王蘇康 劉燕子 黨耀宏 邱中常 胡翠 李小麗王丹萍 白晨倩 婁玲玲 劉世國(guó)(.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 河南 新鄉(xiāng) 45000；.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科 河南 新鄉(xiāng) 45000；.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 分子病原體實(shí)驗(yàn)室 河南 新鄉(xiāng) 45000)

新鄉(xiāng)地區(qū)住院患者弓形蟲感染狀況

王蘇康1劉燕子2黨耀宏1邱中常1胡翠1李小麗1王丹萍1白晨倩1婁玲玲1劉世國(guó)3
(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科 河南 新鄉(xiāng) 453000；3.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 分子病原體實(shí)驗(yàn)室 河南 新鄉(xiāng) 453000)

目的 了解目前各類住院患者弓形蟲感染狀況。方法 在2014年5月至2015年10月隨機(jī)收集新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院住院患者血液標(biāo)本830份，采用酚試劑法提取患者血液中DNA，將弓形蟲多拷貝529DNA片段作為待檢弓形蟲序列，通過(guò)單管一步法巢式PCR技術(shù)擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)樣本中目的基因的存在。結(jié)果 弓形蟲529基因患者總陽(yáng)性率為3.13%，男3.05%，女3.23%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。育齡婦女(16～49歲)陽(yáng)性率為3.74%，眼部疾病患者陽(yáng)性率為5.10%，肝部疾病患者陽(yáng)性率為5.56%，感染高于總體水平。結(jié)論 住院患者存在弓形蟲感染，各科室各病種均有弓形蟲陽(yáng)性感染。

弓形蟲；住院患者；新鄉(xiāng)地區(qū)

弓形蟲病是由剛地弓形蟲感染所致的全球性人畜共患疾病[1]，人群普遍易感，幾乎影響到世界人口的1/3[2-3]。人受感染后，蟲體可侵犯人體多種臟器，其臨床表現(xiàn)常因侵犯臟器不同而異，幾乎涉及內(nèi)、外、婦、兒、神經(jīng)精神、傳染病、腫瘤、眼、耳鼻喉等科室[4]。崔黎明等[5]調(diào)查吉林大學(xué)第一醫(yī)院住院患者弓形蟲感染率高達(dá)16.95%，目前河南新鄉(xiāng)無(wú)相關(guān)報(bào)道。為了解河南新鄉(xiāng)地區(qū)住院患者弓形蟲感染情況，于2014年5月至2015年10月對(duì)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院各科室患者進(jìn)行弓形蟲DNA檢測(cè)調(diào)查。

1 對(duì)象與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象 隨機(jī)選取2014年5月至2015年10月在新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院入院檢查的830例患者為調(diào)查對(duì)象，來(lái)自25個(gè)不同科室的患者，年齡0～96歲。

1.2 材料與方法

1.2.1 試劑 蛋白酶K購(gòu)自USA Genview，Tris飽和酚購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，PCR 2*Es Taq master mix購(gòu)自中國(guó)北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，弓形蟲RH株是新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲學(xué)教研室長(zhǎng)期保種，引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2.2 DNA檢測(cè) 患者血液DNA的提取按苯酚抽提法進(jìn)行，RH株弓形蟲滋養(yǎng)體的DNA提取按酚一氯仿法進(jìn)行；然后以患者DNA為模板，進(jìn)行單管一步法巢式PCR，擴(kuò)增弓形蟲529多拷貝片段。弓形蟲529外引物F：5’-CGC TGC AGG GAG GAA GAC GAA AGT TG-3’，R：5’-CGC TGC AGA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3’，弓形蟲529內(nèi)引物F：5’-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG-3’, R：5’-CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC-3’。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s進(jìn)行15個(gè)循環(huán)擴(kuò)增；然后在95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，72 ℃ 5 min條件下再進(jìn)行共35個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，每個(gè)樣本DNA擴(kuò)增反應(yīng)均在1個(gè)PCR反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行。取15 μl PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。以RH株弓形蟲滋養(yǎng)體DNA作陽(yáng)性對(duì)照，已知正常人血液DNA作陰性對(duì)照，ddH2O作空白對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次調(diào)查統(tǒng)計(jì)性別、年齡和疾病為記錄。用χ2檢驗(yàn)檢測(cè)在研究人群中不同性別、年齡和疾病弓形蟲感染情況，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 男性與女性普通患者弓形蟲感染情況 男性弓形蟲感染陽(yáng)性率為3.05%，女性為3.23%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.023 0，P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 男性與女性普通患者弓形蟲感染情況(n，%)

