梁海燕??陳曉紅

[摘要] 目的 評(píng)價(jià)高危HPVE6/E7mRNA在宮頸病變中的臨床價(jià)值。 方法 將70例低度宮頸病變（慢性宮頸炎），子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINI級(jí)）和78例高級(jí)別宮頸病變（包括CINⅡ級(jí)CINⅢ級(jí)和宮頸浸潤(rùn)性癌）分為兩組。低度宮頸病變?yōu)閷?duì)照組，高級(jí)別宮頸癌組為實(shí)驗(yàn)組。 分別進(jìn)行HPV DNA分型和HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)。結(jié)果 低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽(yáng)性率分別為14.2%和79.5%。HPV DNA分型檢測(cè)結(jié)果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽(yáng)性率分別為35.7%和85.7%。高風(fēng)險(xiǎn)HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，陰性預(yù)測(cè)值（85.8%，86.1%，83.5%）顯著高于（64.3%，70.5%，71.4%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)有效降低了臨床診斷中的過(guò)度檢查和過(guò)度治療的機(jī)會(huì)，避免了患者因高頻重復(fù)感染引起的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。

[關(guān)鍵詞] 人乳頭瘤狀病毒HPV；HPV DNA檢測(cè)；HPV E6/E7檢測(cè)；宮頸癌；方法對(duì)比

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）12-19-04

Comparative study of diagnostic value of HPV DNA and E6 / E7 mRNA detection in cervical lesions

LIANG Haiyan CHEN Xiaohong

Reproductive Medicine Center， the First Affiliated Hospital of Shantou University Medical College， Shantou 515031， China

[Abstract] Objective To evaluate the clinical value of high risk HPVE6/E7 mRNA in cervical lesions. Methods 70 patients with lower-grade cervical lesions （chronic cervicitis， cervical intraepithelial neoplasis， CINI-grade） and 78 patients with high-grade cervical lesions （including CINII grade， CINⅢ grade and cervical invasive carcinoma） were divided into two groups. Lower-grade cervical lesions were set as the control group while high-grade cervical lesions were set as the experimental group. They were respectively given HPV DNA typing and HPVE6/E7 mRNA detection. Results Detection of high risk HPVE6/E7 mRNA. Positive rates of lower-grade cervical lesions and high-grade cervical lesions were respectively 14.2% and 79.5%. Detection results of HPV DNA typing. Positive rates of lower-grade cervical lesions and high-grade cervical lesions were respectively 35.7% and 85.7%. Specificity， positive predictive value and negative predictive value of high risk HPVE6/E7 mRNA detection were respectively 85.8%， 86.1% and 83.5%， significantly higher than those 64.3%， 70.5% and 71.4%. Difference was statistically significant. Conclusion High-risk HPVE6/E7 mRNA detection can effectively reduce the chance of over-examination and over-treatment in clinical diagnosis and avoid the economic burden and mental stress caused by high-frequency repeated infection.

[Key words] Human papilloma virus HPV； HPV DNA detection； HPV E6/E7 detection； Cervical cancer； Method comparison

子宮頸癌是在宮頸陰道或移行帶、子宮頸內(nèi)膜的上皮交界處發(fā)生的惡性腫瘤[1]。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)顯示，乳腺癌和子宮頸癌是兩種主要疾病對(duì)女性健康的威脅，宮頸癌的發(fā)病率已躍居中國(guó)女性惡性腫瘤的第一位，發(fā)病趨勢(shì)向年輕化發(fā)展，發(fā)病率逐年攀升[2]。對(duì)宮頸癌的病因研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（HPV）是影響宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的主要因素[3]。近年來(lái)，越來(lái)越多的HPV DNA檢測(cè)方法已被用于檢測(cè)宮頸病變，應(yīng)用HPV DNA檢測(cè)方法可以有效降低宮頸癌的發(fā)病率，但HPV DNA檢測(cè)是檢測(cè)原癌基因轉(zhuǎn)錄的其中一種手段，但其HPV活性是不可預(yù)測(cè)的[4]。另有研究指出，高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)手段可對(duì)病毒的活動(dòng)程度和預(yù)測(cè)疾病的程度進(jìn)行檢測(cè)，更有利于宮頸癌病情的判斷[5]。為了探索其檢測(cè)效果，本研究擬對(duì)高危HPV E6/E7 mRNA的臨床價(jià)值進(jìn)行研究，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1～12月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治患者148例。收集病例的納入標(biāo)準(zhǔn)為：成年有性生活史女性，有宮頸疾變癥狀（主要是接觸性出血，陰道分泌物異常，下腹痛，陰道異常流血等），排除其他系統(tǒng)腫瘤病理。對(duì)148例患者進(jìn)行宮頸細(xì)胞（TCT）HPV DNA分型和高危HPV mRNA檢測(cè)，對(duì)于陽(yáng)性患者進(jìn)行陰道鏡宮頸活檢，并送到病理部病做理組織學(xué)檢查，以病理診斷報(bào)告為金標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)病理診斷結(jié)果分為兩組，低度宮頸病變（慢性宮頸炎，CIN I級(jí)患者）共有70例作為對(duì)照組，對(duì)照組年齡在30 ～ 62歲之間平均年齡為（32.8±1.7）歲。高度子宮頸病變（包括CINⅡ級(jí)，CINⅢ級(jí)和宮頸侵襲性癌為實(shí)驗(yàn)組，年齡在30～65歲之間，平均年齡為（30.5±2.1）歲。兩組患者年齡，病程和病史無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

