易頌佳，黃猛，劉妙，向淑云，羅娜，謝明

(湘南學(xué)院，1、2013級預(yù)防醫(yī)學(xué)1班；2、病理研究所，湖南郴州423000)

·質(zhì)量控制·

三種固定液使用情況的比較

易頌佳1，黃猛1，劉妙1，向淑云1，羅娜1，謝明2

(湘南學(xué)院，1、2013級預(yù)防醫(yī)學(xué)1班；2、病理研究所，湖南郴州423000)

目的將環(huán)保型標(biāo)本保存液、無醛GS固定液和10%的甲醛液，保存新鮮病理組織、比較三種液體對病理標(biāo)本防腐固定作用有何不同，探索無醛GS固定液取代10%甲醛液的可能性。方法分別用環(huán)保型標(biāo)本保存液、無醛GS固定液和10%甲醛液固定同類活檢標(biāo)本48h，進(jìn)行常規(guī)石蠟切片染色，觀察三種不同固定方法對組織常規(guī)石蠟切片效果影響。另外將新鮮組織標(biāo)本放入以上三種固定液中固定1年，觀察病理標(biāo)本在三種固定液中的差別。結(jié)果10%甲醛液與無醛GS固定液對新鮮標(biāo)本固定效果相同，常規(guī)石蠟切片組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)同樣清晰；用10%甲醛液和無醛GS固定液固定2個月后的標(biāo)本放入保環(huán)保型標(biāo)本保存液保存效果良好，未經(jīng)處理的新鮮組織單用放入環(huán)保型標(biāo)本保存液做固定效果差，標(biāo)本組織腐爛發(fā)霉、液體渾濁及標(biāo)本上浮水平面等現(xiàn)象。結(jié)論無醛GS固定液對病理標(biāo)本的固定、組織制片的效果與10%甲醛液有同樣效果，無醛GS固定液完全可替代致癌劑甲醛液在標(biāo)本固定、組織切片制作中的運(yùn)用；環(huán)保型標(biāo)本保存液用于經(jīng)過無醛GS固定液固定2個月以上的病理標(biāo)本保存效果好。

環(huán)保型標(biāo)本保存液；無醛GS固定液；10%甲醛液；標(biāo)本固定

甲醛是一種結(jié)構(gòu)簡單、用途廣泛、易溶于水、揮發(fā)性很強(qiáng)的醛類物質(zhì)，且其揮發(fā)性隨著環(huán)境溫度的升高而加快。甲醛在目前我國有毒化學(xué)品控制名單中位列第二，已經(jīng)被確定為是致癌和致畸物。甲醛的毒性作用分為一般毒性和特殊毒性兩種，對免疫、神經(jīng)、內(nèi)分泌等系統(tǒng)的影響屬于一般毒性，特殊毒性主要指遺傳、致癌和生殖毒性[1]，甲醛侵入人體的途徑主要包括呼吸道吸入、皮膚黏膜接觸及經(jīng)消化道食入等三種途徑。甲醛的化學(xué)性質(zhì)很活潑，在常溫下?lián)]發(fā)性強(qiáng)，且在此種狀態(tài)下甲醛聚合物能釋放出微量氣態(tài)甲醛，因此呼吸道吸入是職業(yè)接觸甲醛者的主要暴露途徑[2，3]。對于病理實(shí)驗(yàn)室人員，特別是工作在一線的醫(yī)生及技術(shù)人員長期暴露于甲醛嚴(yán)重超標(biāo)的環(huán)境中，對身體健康造成嚴(yán)重的危害[4，5]。為了降低甲醛對人類的危害，找到與它具有相同固定作用效果的固定液且毒性相對較低、危害較小的新型環(huán)保液來替代傳統(tǒng)的甲醛液是迫在眉睫的事[6，7]。

1 材料與方法

1.1 材料手術(shù)離體甲狀腺組織9例、購買新鮮雞肝標(biāo)本27例、標(biāo)本缸、注射器等。

1.2 試劑無醛GS固定液，由哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)，生物組織標(biāo)本制備液專利號：201110023746.0；甲醛試劑由張家港華億科教設(shè)備有限公司生產(chǎn)。環(huán)保型標(biāo)本保存液，張家港華億科教設(shè)備有限公司生產(chǎn)，CJM-Y001溫州醫(yī)學(xué)院防霉研究所研制，專利號：ZL200710005074。

1.3 方法收集醫(yī)院病理科手術(shù)離體甲狀腺組織9例，待快速冰凍切片診斷結(jié)果出來后，余下新鮮組織分成三組，分別放入10%甲醛液、環(huán)保型標(biāo)本保存液、無醛GS固定液固定，每組3例24h后，取材脫水進(jìn)行H-E制片，觀察三種液體固定標(biāo)本后，進(jìn)行H-E染色的效果有何不同。另取新鮮雞肝標(biāo)本27例，首先將其中9例分成三組，分別直接放入10%甲醛液3例、環(huán)保型標(biāo)本保存液3例、無醛GS固定液3例；另外9例雞肝標(biāo)本放入10%甲醛液中處理兩個月后，再分別放入10%甲醛液3例、環(huán)保型標(biāo)本保存液3例、無醛GS固定液3例；剩下9例雞肝標(biāo)本放入無醛GS固定液中處理兩個月后，再分別放入10%甲醛液3例、環(huán)保型標(biāo)本保存液3例、無醛GS固定液3例。每個標(biāo)本陳列缸的液平面高于標(biāo)本4cm，時間一年，過程中不加液體。