2.2 各年齡段普通患者弓形蟲感染情況 40～49歲組陽(yáng)性率較高，為6.09%，0～9歲組較低，為0.00%，各年齡組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各年齡段普通患者弓形蟲感染情況(n，%)

2.3 患病部位及不同類型 各個(gè)患病部位及不同類型弓形蟲感染率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 患者的患病部位及不同類型情況(n，%)

3 討論

弓形蟲是重要的人獸共患病，對(duì)人類健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。弓形蟲感染免疫力正常者，常以包囊的形式潛伏與體內(nèi)，在腦部常處于休眠狀態(tài)，一般無(wú)臨床癥狀[6]。當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，使其致病力增強(qiáng)，腫瘤患者由于經(jīng)放療或化療機(jī)體免疫力下降，使原有隱形感染活化，誘發(fā)弓形蟲感染，導(dǎo)致患者病情惡化，預(yù)后不佳[7]。

據(jù)本次調(diào)查顯示，河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院住院患者弓形蟲陽(yáng)性率為3.13%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道的吉林大學(xué)第一醫(yī)院住院患者陽(yáng)性率16.95%，張家口地區(qū)醫(yī)院10.12%相比較低，而與長(zhǎng)沙醫(yī)科大學(xué)附屬湘雅醫(yī)院3.54%結(jié)果相近[4，5，8]。國(guó)外報(bào)道的土耳其阿菲永醫(yī)院檢測(cè)弓形蟲陽(yáng)性率24%和伊朗艾爾·薩拉醫(yī)院普通患者陽(yáng)性率43.1%相比更低[9-10]。這可能與中國(guó)人口弓形蟲感染率較低(7.88%)，而國(guó)外如羅馬尼亞陽(yáng)性率64.8% ，伊朗陽(yáng)性率55.5%，美國(guó)陽(yáng)性率為22.5%，土耳其陽(yáng)性率為19.4%，普洱市陽(yáng)性率為24.17%等感染較高相關(guān)[11-15]。可能是社會(huì)文化和氣候因素的地區(qū)差異引起的[16-17]。弓形蟲病是重要的食物源性寄生蟲病，因此當(dāng)?shù)匦竽翗I(yè)發(fā)展對(duì)人類健康造成巨大的威脅，應(yīng)該引起我們極大的關(guān)注和重視。

本次調(diào)查男性與女性普通患者弓形蟲陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與羅馬尼亞一般人群(男：60.4%，女：68.5%，P>0.05)、伊朗一般人群(男：54.4%，女：56.2%，P>0.05)、中國(guó)ICU(男：18.36%，女：21.60%，P>0.05)和莫桑比克艾滋病患者(男：39.30%，女：50.90%，P>0.05)等性別差異的調(diào)查結(jié)果相符合[13,14,18，19]。這說(shuō)明弓形蟲的感染與性別無(wú)關(guān)，但從上面數(shù)據(jù)可以看出女性弓形蟲陽(yáng)性率都略高于男性，這可能在某種因素的影響下存在差異。也有報(bào)道顯示泰國(guó)南部HIV患者性別差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(男性：42%，女性：30%，P=0.031)，男性陽(yáng)性率明顯高于女性[20]。因此弓形蟲感染與性別的關(guān)系應(yīng)該引起大家的注意。各年齡組之間弓形蟲感染亦無(wú)太大差異，并且隨著年齡的增加弓形蟲陽(yáng)性率呈不規(guī)則變化，這與相關(guān)報(bào)道的弓形蟲感染率隨年齡增長(zhǎng)而增長(zhǎng)不符[19,21]。40～49歲年齡組陽(yáng)性率明顯高于其他年齡組，這可能與他們流動(dòng)大、生活條件較差，感染機(jī)會(huì)多，且這個(gè)年齡段人體體能各方面開(kāi)始減退，抵抗力下降，加上惡劣的環(huán)境，弓形蟲更易侵入人體有關(guān)。也有報(bào)道稱各年齡組中30～39歲感染率偏高基本相符[22]。

