劉曉峰， 陳 娟， 歐啟水△

1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院基因診斷研究室，福州 350005 2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，武漢 430030

褪黑素減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬組織的tau蛋白過度磷酸化*

劉曉峰1， 陳 娟2， 歐啟水1△

1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院基因診斷研究室，福州 3500052華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，武漢 430030

目的 探討褪黑素(Melatonin，MT)對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬組織tau蛋白磷酸化的影響及可能的作用機(jī)制。方法 健康C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組(Con組，全程正常飲用水喂養(yǎng))、發(fā)育早期鉛暴露組(Pb組，出生至出生后第21天母鼠給予0.2%醋酸鉛水)、單獨(dú)MT干預(yù)組(MT組，正常非暴露對(duì)照鼠在12月齡后給予含50 mg/mL MT飲用水干預(yù)3個(gè)月)及MT干預(yù)聯(lián)合鉛暴露組(MT+Pb組，出生至出生后第21天母鼠給予0.2%醋酸鉛水，并于12月齡后給予含50 mg/mL MT飲用水干預(yù)3個(gè)月)。采用石墨爐原子吸收光譜儀測(cè)定各組小鼠的血鉛和海馬鉛含量，Morris水迷宮檢測(cè)空間學(xué)習(xí)記憶功能，Western blot檢測(cè)海馬tau蛋白的磷酸化程度、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子GRP78和CHOP的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與Con組相比，Pb組小鼠血鉛和海馬鉛含量均明顯升高(均P<0.05)，給予MT干預(yù)并未影響血鉛和海馬鉛含量；且Pb組小鼠海馬tau蛋白磷酸化水平增強(qiáng)(P<0.01)，而給予MT干預(yù)后，相比Pb組，MT+Pb組小鼠海馬tau蛋白磷酸化水平明顯降低(P<0.05)；與Con組相比，Pb組小鼠海馬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子GRP78和CHOP蛋白表達(dá)水平均明顯升高(均P<0.05)，而MT干預(yù)后，相比Pb組，MT+Pb組GRP78和CHOP蛋白表達(dá)水平顯著下降(均P<0.05)。結(jié)論 MT可改善發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬tau蛋白的過度磷酸化，并改善其學(xué)習(xí)記憶功能，其具體機(jī)制可能與調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

褪黑素； 發(fā)育早期鉛暴露； 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激； tau蛋白磷酸化

鉛(lead，Pb)是一種常見的環(huán)境重金屬污染物，具有較強(qiáng)的神經(jīng)毒性，可造成神經(jīng)生理?yè)p傷及認(rèn)知功能缺陷等。近年來，環(huán)境鉛暴露所致神經(jīng)毒性在神經(jīng)退行性病變發(fā)生中的作用逐漸受到關(guān)注[1]。研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期低水平的鉛暴露可能是阿爾茨海默病(Alzheimer’s diseases，AD)發(fā)病的重要環(huán)境危險(xiǎn)因素，特別是Wu等[2]的研究發(fā)現(xiàn)發(fā)育早期的環(huán)境鉛暴露可增加個(gè)體成年期發(fā)生AD的風(fēng)險(xiǎn)。進(jìn)一步的研究顯示，發(fā)育早期的鉛暴露可導(dǎo)致成年小鼠海馬tau蛋白過度磷酸化[3]，從而參與AD病變的發(fā)生。然而，對(duì)于這種鉛暴露引發(fā)tau蛋白過度磷酸化的具體機(jī)制，目前尚不清楚。

新近研究發(fā)現(xiàn)：慢性鉛暴露可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ER stress)[4]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞內(nèi)重要的亞細(xì)胞器之一，是膜蛋白和分泌性蛋白進(jìn)行正確折疊和加工修飾的重要場(chǎng)所。未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白大量聚積、正常蛋白的過度蓄積以及胞內(nèi)鈣離子平衡被破壞等，均可觸發(fā)ER stress。其中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)和轉(zhuǎn)錄因子C/EBP同源蛋白(CHOP)作為ER stress的標(biāo)志分子，二者表達(dá)增高預(yù)示著ER stress的發(fā)生[5]。同時(shí)，有研究報(bào)道內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生后可激活tau蛋白磷酸化的關(guān)鍵激酶GSK-3β，從而促進(jìn)tau蛋白磷酸化[6]。上述研究提示：慢性鉛暴露可經(jīng)ER stress參與tau蛋白的磷酸化。

