劉瑞菁,賀永健,劉 煥,鄭冬冬,范嘉盛,柳春紅,2*(.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東 廣州 50642；2.廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 50642)

DEHP對(duì)大鼠肝組織及肝細(xì)胞色素P450酶系的影響

劉瑞菁1,賀永健1,劉 煥1,鄭冬冬1,范嘉盛1,柳春紅1,2*(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東 廣州 510642；2.廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510642)

為探討鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)染毒對(duì)雄性大鼠肝組織及肝細(xì)胞色素P450(CYP450)酶系的影響,將32只SPF級(jí)SD雄性大鼠隨機(jī)分為4組:(對(duì)照組, DEHP低,中,高劑量組),每組8只,分別以0, 300, 1000, 3000mg/kg DEHP的劑量連續(xù)灌胃染毒28d.觀察肝組織病理學(xué)變化;ELISA法測(cè)定肝臟CYP450、亞型CYP2E1和CYP3A1、以及孕烷X受體(PXR)水平.結(jié)果顯示,HE染色可見(jiàn)低,中,高劑量DEHP暴露組肝臟組織分別出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、充血、空泡和脂肪變性等不同程度的損傷; DEHP中,高劑量組大鼠CYP450酶含量分別為(203.61±34.44),(263.73±63.78)pmol/gprot, CYP2E1酶含量分別為(14.57±3.03),(20.06±2.90)U/gprot,均顯著高于對(duì)照組(141.12±20.24)pmol/gprot, (10.76±2.24)U/gprot(P＜0.01);低,中,高3個(gè)劑量組CYP3A1含量及PXR含量均同樣顯著高于對(duì)照組(P＜0.05或P＜0.01). DEHP暴露對(duì)大鼠肝組織有損傷作用,對(duì)肝臟CYP450、CYP2E1、CYP3A1以及上游調(diào)節(jié)因子PXR具有誘導(dǎo)效應(yīng).

鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯；肝損傷；CYP450；孕烷X受體

鄰苯二甲酸酯(PAEs)是目前環(huán)境中較為豐富且普遍存在的污染物,食品包裝、醫(yī)療設(shè)備(比如血袋和透析設(shè)備)以及化妝品等都含有該物質(zhì),在世界范圍內(nèi),每年要消耗約180億t鄰苯二甲酸酯類[1],隨著時(shí)間的推移,PAEs能從塑料制品中溶出和揮發(fā),進(jìn)而導(dǎo)致人群明顯暴露于 PAEs的污染中[2].鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是我國(guó)工業(yè)生產(chǎn)中使用最廣泛的 PAEs類物質(zhì),是聚氯乙烯(PVC)塑料制品中常用的一種增塑劑[3-4],也是在環(huán)境污染物中含量較高的一種[5],可經(jīng)口、呼吸道以及皮膚等多種途徑進(jìn)入人體內(nèi)[6],美國(guó)毒性物質(zhì)與疾病登記署(ATSDR)估算一般人群每日暴露于 DEHP的最大劑量可達(dá)2mg/d[7].已有的毒性研究表明,DEHP具有肝毒性、免疫毒性、生殖毒性等,其中以生殖毒性最為明顯,并具有引起甲狀腺素代謝改變的類雌激素活性[8-10].

細(xì)胞色素P450(CYP450)是一類主要存在于肝臟中的多功能氧化酶系[11],在生物體內(nèi)既可參與前致癌物、藥物及前毒物等外源化合物的生物轉(zhuǎn)化,又可催化氧化和還原代謝類固醇激素、脂肪酸及膽汁酸等內(nèi)源性物質(zhì)[12].CYP450在毒理學(xué)上的意義是可作為污染物潛在影響的早期預(yù)警信號(hào)系統(tǒng)對(duì)環(huán)境污染物進(jìn)行監(jiān)測(cè)和預(yù)報(bào)[13]. CYP2E1占肝臟CYP450總量的7%,主要參與丙酮、乙醇、氯仿等小分子化合物代謝,有研究表明,長(zhǎng)期酗酒可使肝細(xì)胞中CYP2E1的活性大大提高[14];CYP3A基因在肝臟中高度表達(dá),約占肝臟中CYP450的30%,它們?cè)谠S多原致癌物、內(nèi)源性化合物以及 50%藥物的氧化和過(guò)氧化、還原代謝中充當(dāng)重要的角色[15],CYP3A1又稱類固醇誘導(dǎo)性同工酶,是大鼠肝臟中 CYP3A的主要亞型[16].核受體超家族是介導(dǎo)CYP450酶系的關(guān)鍵調(diào)控因子,孕烷 X受體(PXR)是其中一類由配體調(diào)節(jié)的孤兒核受體,主要在肝臟中表達(dá)[17],可以被利福平、膽汁酸等多種物質(zhì)激活[18],外源性化合物對(duì) CYP450的誘導(dǎo)作用也主要是通過(guò)由配體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 PXR的調(diào)控實(shí)現(xiàn)的.關(guān)于DEHP是否能激活PXR進(jìn)而對(duì)CYP450酶等產(chǎn)生影響,目前并不明確,本研究通過(guò)不同劑量的 DEHP暴露探討其對(duì)大鼠肝組織及細(xì)胞色素P450酶的影響.

