I real-time PCR 試劑盒、野生型及突變型Smad4基因3’UTR-螢光素酶表達載體(WT-3’UTR和MUT-3’UTR)的構(gòu)建和測序由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司提供。

2 方法

2.1 細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染和分組 實驗用所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株(SHG44、U251和A172)及人腎胚細胞系HEK-293選用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中。每2 d換液，3～5 d消化傳代。細胞轉(zhuǎn)染按說明書要求進行，取對數(shù)生長期的細胞接種于6孔板中，待細胞融合至60%，更換為不含血清的培養(yǎng)基同步化12 h，隨后轉(zhuǎn)入質(zhì)粒。取483-i或miRNA陰性對照序列(negative control，NC)加入Opti-MEM培養(yǎng)基中室溫孵育5 min；同時另取Lipofectamine 2000加入Opti-MEM培養(yǎng)基中室溫孵育5 min，將兩者混合后室溫靜置20 min。然后將混合物加入到相應(yīng)組別的細胞中，置于培養(yǎng)箱中孵育6 h，更換為正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h。組別設(shè)置為空白對照(control，Ctrl)組、NC組和483-i轉(zhuǎn)染組。提取蛋白測定轉(zhuǎn)染效率并進行后續(xù)實驗分析。

2.2 CCK-8法測定細胞活力 將細胞接種于96孔板中(每孔1×104個)，經(jīng)過相應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)，在結(jié)束培養(yǎng)前2 h向每孔中加入CCK-8試劑并在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h。用酶標儀測定各孔450 nm處吸光度(A)。每組設(shè)置3個復(fù)孔取均值，另設(shè)單孔只加入培養(yǎng)基作為空白對照。細胞活力(%)=(A檢測時間點-A0 h)/(A0 h-A空白對照)×100% 。

2.3 流式細胞術(shù)檢測細胞周期 收集各組細胞，加冰PBS漂洗2次后離心；加70%冰乙醇于4 ℃下避光固定過夜，1 000×g離心洗去固定液。依據(jù)試劑盒說明，先后加入RNase及碘化丙啶(PI)染色液在相應(yīng)的條件下孵育，最后用流式細胞儀檢測Ex=488 nm處的熒光強度。

2.4 Transwell實驗檢測細胞遷移 收集各組細胞，加培養(yǎng)基重懸細胞并調(diào)整細胞密度至2×108/L。將細胞接種于Transwell小室的上室中，并在下室中加入完全培養(yǎng)基，置于細胞培養(yǎng)箱中孵育6 h。取出后，PBS沖洗并擦除上室表面的細胞。加90%乙醇固定Transwell小室內(nèi)的細胞，后加0.1%結(jié)晶紫染液，PBS再次漂洗后置于倒置顯微鏡下觀察并計數(shù)染色細胞的個數(shù)(每組細胞計數(shù)3個視野取均值)。

2.5 螢光素酶報告基因檢測 靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫TargetScan、miRanda和PicTar預(yù)測miRNA-483-3p的靶基因，結(jié)合文獻研究、基因序列及功能挑選預(yù)測值較高的靶點(即Smad4)進行驗證。構(gòu)建野生型及突變型Smad4基因3’UTR-螢光素酶表達載體(WT-3’ UTR和MUT-3’ UTR)，并將其和/或miRNA-483-3p inhibitor 轉(zhuǎn)入細胞中，通過檢測螢光素酶的活性來驗證Smad4是否為miRNA-483-3p的直接作用靶點。接種細胞于24孔板中，待細胞生長至60%融合，用Lipofectamine 2000將psiCHECK-2空載體、WT-3’ UTR和MUT-3’ UTR質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)，同時轉(zhuǎn)入483-i或NC。然后依據(jù)說明書要求，使用螢光素酶報告基因檢測儀進行Dual-Luciferase Reporter Assay 測定。實驗結(jié)果以螢火蟲螢光素酶活性與海腎螢光素酶活性的比值來進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2.6 Western blot測定蛋白水平 RIPA裂解提取細胞蛋白，采用BCA試劑盒定量后進行SDS-PAGE。調(diào)整上樣蛋白的總量至60 μg，并按照1∶4的體積比加入蛋白上樣緩沖液，100 ℃變性后上樣進行電泳。待藍色loading buffer跑出凝膠后將蛋白電轉(zhuǎn)至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶室溫封閉90 min，按說明書要求加入相應(yīng)比例的 I 抗4 ℃孵育過夜，TBST洗滌5 min×3次；加入相應(yīng)的 II 抗室溫孵育2 h，TBST洗滌10 min×3次，暗室中顯影、定影，沖洗膠片后進行蛋白的半定量灰度分析。