褪黑素(melatonin，MT)是由松果體腺分泌的內(nèi)源性激素，又稱松果體素，在很多生理活動(dòng)和病理過程中都起到重要的調(diào)節(jié)作用，如促進(jìn)睡眠、調(diào)節(jié)時(shí)差、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫等。研究顯示，老年階段個(gè)體合成分泌MT的功能減退，特別是AD患者血漿和腦脊液中MT水平均明顯下降，且有證據(jù)表明AD患者M(jìn)T水平的下降與其認(rèn)知功能減退呈正相關(guān)[7]。AD患者給予MT治療后，可明顯改善患者的認(rèn)知記憶功能。已有的研究表明，MT可通過調(diào)節(jié)tau蛋白磷酸化關(guān)鍵酶的活性以及抗氧化作用來改善tau蛋白的過度磷酸化，發(fā)揮抗AD作用[8]。

然而對(duì)于MT可否通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而改善發(fā)育早期鉛暴露所致的tau蛋白過度磷酸化，目前尚未見報(bào)道。本研究通過分娩后的母鼠給予醋酸鉛水建立發(fā)育早期鉛暴露小鼠模型，并經(jīng)MT干預(yù)以觀察MT對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬tau蛋白磷酸化的影響，探尋其機(jī)制是否經(jīng)調(diào)控ER stress而發(fā)揮作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 褪黑素(MT)和醋酸鉛購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。實(shí)驗(yàn)中所用抗體：GRP78(貨號(hào)：ab21685)、CHOP(貨號(hào)：ab53081)、t-tau(貨號(hào)：ab80579)、p-tau(Ser396)(貨號(hào)：ab109390)及GAPDH(貨號(hào)：ab181602)購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗以及WB顯色液等購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所。其余化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其分組處理 選擇8周齡健康C57BL/6小鼠[由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(閩)2014-0003]，SPF級(jí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物參照《福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)指南》進(jìn)行，飼養(yǎng)過程中能自由飲水、取食，飼養(yǎng)環(huán)境維持12 h晝夜節(jié)律，并保持溫度在(23±2)℃。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，并按雌雄比例2∶1配對(duì)合籠，經(jīng)陰栓確認(rèn)的孕鼠進(jìn)行單籠飼養(yǎng)，隨機(jī)分為兩組：發(fā)育早期鉛暴露組和非暴露組(對(duì)照組)，待分娩后，鉛暴露組母鼠給予含0.2%醋酸鉛的飲用水染毒至斷乳(第21天)，而非暴露對(duì)照組母鼠給予正常無鉛飲用水喂養(yǎng)。

繁殖獲得的子鼠，經(jīng)正常飼養(yǎng)至12月齡后，MT干預(yù)小鼠給予含50 mg/mL MT的飲用水喂養(yǎng)3個(gè)月，非干預(yù)組仍按正常飲用水喂養(yǎng)；干預(yù)結(jié)束后(15月齡)，先進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(水迷宮檢測(cè))，然后處死動(dòng)物進(jìn)行后續(xù)其他實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)育早期鉛暴露小鼠模型的建立、MT干預(yù)及分組 參考文獻(xiàn)[3]的方法，通過采用母鼠分娩后至子鼠斷乳(第21天)期間給予母鼠含0.2%醋酸鉛飲水的方法建立發(fā)育早期鉛暴露小鼠模型，并參考臺(tái)灣學(xué)者Wu等[9]的方法，經(jīng)飲水方式給予MT進(jìn)行干預(yù)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為如下4組：正常對(duì)照組(Con組，全程正常飲用水喂養(yǎng))，鉛暴露組(Pb組，出生至第21天母鼠給予0.2%醋酸鉛水)，單獨(dú)MT干預(yù)組(MT組，正常非暴露對(duì)照鼠在12月齡后給予含50 mg/mL MT飲用水干預(yù)3個(gè)月)及MT干預(yù)聯(lián)合鉛暴露組(MT+Pb組，出生至第21天母鼠給予0.2%醋酸鉛水，并于12月齡后給予含50 mg/mL MT飲水干預(yù)3個(gè)月)。