TCT檢測(cè)采用液基細(xì)胞學(xué)專用刷完全插入宮頸，順時(shí)針?biāo)m頸3～5周，收集子宮頸和子宮頸管脫落上皮細(xì)胞，把收集到細(xì)胞保存在含有細(xì)胞保存液瓶的中，涂片，固定，染色，然后由專業(yè)病理醫(yī)師讀片。使用國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)推薦2001 TBS（The Bethesda System）分級(jí)系統(tǒng)進(jìn)行CIN分級(jí)診斷。 HPV DNA分型使用凱普 HPV專用宮頸刷，靠近子宮頸輕微順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周，放入含有專用細(xì)胞儲(chǔ)存溶液管中。使用凱普醫(yī)學(xué)核酸分子雜交儀和它們的支持試劑，包括14個(gè)高危HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66，68），5種低危HPV（6，11，42，43，44）和2種國(guó)內(nèi)常見(jiàn)HPV亞型（53，CP8304），檢測(cè)程序包括樣品HPV DNA提取，PCR擴(kuò)增，核酸分子快速轉(zhuǎn)移雜交和解釋結(jié)果， TCT檢測(cè)殘留標(biāo)本用于高危HPV E6/E7 mRNA的檢測(cè)，試劑盒和儀器均購(gòu)自上海生工，特異性檢測(cè)14種高危HPV（16，18，31 ，33，35，39，45，51，52，56，58，59，66和68），主要步驟包括細(xì)胞裂解，雜交捕獲mRNA，信號(hào)放大，底物發(fā)光反應(yīng)，用冷光儀檢測(cè)的光子數(shù)量，Diacarta計(jì)算機(jī)軟件自動(dòng)計(jì)算轉(zhuǎn)換結(jié)果獲得最終拷貝數(shù)，拷貝數(shù)>0判斷為陽(yáng)性。通過(guò)陰道鏡取宮頸組織活檢，制成石蠟切片，由專業(yè)病理醫(yī)師閱片。組織病理學(xué)診斷分為：慢性宮頸炎，CIN Ⅰ級(jí)，CINⅡ級(jí)，CINⅢ級(jí)，宮頸浸潤(rùn)性癌。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件分析上述數(shù)據(jù)，計(jì)量資料為（）的形式。數(shù)據(jù)通過(guò)t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用率或百分比描述兩組之間的差異。 兩種方法的靈敏度，特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值，用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法的檢出率對(duì)比結(jié)果

高危HPVE6/E7mRNA檢測(cè)結(jié)果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽(yáng)性病例分別為10例和62例，陽(yáng)性率分別為14.2%和79.5%。HPV DNA分型檢測(cè)結(jié)果，低度子宮頸病變和高度子宮頸病變的陽(yáng)性病例分別為25例和60例，陽(yáng)性率分別為35.7%和85.7%。所有研究病例中HPVE6/E7mRNA檢測(cè)的陽(yáng)性病例為72例，陽(yáng)性率為48.6%。 HPV DNA分型檢測(cè)的陽(yáng)性病例為85例，陽(yáng)性率為57.4%。低度宮頸病變組中，高危HPV DNA的檢出率（35.7%）顯著高于高危HPV E6/E7 mRNA檢出率（14.2%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），高級(jí)宮頸病變中，高危HPV E6/E7 mRNA的檢出率（79.5%）顯著低于高危HPV DNA檢出率（85.7%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高危HPV DNA分型檢出率（57.4%）高于高危HPV E6/E7 mRNA檢處率（48.6%），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩種檢測(cè)方法的病理診斷結(jié)果比較