2.7 RT-qPCR實驗 依據(jù)Trizol說明書提取各組細胞中的總RNA，測定RNA樣品的A280并定量。取2 μg總RNA以逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成cDNA，調(diào)整至終體積20 μL；而后采用SYBR Green I real-time PCR的方法檢測mRNA的相對表達。PCR反應(yīng)條件為： 95 ℃ 5 s； 95 ℃ 10 s， 60 ℃ 35 s，共40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法分析mRNA的相對表達量。具體引物序列見表1。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)錄入SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示。兩組計量資料的組間差異采用t檢驗，多組計量資料行單因素方差分析，同時采用Bonferroni校正的t檢驗進行均數(shù)組間的兩兩比較，計數(shù)資料的比較采用2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 引物名稱和序列

F: forward； R： reverse.

結(jié) 果

1 miRNA-483-3p在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系中高表達

相較于人腎胚細胞系HEK-293，神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系SHG44、U251和A172中miRNA-483-3p的表達水平顯著升高，見圖1A。

2 沉默miRNA-483-3p抑制細胞生長

通過脂質(zhì)體將miRNA-483-3p inhibitor轉(zhuǎn)染至A172細胞中，采用RT-qPCR檢測miRNA-483-3p表達水平的變化。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了miRNA-483-3p inhibitor后，A172細胞中的miRNA-483-3p表達水平顯著降低(P<0.05)，見圖1B。

Figure 1.The expression of miRNA-483-3p in different human glioma cells (A) and the expression of miRNA-483-3p in the A172 cells after transfected with miRNA-483-3p inhibitor (B). Mean±SD.n=6.*P<0.05vsHEK-293 cells;#P<0.05vscontrol (Ctrl) group.

圖1 miRNA-483-3p在不同神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中表達和A172細胞轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p inhibitor后miRNA-483-3p的表達

采用CCK-8法，在轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p inhibitor后，分別于24 h、48 h和72 h時檢測細胞活力變化(表2)。結(jié)果顯示沉默miRNA-483-3p后，A172細胞的活力顯著低于空白對照組(P<0.05)。

進一步采用流式細胞術(shù)檢測了A172細胞周期分布，沉默miRNA-483-3p后，G0/G1期的細胞所占百分比增加至85.42%±4.41%(P<0.05)，S期細胞所占百分比減少至9.64%±2.15%(P<0.05)，說明沉默miRNA-483-3p可抑制A172細胞周期由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)化，見圖2A。

表2 miRNA-483-3p對A172細胞活力的影響

Table 2.The effect of miRNA-483-3p on the viability of the A172 cells (%.Mean±SD.n=6)

Group0h24h48h72hCtrl012.42±1.0958.49±4.1296.22±7.32NC011.37±0.9759.21±4.2698.07±8.11483-i06.43±0.2721.08±1.17*42.83±3.34*

*P<0.05vscontrol (Ctrl) group.

3 沉默miRNA-483-3p抑制細胞遷移

采用Transwell法檢測A172中沉默miRNA-483-3p對細胞遷移的影響，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p inhibitor后，細胞的遷移率降低至62.34%±4.21%，表明沉默miRNA-483-3p可明顯抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172的遷移，見圖2B。

Figure 2.The effect ofmiRNA-483-3pdown-regulation on the cell cycle distribution (A) and the migration ability (B) in the A172 cells. Ctrl： control. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNC group.

圖2 沉默miRNA-483-3p對細胞周期及細胞遷移的影響

4 沉默miRNA-483-3p對周期相關(guān)分子蛋白水平及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)進程的影響

如圖3所示，相對于NC組細胞，沉默miRNA-483-3p后周期相關(guān)蛋白cyclin D1、CDK4和p-Rb 的蛋白水平均顯著降低；且沉默miRNA-483-3p后E-cadherin和β-catenin的表達明顯升高，而 N-cadherin和vimentin的表達明顯降低，提示沉默miRNA-483-3p所致的細胞活力及遷移抑制作用可能是與周期相關(guān)因子及EMT進程有關(guān)。