1.2.2 Morris水迷宮檢測(cè)實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮測(cè)試系統(tǒng)為一黑色圓形水池，直徑為120 cm，髙為60 cm，里面盛有不透明水，水溫維持在(23±2)℃。隱藏平臺(tái)為一有機(jī)玻璃圓柱形平臺(tái)，直徑為10 cm，位于水面下方1.5 cm，并將其置于目標(biāo)象限的中央?yún)^(qū)。隱藏平臺(tái)訓(xùn)練期間，小鼠每天進(jìn)行4次訓(xùn)練，連續(xù)訓(xùn)練6 d。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，將小鼠沿著池壁輕輕放入水中，入水象限是除了隱藏平臺(tái)所在象限外的其他3個(gè)象限，采用隨機(jī)方式確定其入水象限的順序。小鼠找到隱藏平臺(tái)的時(shí)間，即隱藏平臺(tái)潛伏期(escape latency，s)，規(guī)定為60 s，嚴(yán)格控制，如果小鼠爬上平臺(tái)，并在平臺(tái)上停留15 s視為找到平臺(tái)。訓(xùn)練結(jié)束后24 h(第7天)，移去隱藏平臺(tái)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的空間記憶能力，其中動(dòng)物尋找平臺(tái)的潛伏期、運(yùn)動(dòng)軌跡以及在目標(biāo)象限的停留時(shí)間(time in target quadrant)等作為評(píng)價(jià)其空間學(xué)習(xí)記憶能力的主要指標(biāo)。

1.2.3 血清和海馬鉛含量測(cè)定 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用10%水合氯醛溶液(按0.1 mL/10 g體重)腹腔注射麻醉小鼠，用摘眼球法采集各組小鼠血液，用含有肝素鈉的凍存管-20℃保存?zhèn)溆?；通過頸椎脫臼處死上述各組小鼠，并迅速摘取其海馬組織，采用石墨爐原子吸收光譜儀分別測(cè)定各組小鼠的血鉛和海馬組織中的鉛含量。

1.2.4 Western blot檢測(cè)蛋白的表達(dá) 水迷宮檢測(cè)結(jié)束后，處死各組小鼠，獲取腦組織，并分離其海馬組織，提取總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白含量。蛋白樣品經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分離、轉(zhuǎn)膜、封閉，分別加入待測(cè)蛋白[如p-tau(Ser396)、GRP78、CHOP等]一抗過夜，后經(jīng)辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記二抗孵育，采用Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)掃描成像，并進(jìn)行后續(xù)定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 發(fā)育早期慢性鉛暴露小鼠模型的建立

本研究中我們采用母鼠分娩后至子鼠斷乳(第21天)期間通過給予母鼠含0.2%醋酸鉛飲水的方法建立發(fā)育早期鉛暴露小鼠模型，以子鼠為研究對(duì)象，正常喂養(yǎng)至12月齡后，通過飲水方式給予50 mg/mL的MT后期干預(yù)3個(gè)月。

在干預(yù)結(jié)束后(約15月齡)采用石墨爐原子吸收光譜法檢測(cè)血液和海馬組織中的鉛含量。如圖1所示：相比Con組，Pb組小鼠血鉛含量明顯升高，而給予MT干預(yù)后，MT+Pb組的血鉛含量也明顯升高(均P<0.01)，與Pb組相比并未見明顯差異(P>0.05)。類似地，如圖1所示，Pb組小鼠海馬鉛含量也明顯升高，而給予MT干預(yù)后，MT+Pb組的海馬組織鉛含量也明顯升高(均P<0.01)，但與Pb組相比，海馬鉛含量亦未見顯著改變(P>0.05)。

與Con組比較，**P<0.01圖1 發(fā)育早期鉛暴露小鼠模型血鉛及海馬組織鉛含量Fig.1 Lead levels in the blood and hippocampus of the C57BL/6 mice with exposure to Pb at early development stage