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

DEHP純度≥99.5% (美國(guó)Sigma-Aldrich公司);金龍魚玉米油 (市售);考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成生物工程研究所);蘇木素伊紅染色試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所);大鼠 CYP450酶試劑盒、CYP2E1試劑盒、CYP3A1試劑盒、孕烷 X受體(PXR)試劑盒均購(gòu)于上海江萊生物科技有限公司;三羥甲基氨基甲烷(Tris) (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純;Enspire Xenon Light Module多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)PE公司);Thermo Fisher Lynx 4000高速冷凍離心機(jī);冷凍研磨儀 (上海凈信實(shí)業(yè)技術(shù)有限公司);YD-202A輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī) (河北潤(rùn)聯(lián)科技開(kāi)發(fā)有限公司);BX51T-PHD-J11顯微鏡(日本奧林巴斯).

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 SPF級(jí) SD雄性大鼠32只,4～5周,體重90～110g,一批次購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK (粵)2013-0002.單籠飼養(yǎng),適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后按體重采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分組法[19]分為4組:對(duì)照組(C組)和低(L組)、中(M組)、高(H組)劑量組,每組 8只.低、中、高劑量組以 300、1000、3000mg/kg的DEHP玉米油溶液灌胃,灌胃體積1mL,對(duì)照組灌以同體積的玉米油.每天上午9:00灌胃,連續(xù)染毒28d,期間大鼠自由攝食、飲水,動(dòng)物室溫度22～24℃,相對(duì)濕度45%～55%,于末次染毒24h后,斷頸處死并迅速取出肝臟,稱量并計(jì)算臟器系數(shù):

臟器系數(shù)(%)=臟器濕重/體質(zhì)量×100%及時(shí)切取一定體積的肝臟組織塊用 10%福爾馬林固定,用于制備組織切片.

1.2.2 大鼠肝微粒體的制備 取新鮮肝臟,用預(yù)冷的PBS緩沖液(0.01mol/L)沖洗后,用濾紙吸干,剪取1.5g,按質(zhì)量體積比1:4的比例加入TMS緩沖液(Tris 3.025g, MgCl20.3045g,蔗糖34.20g,加蒸餾水至250mL溶解,用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.40,蒸餾水定容至 500mL),用冷凍研磨儀制備成肝勻漿,4℃高速離心機(jī)12000g離心20min,小心吸取上清,并按每毫升上清液加 0.1mL 88mmol/L CaCl2溶液,輕輕攪拌數(shù)次,置冰浴中5min,再將混合液于4℃高速離心機(jī)27000g離心15min,棄去上清液,按每克肝組織所得微粒體沉淀重懸于5mL 0.10mol/L Tris溶液中(pH=7.40),用移液槍輕輕吹打,洗滌,以除去雜蛋白和過(guò)量的 CaCl2,在4℃高速離心機(jī)27000g離心15min所得沉淀即為肝微粒體,CYP450、CYP2E1、CYP3A1酶含量以及PXR含量的檢測(cè)采用ELISA試劑盒,微粒體蛋白濃度采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定.

1.2.3 組織切片制備及HE染色 大鼠斷頸后,迅速分離取出肝臟,取下組織塊(一般厚度不超過(guò)0.5cm),放入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林),固定24h以上,使組織、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固,以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu),將組織脫水透明、浸蠟包埋、切片貼片和脫蠟染色,光鏡下觀察.

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s 表示.多組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較,若方差齊,采用LSD檢驗(yàn);若方差不齊,采用Tamhane’s檢驗(yàn),差異顯著水平為 P＜0.05,極顯著水平為P＜0.01.