5 miRNA-483-3p靶基因的預(yù)測及驗證

為了尋找miRNA-483-3p調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖及遷移作用的靶基因，我們通過生物信息學(xué)的方法，檢索了網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫TargetScan、miRanda和PicTar，并結(jié)合文獻檢索，分析相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)及功能后得到預(yù)測值較高的靶點Smad4。A172細胞中轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor之后，Smad4的mRNA和蛋白表達水平均明顯升高，見圖4A。這一結(jié)果說明，在A172細胞中，沉默miRNA-483-3p可上調(diào)Smad4的表達。

Figure 3.The effects ofmiRNA-483-3pdown-regulation on the protein levels of related molecules. A: the cell cycle-related molecules; B: the cell EMT process-related proteins. Ctrl： control. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNC group.

圖3 沉默miRNA-483-3p對相關(guān)因子蛋白水平的影響

進一步在A172細胞中進行的螢光素酶報告基因檢測，序列信息如圖4B所示。轉(zhuǎn)入空載體的psiCHECK-2組，同時轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor或miRNA-NC對螢光素酶的活性并沒有顯著的影響；轉(zhuǎn)入野生型Smad4基因表達載體(WT-3’ UTR)之后，再轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor會抑制螢光素酶的活性(P<0.05)；而轉(zhuǎn)入突變型Smad4基因表達載體(MUT-3’ UTR)之后，再轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor對螢光素酶活性的無明顯抑制作用，見圖4C。這一結(jié)果表明miRNA-483-3p可通過直接作用于Smad4基因上3’UTR的識別位點來抑制Smad4的表達，即Smad4是miRNA-483-3p的靶基因。

6 沉默Smad4部分逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p的作用

為了進一步證明miRNA-483-3p是通過上調(diào)Smad4的表達來調(diào)控A172細胞的增殖及遷移，我們在A172細胞中同時轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor 和Smad4 siRNA，檢測其是否可逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p的作用。結(jié)果顯示同時轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor 和Smad4 siRNA后，Smad4的表達明顯低于對照組(圖5A)。CCK-8實驗結(jié)果顯示48 h時細胞活力明顯升高(圖5B)，而細胞遷移率則由對照組的(63.21±4.32)%升高至(83.58±5.14)%(圖5C)。以上結(jié)果表明，沉默Smad4可以部分逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p對細胞活力及遷移能力的抑制作用。

討 論

研究提示，miRNA-483-3p在多種腫瘤中高表達，可發(fā)揮癌基因樣作用。本研究在SHG44、U251、A172等幾株神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系中檢測到miRNA-483-3p的高表達，與既往的研究一致。我們通過轉(zhuǎn)染miRNA-483-3p inhibitor 沉默A172細胞中miRNA-483-3p，分析了其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172生長及遷移的影響。

Figure 4.Smad4 was a direct target of miRNA-483-3p. A: down-regulation ofmiRNA-483-3ppromoted Smad4 expression; B: mi-RNA-483-3p seed sequence and its complementary binding site in Smad4 3’UTR; C: the relative luciference activity in transfected A172 cells. Ctrl： control. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsNC group;#P<0.05vspsiCHECK-2.

圖4 Smad4是miRNA-483-3p的直接作用靶點

CCK-8細胞活力檢測和周期檢測的結(jié)果顯示，沉默miRNA-483-3p可致A172細胞活力降低并出現(xiàn)周期阻滯。表明沉默miRNA-483-3p可抑制A172細胞生長。進一步采用Transwell檢測細胞的遷移情況，發(fā)現(xiàn)沉默miRNA-483-3p可抑制A172細胞遷移，提示在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172中，沉默miRNA-483-3p可通過抑制癌細胞生長及遷移，抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的進展。

關(guān)于miRNA-483-3p影響神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞A172生長和遷移的機制目前并沒有系統(tǒng)的研究。本實驗中我們發(fā)現(xiàn)沉默miRNA-483-3p后，A172細胞中周期相關(guān)因子cyclin D1和CDK4的表達明顯降低，Rb的磷酸化水平也顯著降低。Cyclin可與CDK結(jié)合形成復(fù)合物，促進Rb的磷酸化，并促進細胞通過G1/S調(diào)控點進入S期進行DNA復(fù)制。這是多種miRNA調(diào)控腫瘤細胞增殖的關(guān)鍵機制[10-12]。我們的結(jié)果顯示，沉默miRNA-483-3p可通過調(diào)控周期相關(guān)因子的表達，致明顯的G1/S細胞周期阻滯，進而抑制細胞活力。細胞的EMT進程在腫瘤的侵襲遷移中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[13-14]，我們的結(jié)果顯示，沉默miRNA-483-3p可顯著上調(diào)上皮細胞標志物E-cadherin及β-catenin的表達而下調(diào)間充質(zhì)細胞標志物N-cadherin和vimentin的表達。結(jié)果說明沉默miRNA-483-3p可抑制A172細胞的EMT進程，進而抑制細胞的遷移。