2.2 MT干預(yù)對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響

通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，相比Con組，Pb組的小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能存在明顯缺陷，如圖2所示：發(fā)育早期鉛暴露小鼠尋找隱藏平臺(tái)時(shí)間(潛伏期)明顯長(zhǎng)于Con組，而給予MT干預(yù)后，MT+Pb組較Pb組潛伏期相對(duì)縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；在第7天撤去隱藏平臺(tái)后，我們發(fā)現(xiàn)Pb組小鼠在目標(biāo)象限(隱藏平臺(tái)所在象限)停留時(shí)間明顯少于Con組小鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而給予MT干預(yù)后，較單獨(dú)鉛暴露組，MT+Pb組小鼠在目標(biāo)平臺(tái)停留的時(shí)間明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，如圖2所示?？梢?，發(fā)育早期鉛暴露組的小鼠其學(xué)習(xí)記憶功能較對(duì)照組明顯減退，而給予MT干預(yù)可改善其記憶功能減退。

與Con組比較，*P<0.05 **P<0.01；與MT+Pb組比較，# P< 0.05圖2 MT對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響Fig.2 MT attenuates the deficits of mouse spatial learning and memory induced by Pb exposure at early development stage

2.3 MT干預(yù)對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠tau蛋白磷酸化的影響

我們采用Western blot檢測(cè)了各組小鼠海馬組織中磷酸化tau蛋白的表達(dá)水平。如圖3所示：相比Con組，Pb組小鼠tau蛋白磷酸化(Ser396位點(diǎn))水平顯著上調(diào)(P<0.01)，而給予MT干預(yù)后，MT+Pb組小鼠tau蛋白磷酸化水平明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。可見，發(fā)育早期鉛暴露可導(dǎo)致tau蛋白過度磷酸化，而MT干預(yù)可顯著改善tau蛋白磷酸化程度。

2.4 MT干預(yù)對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子表達(dá)的影響

進(jìn)一步，我們檢測(cè)了ER stress標(biāo)志性蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)水平。如圖4所示：相比Con組，Pb組GRP78和CHOP的表達(dá)均明顯增強(qiáng)(均P<0.05)，而MT干預(yù)后，MT+Pb組二者的表達(dá)較Pb組出現(xiàn)顯著下降(均P<0.05)?？梢?，發(fā)育早期的環(huán)境鉛暴露可引發(fā)ER stress，而MT可改善上述鉛暴露引發(fā)的ER stress.

與Con組比較，*P<0.05 **P<0.01；與Pb組比較，# P<0.05圖3 MT干預(yù)對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠tau蛋白磷酸化的影響Fig.3 MT attenuates the phosphorylation of tau induced by Pb exposure at early development stage of mice

與Con組比較，*P<0.05 **P<0.01；與Pb組比較，# P<0.05圖4 MT對(duì)發(fā)育早期鉛暴露小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志分子表達(dá)的影響Fig.4 MT decreases the expression of ER stress marker GRP78 and CHOP induced by Pb exposure at early development stage

3 討論

鉛是當(dāng)前一種較為普遍的環(huán)境重金屬毒物，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)是其作用的主要靶器官，可導(dǎo)致一系列的神經(jīng)生理及行為學(xué)異常。最近研究顯示：環(huán)境鉛暴露與AD的發(fā)生密切相關(guān)，可能是AD發(fā)病的環(huán)境危險(xiǎn)因素。有研究揭示：發(fā)育早期的鉛暴露可增加成年階段發(fā)生AD的風(fēng)險(xiǎn)[2]。發(fā)育早期的鉛暴露可導(dǎo)致成年階段小鼠海馬組織tau蛋白的過度磷酸化[3，10]。本實(shí)驗(yàn)中，我們首先通過給予含鉛飲水建立發(fā)育早期環(huán)境鉛暴露模型小鼠，經(jīng)石墨爐原子吸收光譜法檢測(cè)模型小鼠血鉛和海馬鉛含量，發(fā)現(xiàn)發(fā)育早期鉛暴露小鼠，成年階段血鉛和海馬中鉛含量均明顯高于正常對(duì)照小鼠，同時(shí)水迷宮檢測(cè)結(jié)果顯示：發(fā)育早期鉛暴露小鼠其空間學(xué)習(xí)記憶功能明顯減退，這與上述結(jié)果相一致，也提示我們?cè)炷３晒Α＝?jīng)Western blot檢測(cè)小鼠海馬組織中tau蛋白的磷酸化程度，結(jié)果顯示：發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬組織tau蛋白磷酸化(Ser396位點(diǎn))程度增強(qiáng)。