高危HPV DNA分型檢測(cè)敏感度（85.7%）高于高危型HPV E6/E7 mRNA（79.5%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測(cè)的特異性（64.3%）低于HPV E6/E7 mRNA（85.8%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測(cè)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（70.5%）低于HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（86.1%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高危HPV DNA分型檢測(cè)陰性預(yù)測(cè)值（71.4%）低于HPV E6/E7 mRNA（83.5%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。通過(guò)比較可知，除靈敏度較低之外，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均高于HPV DNA分型檢測(cè)的特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。說(shuō)明高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)可以更好地診斷宮頸疾病，特別是對(duì)于高度病變的宮頸疾病，診斷價(jià)值較高。具體見(jiàn)表2 ～ 3。

3 討論

子宮頸癌是婦科的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，人群的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中名列前茅，發(fā)病率居第二位[6]。近年來(lái)，發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，根據(jù)相關(guān)的研究結(jié)果顯示，2011年宮頸癌死亡人數(shù)是2000年的1.3倍，且具有發(fā)病率輕化的趨勢(shì)，由區(qū)域經(jīng)濟(jì)、種族和其他因素，宮頸癌發(fā)病率和死亡率在全國(guó)各地區(qū)之間有顯著差異[7]。 HPV是存在于宮頸細(xì)胞中的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒，其含有約7900個(gè)堿基對(duì)，并屬于嗜上皮病毒[8]。臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，基于基因組核酸病毒的不同，HPV病毒可以分類為不同的基因型[9]。到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過(guò)150種HPV亞型，其中40種與生殖器上皮感染相關(guān)[10]。 E6 / E7基因在HPV早期編碼區(qū)出現(xiàn)是宮伴隨著頸癌惡化發(fā)生的。一旦病毒細(xì)胞中的E6 / E7基因高度表達(dá)，高水平的E6 / E7提示子宮頸癌變細(xì)胞高度惡化[11]。E6/E7 mRNA作為E6和E7基因產(chǎn)物與癌基因活性相關(guān)，HPV感染水平可用檢測(cè)病毒中的高危E6 / E7 mRNA水平進(jìn)行判斷[12]。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)低度宮頸病變組中，高危HPV DNA分型的檢出率（35.7%）顯著高于高危HPV E6/E7 mRNA（14.2%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（χ2=5.59，P=0.018）。高級(jí)別宮頸病變組中，高風(fēng)險(xiǎn)HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)率（79.5%）明顯低于高危HPV DNA分型（85.7%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 6.12，P=0.031）。高危HPV DNA檢出率（57.4%）高于高危HPV E6/E7 mRNA（48.6%），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.13，P=0.975）。這項(xiàng)研究的結(jié)果與以前的研究一致，也就是說(shuō)，隨著宮頸病變級(jí)別的加重，高危HPVE6/E7mRNA檢出率也有所上升，主要原因是早期HPV感染，細(xì)胞內(nèi)病毒致癌基因表達(dá)量低，隨著病情進(jìn)展，細(xì)胞內(nèi)E6 / E7 mRNA大量轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致E6、E7癌基因的高水平表達(dá)[13]。近年來(lái)，研究表明E6 / E7 mRNA拷貝數(shù)在宮頸癌診斷和治療方面有一定價(jià)值。也證實(shí)隨著宮頸病變的進(jìn)展，細(xì)胞內(nèi)E6 / E7 mRNA表現(xiàn)出高水平的表達(dá)，E6 / E7 mRNA拷貝數(shù)增加，E6，E7癌蛋白基因表達(dá)量增加[14]。

同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，陰性預(yù)測(cè)值高于高危HPV DNA分型檢測(cè)，高風(fēng)險(xiǎn)HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)能更好地診斷子宮頸疾病，特別是對(duì)于高度病變的宮頸疾病，診斷價(jià)值更高，與以往研究結(jié)果一致[15-16]，我們可以認(rèn)為高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在臨床診斷中具有高價(jià)值，與高危HPV DNA分型檢測(cè)相比，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。在實(shí)際工作中可以考慮使用聯(lián)合檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，如高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)與細(xì)胞學(xué)結(jié)合診斷疾病，既可提高宮頸疾病診斷的水平，也可減少漏診率。

綜上所述，高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)作為常用的診斷手段在臨床診斷宮頸癌癥時(shí)可與轉(zhuǎn)錄活性的診斷結(jié)合，大大降低了過(guò)度檢查和過(guò)度治療的機(jī)會(huì)，避免了短期高頻率檢查和反復(fù)感染對(duì)患者造成的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。因此，高危HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在臨床上具有非常重要應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿日期：2017-03-15）