2 結(jié)果與分析

2.1 體質(zhì)量變化

DEHP暴露前后大鼠體質(zhì)量及其增量見(jiàn)表1.各組大鼠體質(zhì)量在染毒結(jié)束后均有增長(zhǎng),對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增量較各染毒組高;隨染毒劑量增加,大鼠體質(zhì)量增量減少,DEHP暴露高劑量組大鼠的體質(zhì)量增量極顯著低于對(duì)照組(P＜0.01).

表1 DEHP對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(±s, n=8)Table 1 Effect of DEHP on weight of rats (±s, n=8)

表1 DEHP對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響(±s, n=8)Table 1 Effect of DEHP on weight of rats (±s, n=8)

注:與對(duì)照組比較,a:P＜0.05;aa:P＜0.01(下同).

組別 染毒前(g) 染毒后(g) 增重(g) C組 145.91±8.92 369.13±36.61 223.21±39.77 L組 144.05±9.63 346.94±33.08 202.89±26.52 M組 144.65±7.97 344.65±54.05 200±52.56 H組 142.79±9.98 221.68±67.97aa 78.89±65.19aa

2.2 DEHP對(duì)大鼠肝臟重量及臟器系數(shù)影響

各組大鼠肝臟重量及臟器系數(shù)見(jiàn)表 2.與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠的肝臟質(zhì)量、肝臟系數(shù)均明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05, P＜0.01),且呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系.

表2 DEHP對(duì)大鼠肝臟重量及臟器系數(shù)的影響(±s, n=8)Table 2 Effect of DEHP on weight and coefficient of liver(±s, n=8)

表2 DEHP對(duì)大鼠肝臟重量及臟器系數(shù)的影響(±s, n=8)Table 2 Effect of DEHP on weight and coefficient of liver(±s, n=8)

組別 肝重量(g) 臟器系數(shù)(%) C組 12.54±1.37 3.40±0.21 L組 14.96±1.74a 4.32±0.32aaM組 16.74±1.27aa 4.83±0.21aaH組 16.80±2.71aa 7.49±0.96aa

2.3 DEHP對(duì)大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響

在光鏡下觀察各組大鼠肝臟組織切片結(jié)果見(jiàn)圖 1.對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)正常,未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及水腫變性;L組,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);M 組,肝細(xì)胞部分變性并伴有輕度水腫,嗜酸性變伴肝索散在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增多,有充血現(xiàn)象;H組,組織嚴(yán)重?fù)p傷,細(xì)胞形態(tài)嚴(yán)重改變,肝細(xì)胞明顯廣泛濁腫,在淤血周圍個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)空泡,產(chǎn)生脂肪變性.

圖1 大鼠肝組織病理切片F(xiàn)ig.1Histology of livers from DEHP-treated rats

2.4 DEHP對(duì)大鼠肝微粒體CYP450酶及亞型含量的影響

各組大鼠肝微粒體 CYP450、CYP2E1及CYP3A1的含量見(jiàn)圖2-4.隨著染毒劑量增大,3個(gè)劑量組的CYP450、CYP2E1、CYP3A1含量均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì);與對(duì)照組比較,中、高劑量染毒組的CYP450、CYP2E1含量升高都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),3個(gè)劑量組的CYP3A1含量的升高亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01).

圖2 大鼠肝微粒體中CYP450含量(n=8)Fig.2 CYP450 in rat liver induced by DEHP (n=8)

圖3 大鼠肝微粒體CYP2E1含量(n=8)Fig.3 CYP2E1 in rat liver induced by DEHP (n=8)

圖4 大鼠肝微粒體CYP3A1含量(n=8)Fig.4 CYP3A1 in rat liver induced by DEHP (n=8)

2.5 DEHP暴露后對(duì)大鼠肝臟PXR含量的影響

各組大鼠肝臟中PXR的含量見(jiàn)圖5.隨著染毒劑量的增大,PXR含量也呈升高趨勢(shì);與對(duì)照組比較,低劑量組PXR含量的上升具有顯著性意義(P＜0.05),而中、高劑量組的升高則具有極顯著性意義(P＜0.01).