同時(shí)基于最近研究發(fā)現(xiàn)慢性鉛暴露可引發(fā)ER stress，而后者已證實(shí)在AD的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，有望成為未來揭開AD發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要方向[5]。因此，本研究中我們進(jìn)一步檢測(cè)了ER stress的標(biāo)志性蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：在發(fā)育早期的環(huán)境鉛暴露小鼠海馬組織中GRP78和CHOP的表達(dá)均明顯上調(diào)，提示在發(fā)育早期的環(huán)境鉛暴露可觸發(fā)ER stress。

褪黑素(MT)與AD發(fā)生密切相關(guān)，MT作為用于AD防治的前景藥物，已受到廣泛關(guān)注。但對(duì)于MT在鉛暴露所致的AD樣病變中的作用，目前相關(guān)報(bào)道還較少見。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，MT可顯著改善tau蛋白的磷酸化程度。本研究我們通過飲水方式給予鉛暴露小鼠MT干預(yù)，結(jié)果顯示：MT并不影響鉛暴露小鼠的血鉛和海馬鉛含量，但MT干預(yù)可顯著改善發(fā)育早期鉛暴露小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能，以及腦內(nèi)海馬組織的tau蛋白的過度磷酸化。進(jìn)一步研究顯示MT的干預(yù)可顯著緩解發(fā)育早期鉛暴露小鼠海馬ER stress，ER stress標(biāo)記蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)顯著下調(diào)。

因此，本研究中我們發(fā)現(xiàn)MT可改善發(fā)育早期鉛暴露所致的腦內(nèi)tau蛋白的過度磷酸化，其機(jī)制可能與調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的關(guān)鍵分子GRP78和CHOP的表達(dá)從而改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

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(2017-03-25 收稿)

Melatonin Ameliorates Tau Hyperphosphorylation of Mice with Exposure to Lead(Pb)at Early Development Stage by Mediating ER Stress in Hippocampus

Liu Xiaofeng1，Chen Juan2，Ou Qishui1△

1Department of Laboratory Medicine，Gene Diagnostic Laboratory，the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University，F(xiàn)uzhou 350005，China2Department of Biochemistry and Molecular Biology，School of Basic Medical Sciences，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

Objective To investigate the effect of melatonin(MT)on tau hyperphosphorylation in hippocampus of mice with exposure to lead(Pb)at early development stage and its possible mechanism.Methods Healthy C57BL/6 mice were randomly divided into four groups：control group(

normal water)，lead exposure group(exposed to 0.2% Pb acetate from postnatal day 1(PND 1)to PND 21 through drinking water)，MT group(received 50 mg/mL MT through drinking water since 12-month-old for 3 months)and MT combined with lead exposure group(exposed to 0.2% Pb acetate from PND 1 to PND 21 and then given 50 mg/mL MT since 12-month-old for 3 months through drinking water).The Pb levels in the blood and hippocampus were determined by graphite furnace atomic absorption spectrometry.Morris water maze was used to detect the spatial learning and memory.The phosphorylation level of tau and the protein level of GRP78 and CHOP in hippocampus were detected by Western blotting.Results Compared with the control group，the Pb levels in the blood and hippocampus were significantly increased in lead exposure group(P<0.05)，while MT treatment did not affect the Pb levels both in the blood and hippocampus.In the lead exposure group，the phosphorylation level of tau in the hippocampus was significantly increased compared with control group(P<0.01)，and after treatment with MT，the phosphorylation level of tau in MT combined with lead exposure group was significantly decreased compared with the lead exposure group(P<0.05).Furthermore，the expression of GRP78 and CHOP in the hippocampus was significantly higher in lead exposure group than in control group(P<0.05)，and after treatment with MT，the expression levels of GRP78 and CHOP were lower than those of the control group.Conclusion MT can ameliorate the phosphorylation level of tau in the hippocampus and defects of learning and memory in C57BL/6 mice with exposure to lead at early development stage，and this may be related with the modulation of endoplasmic reticulum stress.

melatonin； lead(Pb) exposure； endoplasmic reticulum stress； tau hyperphosphorylation

*國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.31171027，No.31670778，No.81371416)；福建省衛(wèi)生計(jì)生委青年課題資助項(xiàng)目(No.2016-1-55)； 福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2016J05185)

R542.2

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.04.005

劉曉峰，男，1987年生，醫(yī)學(xué)博士，E-mail：liuchongyang555@126.com

△通訊作者，Corresponding author，E-mail：ouqishui@163.com