在本次研究中育齡婦女弓形蟲陽(yáng)性率為3.74%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道的魯西地區(qū)3.10%基本一致，而與國(guó)外，如印度22.4%，羅馬尼亞西部55.5%，西班牙43.8%，克羅地亞38.1%，匈牙利69.0%等相比，中國(guó)育齡婦女弓形蟲感染率較低[13,16,23]。一個(gè)顯著的相關(guān)性是與土壤接觸，并且羅馬尼亞報(bào)道稱在育齡婦女中農(nóng)村地區(qū)感染率顯著高于城市地區(qū)(農(nóng)村地區(qū)：68.9%，城市地區(qū)：40.0%，P=0.03)[13，24]。這可能是農(nóng)村家庭養(yǎng)貓較多，貓通過(guò)糞便污染了土壤，而農(nóng)村婦女長(zhǎng)期接觸土壤，便增加了弓形蟲感染率，再加上農(nóng)村衛(wèi)生條件較差，因此農(nóng)村婦女的健康應(yīng)該引起我們的重視。

弓形蟲寄生于有核細(xì)胞內(nèi)，隨血液流動(dòng)，到達(dá)全身各部位，破壞大腦、心臟、眼部等重要器官，致使人的免疫力下降。本次調(diào)查統(tǒng)計(jì)了人體重要器官疾病弓形蟲感染情況，在腦部疾病，眼部疾病、肝部疾病和心血管疾病的患者中均有弓形蟲感染者，且眼部疾病患者和肝部疾病患者的陽(yáng)性率高于總體水平。弓形蟲是一種嗜神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，可引起嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，破壞大腦、眼部等器官，引起較高的感染率，本次調(diào)查中腦部疾病患者弓形蟲感染并不明顯，但應(yīng)引起臨床醫(yī)生的重視[23-24]。腫瘤患者弓形蟲陽(yáng)性率接近于總體水平，與有些報(bào)道稱腫瘤患者(63.53%)和普通患者(24.14%)弓形蟲感染有顯著差異的結(jié)果不同[7]。心血管疾病患者弓形蟲陽(yáng)性率卻低于總體水平，與相關(guān)結(jié)果(心臟?。?3.8%，對(duì)照組：8%，P=0.010)更是不同，此報(bào)道稱弓形蟲感染可能與飲酒有關(guān)[25]。對(duì)于心血管疾病的感染情況有待進(jìn)一步研究。

本次調(diào)查結(jié)果顯示，河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院住院患者弓形蟲感染率處于較低水平，但中老年、免疫功能低下者以及育齡婦女陽(yáng)性率偏高，建議醫(yī)院加強(qiáng)血清學(xué)檢測(cè)，便于及時(shí)采取有效干預(yù)措施。

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Infection ofToxoplasmagondiiin hospitalized patients in Xinxiang district

Wang Sukang1, Liu Yanzi2, Dang Yaohong1, Qiu Zhongchang1, Hu Cui1, Li Xiaoli1, Wang Danping1, Bai Chenqian1, Lou Lingling1, Liu Shiguo3
(1.BasicMedicalCollegeofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453000,China; 2.DepartmentofLaboratory,theThirdAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453000,China; 3.MolecularPathogenLaboratory,XinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453000,China)

Objective To investigate theToxoplasmagondiiinfection among all kinds of hospitalized patients. Methods Blood samples of 830 hospitalized patients were randomly collected from the Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University in May of 2014 to October of 2015. The total DNA was extracted by phenol reagents in the blood of patients. TheToxoplasmagondii529 muiticopy fragment gene was used as the sequence ofToxoplasmagondii. The DNA fragment was amplified by single one-step nested PCR technique and the presence of the target gene in the samples was detected by agarose gel electrophoresis. Results The total positive rate ofToxoplasmagondii529 gene was 3.13%. The positive rate of male was 3.05%, female was 3.23%, the difference was not statistically significant (P>0.05). The positive rate of women of childbearing age (16～49 years) was 3.74%. The positive rate of patients with ocular disease was 5.10% and the positive rate of patients with liver disease was 5.56%. The positive rate of these diseases was higher than the overall level of infection. Conclusion The infected person ofToxoplasmagondiiis present in hospitalized patients and the infection ofToxoplasmagondiiis positive in all departments and all types of diseases.

Toxoplasmagondii; hospitalized patient; Xinxiang district

劉世國(guó)，E-mail：lsg1963@163.com。

R 382.5

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.16.006

2016-11-16)