圖5 大鼠肝臟中PXR含量(n=8)Fig.5 PXR in rat liver induced by DEHP (n=8)

3 討論

肝臟是毒物代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要器官,也是CYP450酶高表達(dá)的場(chǎng)所,體內(nèi)參與藥物及外源化學(xué)物代謝的主要為肝 CYP450酶系,許多藥物及環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)CYP450酶系具有誘導(dǎo)或抑制作用,已有的研究表明,利福平與異煙肼對(duì)大鼠肝組織CYP2E1具有誘導(dǎo)作用[20];煙草煙氣中的多環(huán)芳烴類物質(zhì)(PAHs)對(duì)人肺癌細(xì)胞中的CYP1A1也同樣具有誘導(dǎo)表達(dá)作用[21];丹參酮ⅡA能顯著誘導(dǎo)CYP1A2及CYP2E1的活性以及基因蛋白的表達(dá),且呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系;安妥明與16α-碳腈孕烷醇酮(PCN)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)可增強(qiáng)PXR和CYP3A1的表達(dá),且誘導(dǎo)作用隨安妥明濃度的增加而增加[22].DEHP是目前工業(yè)生產(chǎn)中大量使用的 PAEs類物質(zhì),研究表明,DEHP可通過(guò)干擾林蛙精巢中CYP17和CYP19等基因的表達(dá),進(jìn)一步影響其相應(yīng)關(guān)鍵酶的表達(dá),從而干擾類固醇激素的合成,導(dǎo)致雌激素效應(yīng)的產(chǎn)生[23];田雨等[24]研究表明,DEHP對(duì)大鼠肝臟CYP2E1和CYP3A均具有誘導(dǎo)作用.本研究結(jié)果顯示,DEHP暴露會(huì)導(dǎo)致大鼠肝臟明顯腫大,臟器系數(shù)明顯增加,通過(guò)光鏡下觀察 HE染色肝臟組織切片發(fā)現(xiàn):肝臟中出現(xiàn)腫脹以及空泡和脂肪變性等,說(shuō)明 DEHP暴露對(duì)大鼠肝臟具有損傷作用,隨著暴露劑量的增加,肝細(xì)胞損傷程度加重,與Kim等[25]對(duì)SD大鼠進(jìn)行的 DEHP經(jīng)口染毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為相符;通過(guò)對(duì)肝微粒體CYP450、亞型CYP2E1、CYP3A1以及上游調(diào)節(jié)因子 PXR的測(cè)定結(jié)果分析發(fā)現(xiàn), DEHP對(duì)CYP450及其兩種亞型均具有明顯的誘導(dǎo)作用,對(duì)PXR的作用亦是如此.

PXR是一種重要的核受體,調(diào)控的藥物代謝酶包括細(xì)胞色素酶如:CYP3A4、CYP7A1、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C18和CYP2C19等,II相代謝酶如:UDP-葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶等[26].由于 PXR 能夠調(diào)控多種CYP450的轉(zhuǎn)錄,因而它必須能夠被大量外源物所激活,已有文獻(xiàn)報(bào)道,許多外源化學(xué)物如:處方藥、中草藥、農(nóng)藥以及環(huán)境污染物等均可激活PXR[27],黃芩素在 LS174T細(xì)胞系中可以通過(guò)誘導(dǎo)PXR介導(dǎo)CYP3A4的轉(zhuǎn)錄表達(dá),并且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系等[28].本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),DEHP染毒對(duì)大鼠肝臟CYP450及其亞型CYP2E1、CYP3A1均具有明顯的誘導(dǎo)作用,PXR水平也顯著升高,這可以視為大鼠機(jī)體早期自身對(duì)抗外源性化學(xué)污染物的一種應(yīng)激代償機(jī)制,推測(cè)其作用機(jī)制是:DEHP進(jìn)入到體內(nèi)后,通過(guò)激活 PXR進(jìn)而對(duì)CYP450酶及其亞型產(chǎn)生影響,當(dāng)DEHP進(jìn)入肝細(xì)胞后,與細(xì)胞核內(nèi) PXR的配體結(jié)合區(qū)域結(jié)合,結(jié)合有配體的 PXR與另外一重要核受體RXR(維甲酸X受體)組成異二聚體,并與CYP3A基因反應(yīng)元件結(jié)合,從而促進(jìn) CYP3A基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá);當(dāng)與細(xì)胞內(nèi)的載體蛋白結(jié)合時(shí),可進(jìn)一步誘導(dǎo)CYP2E1mRNA的轉(zhuǎn)錄,表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng),其含量和也增加, 進(jìn)而促進(jìn)毒物的代謝,也說(shuō)明了DEHP對(duì)PXR受體及CYP450等的誘導(dǎo)作用,是機(jī)體自身為了加快其在體內(nèi)的代謝速度的早期應(yīng)激反應(yīng).