2 結(jié)果

2.1 H-E染色環(huán)保型標(biāo)本保存液處理組織后染色效果差一些，其染色細(xì)胞膜分界不太清楚，胞漿和胞核著色欠鮮艷、組織顯得松散。使用無醛GS固定液制備的組織蠟塊，在切片中感覺組織軟硬適中，沒有過硬現(xiàn)象，常規(guī)H-E染色速度快，組織結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞形態(tài)完整，核漿比清晰，無醛GS固定液在保持組織形態(tài)學(xué)與10%甲醛液相比無明顯差異，色比度適宜。見圖1～3。

圖1 H-E10×40(甲狀腺瘤，環(huán)保型標(biāo)本保存液制作)

圖2 H-E10×40(甲狀腺瘤，10%甲醛液制作)

圖3 H-E10×40 (甲狀腺瘤，無醛GS固定液制作)

2．2環(huán)保型標(biāo)本保存液、無醛GS固定液與10%甲醛液固定大體標(biāo)本對比1年后開蓋檢查，三種液體的量及色質(zhì)情況：標(biāo)本陳列缸內(nèi)液體量均下降，10%甲醛液、環(huán)保型標(biāo)本保存液及無醛GS固定液液面分別下降了1.0cm、2.0cm及1.0cm。新鮮雞肝標(biāo)本的環(huán)保型標(biāo)本保存液組，液體渾濁并開始變黃，標(biāo)本柔軟度較明顯；無醛GS固定液組液體清晰透亮；而10%甲醛液組色質(zhì)純清無變化，標(biāo)本的手感、色質(zhì)、固定效果見表1。經(jīng)過10%甲醛液固定2個月的標(biāo)本，分別放入盛有三種試劑的標(biāo)本陳列缸，1年后開蓋檢查，環(huán)保型標(biāo)本保存液組液體淡褐色透明，標(biāo)本自然正常，未見霉變，質(zhì)地中等；無醛GS固定液組液體淡黃清晰透亮；10%甲醛液組液色質(zhì)純清無變化，標(biāo)本的質(zhì)地、手感、色質(zhì)、固定效果見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示標(biāo)本經(jīng)過10%甲醛液固定處理2個月后，環(huán)保型標(biāo)本保存液、無醛GS固定液與10%甲醛對標(biāo)本保存效果無明顯的差異。

表1 一年后各組新鮮組織標(biāo)本的保存效果情況

表2 一年后各組10%甲醛液固定2月的組織標(biāo)本的保存效果情況

3 討論

2004年WHO宣布甲醛為致癌物質(zhì)，同時提醒人們要重視甲醛的致癌性，并采取預(yù)防措施。有關(guān)研究表明甲醛具有以下缺點(diǎn)：⑴具有較強(qiáng)烈的刺激性和腐蝕性[8]，對環(huán)境造成嚴(yán)重污染，而防護(hù)又極為困難；⑵甲醛存放過久易產(chǎn)生白色沉淀(即三聚甲醛)，而影響組織標(biāo)本固定效果；⑶甲醛容易氧化變成甲酸，使溶液變?yōu)樗嵝?，?dǎo)致標(biāo)本酸化，嚴(yán)重時影響細(xì)胞核的染色效果；⑷組織長時間固定影響染色效果[9]；⑸廢液需特殊處理，不能直接排入下水管道，且處理費(fèi)用較高。而目前在我國絕大部分病理科仍然應(yīng)用甲醛作為日常工作中的固定液[10-13]。因甲醛存在上述諸多缺點(diǎn)，并且隨著人們對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安全的更高要求，近年來許多學(xué)者都在尋找能夠取代甲醛的新型固定劑[14]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無醛固定液能夠良好地保存組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，對組織無明顯收縮和膨脹作用，甲醛固定的組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚完好[15]，組織切片HE染色效果良好，制成的切片完全符合病理診斷的需求，無醛GS固定液可以替代傳統(tǒng)甲醛作為病理科的常規(guī)組織固定液使用。另外我們實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，把標(biāo)本放入環(huán)保型標(biāo)本保存液之前，先要用10%甲醛固定好標(biāo)本，這樣，環(huán)保型標(biāo)本保存液也完全可以替換10%甲醛保存標(biāo)本，用于醫(yī)學(xué)院校病理學(xué)大體標(biāo)本的制作上。環(huán)保型標(biāo)本保存液具有安全無毒優(yōu)點(diǎn)，從根本上解決了甲醛對人體的危害及對環(huán)境污染等問題，也能夠滿足教學(xué)和科研的需要。環(huán)保型標(biāo)本保存液和無醛格林固定液替代甲醛液，從根源上減少了致癌劑甲醛廢棄液體向下水道排放量(一所醫(yī)學(xué)院校和一所二甲醫(yī)院甲醛液用量約130000ml/年)，環(huán)保標(biāo)本保存液取代甲醛液還可以推廣到組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)室和解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，減少甲醛教學(xué)人員的傷害。如果在全市、全省和全國推廣使用環(huán)保液取代甲醛液的使用，對保護(hù)大家賴以生存的環(huán)境，有著長遠(yuǎn)的社會效益。

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湖南省科學(xué)技術(shù)廳科技社會發(fā)展支撐計劃(2014SK4070）、郴州市科技計劃項(xiàng)目（郴財教指【2014】44號）、湘南學(xué)院重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科免疫學(xué)研究方向(2012年12號)、湖南省協(xié)同創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)中心藥理學(xué)方向（2014年35號)

謝明，女，湘南學(xué)院病理研究所學(xué)士，教授，副主任醫(yī)師。E-mail：1521184669@qq.com