Figure 5.Down-regulation ofSmad4 partially reversed the effect of miRNA-483-3p. A: the expression of Smad4; B: the cell viability； C: the cell migration. Ctrl： control； siRNA:Smad4 siRNA. Mean±SD.n=6.*P<0.05vs483-i+NC group.

圖5 沉默Smad4可部分逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p的作用

miRNA的調(diào)控作用大多是通過影響靶基因的表達來實現(xiàn)的，且一個miRNA可以有多個靶基因，一個基因也可能是多個miRNA的共同靶點。生物信息學(xué)分析顯示Smad4是miRNA-483-3p的靶基因，在A172細胞中同時轉(zhuǎn)入miRNA-483-3p inhibitor 和Smad4 siRNA，可逆轉(zhuǎn)miRNA-483-3p對A172細胞活力和遷移的影響。既往的研究顯示，Smad4是一種重要的抑癌基因，研究顯示過表達Smad4 可通過周期阻滯抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖[15]，且Smad4還可抑制癌細胞遷移[16]，其調(diào)控作用不僅涉及多種復(fù)雜信號，同時也是多種miRNA 作用的靶基因[17-18]。在胰腺癌中的研究顯示miRNA-483-3p可抑制Smad4的表達[19]。本實驗中miRNA-483-3p沉默可靶向Smad4調(diào)控A172的生物學(xué)特性，但是這一作用是否涉及其他信號通路以及兩者之間的具體作用機制還需進一步深入的研究。

綜上所述，miRNA-483-3p在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中高表達；且在A172細胞中，沉默miRNA-483-3p可通過調(diào)控Smad4基因的表達，抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株A172的生長及遷移。

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(責任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Effects of microRNA-483-3p on human glioma cells

ZHAO Ke, LIU Kang-dong

(DepartmentofNeurosurgery,HenanCancerHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450008,China.E-mail:kdliu@zzu.edu.cn)

AIM: To investigate the effects of microRNA (miRNA)-483-3p on the growth and migration of human glioma cell line A172 and its potential mechanisms. METHODS: The abundance of miRNA-483-3p in human embryonic kidney 293 cells and different human glioma cell lines (A172, U251 and SHG44) was measured by RT-qPCR. After down-regulation of miRNA-483-3p by transfection of inhibitor in the A172 cells, the cell viability, cell cycle distribution and cell migration were detected by CCK-8 assay, flow cytometry and Transwell assay, respectively. Furthermore, the protein levels of cell cycle-related molecules and epithelial-mesenchymal transition markers were measured by Western blot. Luciferase reporter assay was used to predict and verify the target gene of miRNA-483-3p. RESULTS: miRNA-483-3p was highly expressed in human glioma cells. Knockdown ofmiRNA-483-3pinhibited A172 cell viability, arrested cell cycle and decreased cell migration rate. Furthermore, the protein levels of cyclin D1, cyclin-dependent kinase 4, phoshorylated retinoblastoma protein, N-cadherin and vimentin were significantly decreased after knockdown ofmiRNA-483-3p, accompanied with the up-regulation of E-cadherin and β-catenin protein expression. Luciferase reporter assay demonstrated thatSmad4 was a potential target gene of miRNA-483-3p. Down-regulation ofSmad4 in the A172 cells transfected with miRNA-483-3p inhibitor partially reversed the effect of miRNA-483-3p on cell viability and migration. CONCLUSION: Knockdown ofmiRNA-483-3prestrains the growth and migration of A172 cells by targetingSmad4.

MicroRNA-483-3p; Glioma; Cell viability； Cell migration; Smad4

1000- 4718(2017)07- 1163- 08

2017- 01- 20

2017- 05- 12

國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81372269)

R739.41； R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.07.002

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△通訊作者 Tel: 0371-65587307； E-mail： kdliu@zzu.edu.cn