肝臟微粒體中CYP450及其亞型CYP2E1、CYP3A1 以及PXR 含量可作為污染生物標(biāo)志物來(lái)評(píng)價(jià)DEHP 的早期污染毒理效應(yīng). 肝細(xì)胞色素P450 酶系的誘導(dǎo)也已被提出作為評(píng)價(jià)環(huán)境污染狀況的最靈敏的生物學(xué)反應(yīng)之一.由于PXR的配體種類繁多,因此研究DEHP對(duì)PXR的調(diào)節(jié)作用將有助于我們更好地探討環(huán)境污染物的作用機(jī)制,為以后環(huán)境監(jiān)測(cè)等工作奠定基礎(chǔ).本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大鼠染毒模型證明了環(huán)境污染物DEHP 早期的短期重復(fù)暴露可通過(guò)激活PXR 對(duì)CYP450 總酶及亞型CYP2E1、CYP3A1 含量產(chǎn)生影響,但DEHP 的長(zhǎng)期慢性接觸以及是否能通過(guò)PXR 通路對(duì)CYP450 酶的其他亞型產(chǎn)生誘導(dǎo)還是抑制效應(yīng)還有待進(jìn)一步的研究.

4 結(jié)論

4.1 DEHP短期重復(fù)染毒會(huì)導(dǎo)致大鼠肝組織出現(xiàn)不同程度的損傷,隨著劑量的增加,肝組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)從少到多,肝細(xì)胞從部分變性、輕度水腫到廣泛濁腫,并出現(xiàn)充血、空泡、脂肪變性等病理變化.

4.2 DEHP短期重復(fù)染毒使肝微粒體CYP450、CYP2E1及CYP3A1酶含量以及肝臟PXR含量同時(shí)上升,提示DEHP暴露可能通過(guò)激活上游調(diào)節(jié)因子PXR對(duì)CYP450總酶及亞型CYP2E1、CYP3A1水平產(chǎn)生影響.D E H P暴露所致肝臟毒性及今后如何盡可能降低這一暴露危害值得進(jìn)一步研究探討.

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Effects of DEHP on hepatic tissue and cytochrome P450 enzymes in liver of rats.

L
IU Rui-jing1, HE Yong-jian1, LIU Huan1, ZHENG Dong-dong1, FAN Jia-sheng1, LIU Chun-hong1,2?(1.Food College, South China Agricultural University, Guangzhou 510624, China；2.Guangdong Provincial Key Laboratory of Food Quality and Safety, Guangzhou 510642, China). China Environmental Science, 2017,37(7)：2749～2754

To study the effects of di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) on hepatic tissue and cytochrome enzyme 450 in rat liver. A total of 32 male SD rats were randomly divided into 4groups (n=8per group): control group, low-dose group, medium-dose group, and high-dose group. DEHP was intragastrically administrated at the dosage of 0, 300, 1000 and 3000mg/kg (body weight) for 28days. The pathological changes of hepatic tissues were observed by HE staining. ELISA method was used to determine the content of CYP450, CYP2E1, CYP3A1 and PXR. Inflammatory cellular infiltration, hyperemia, vacuoles and fatty degeneration were observed in the low, middle, and high dosage groups respectively. The contents of CYP450 and CYP2E1 in the middle dosage group [(203.61±34.44)pmol/gprot, (14.57±3.03)U/gprot] and in the high dosage group [(263.73±63.78)pmol/gprot, (20.06±2.90)U/gprot] were significantly higher than that of the control group [(141.12±20.24)pmol/gprot, (10.76±2.24)U/gprot] (P＜0.01). CYP3A1 and PXR in all dosage groups increased significantly compared with the control group (P＜0.05, P＜0.01). DEHP exposure induced the levels of CYP450, CYP2E1, CYP3A1 and PXR in rat liver.

di-(2-ethylhexyl) phthalate；hepatic injury；cytochrome enzyme 450；PXR

X18,R994.6,R285.5

A

1000-6923(2017)07-2749-06

劉瑞菁( 1992 -) ,女,河南開(kāi)封人,華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院碩士研究生,主要從事食品質(zhì)量與安全研究.

2016-11-24

農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管項(xiàng)目(GJFP201601101);廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B020204001);廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2016LM2152)

* 責(zé)任作者, 教授, liuch@scau.edu.cn