陳國(guó)強(qiáng)，郝亞寧

(1.陜西省西安市兒童醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710003；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710061)

兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中Toll樣受體4及Toll樣受體7的表達(dá)

陳國(guó)強(qiáng)1，郝亞寧2

(1.陜西省西安市兒童醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710003；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710061)

目的 探究?jī)和l(fā)性腎病綜合征腎組織中Toll樣受體4(TLR4)及TLR7的表達(dá)及臨床意義。方法 選取陜西省西安市兒童醫(yī)院自2013年7月至2016年7月收治的300例接受腎活檢的兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織作為觀察組，按照病例分型可分為MCD型(78例)、MN型(72例)、MsPGN型(75例)及FSGS型(75例)，另選擇同期收治的70例腎母細(xì)胞瘤患兒的正常腎組織作為對(duì)照組，采用免疫組化的方法對(duì)兩組腎組織中TLR4及TLR7的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平較高，不同病理類型組織中MCD型腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.56～9.23，均P<0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平較高，不同病理類型組織中MsPGN型腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MCD型及FSGS型，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.82～10.25，均P<0.05)。結(jié)論 TLR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中呈現(xiàn)較高的表達(dá)水平，且其表達(dá)水平在不同病理類型中有一定的差異。

兒童原發(fā)性腎病綜合征；腎組織；Toll樣受體4；Toll樣受體7

Toll樣受體(TLR)作為機(jī)體中一類重要的跨膜蛋白，屬于天然的免疫分子，在機(jī)體中的主要作用為通過(guò)對(duì)不同病原微生物相關(guān)分子模式進(jìn)行有效的識(shí)別，從而在免疫功能中發(fā)揮重要的作用[1]。近年來(lái)，有研究報(bào)道指出，Toll樣受體還可對(duì)獲得性免疫提供有效的刺激信號(hào)，從而引導(dǎo)一系列的炎癥反應(yīng)[2]。由于兒童原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)病機(jī)制與T淋巴細(xì)胞功能紊亂相關(guān)，在該病發(fā)生發(fā)展期間多伴隨著各種細(xì)胞因子水平及功能的紊亂，而Toll樣受體的信號(hào)通路此時(shí)則對(duì)感染性與非感染性腎臟疾病產(chǎn)生了介導(dǎo)作用[3]。但目前關(guān)于Toll樣受體在兒童原發(fā)性腎病綜合征中的表達(dá)水平的研究較少，現(xiàn)本研究對(duì)此展開分析，將結(jié)果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取陜西省西安市兒童醫(yī)院自2013年7月至2016年7月收治的300例原發(fā)性腎病綜合征患兒腎活檢的腎組織作為觀察組，納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：均符合2009年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)會(huì)腎臟組制定的標(biāo)準(zhǔn)[4]，在穿刺活檢前1個(gè)月內(nèi)未出現(xiàn)感染者；排除腎活檢剩余組織較少者，排除合并其他嚴(yán)重心血管疾病者。按照腎病綜合征診治指南與激素耐藥型腎病綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)分型[5]，腎臟病理分型由本院專業(yè)人員完成，分為微小病變(MCD型)共78例；膜性腎病(MN型)共72例；系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN型)共75例；局灶性腎小球硬化(FSGS型)共75例。觀察組根據(jù)病理分組進(jìn)一步分為MCD組、MN組、MsPGN組、FSGS組，另選擇同期收治的70例腎母細(xì)胞瘤患兒的正常腎組織作為對(duì)照組，5組一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。5組患兒家屬均簽署了關(guān)于本次試驗(yàn)的知情權(quán)同意書，試驗(yàn)符合醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2方法

采用免疫組化的方法對(duì)觀察組和對(duì)照組腎組織中TLR4及TLR7的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)所用儀器和試劑盒由上?；蚩萍加邢薰咎峁?duì)TLR4及TLR7表達(dá)水平采用數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行觀察分析。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)

將腎組織中褐色的染色區(qū)域作為判斷陽(yáng)性的區(qū)域。在每張組化切片中隨機(jī)選取10個(gè)互相不重疊的腎小球橫切片，計(jì)算出每個(gè)腎小球陽(yáng)性面積與整個(gè)腎小球面積的比值，采用所計(jì)算出來(lái)的結(jié)果分別代表TLR4、TLR7的表達(dá)水平[6-7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1一般資料對(duì)比

5組患兒的性別、年齡及病程比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為1.23、1.27、1.03，均P>0.05)，見表1。

表1 5組患兒一般資料對(duì)比

2.2腎組織中TLR4的表達(dá)水平對(duì)比

5組腎小球組織中TLR4的表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.92，P>0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平較高，MCD組腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平要明顯高于MN組、MsPGN組及FSGS組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.56～9.23，均P<0.05)，見表2。

表2 5組腎組織中TLR4的表達(dá)水平對(duì)比

2.3腎組織中TLR7的表達(dá)水平對(duì)比

5組腎小球組織中TLR4的表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.78，P>0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平較高，MsPGN組腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平要明顯高于MN組、MCD組及FSGS組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.82～10.25，均P<0.05)，見表3。

表3 5組腎組織中TLR7的表達(dá)水平對(duì)比

3討論

3.1 Toll樣受體在人體中的作用機(jī)制

TLR主要存在于人體的免疫細(xì)胞中，其主要功能是對(duì)病原體的分子模式進(jìn)行有效的識(shí)別，對(duì)天然免疫反應(yīng)進(jìn)行妥善地調(diào)節(jié)，同時(shí)能夠發(fā)揮介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用，對(duì)病原微生物的侵襲發(fā)揮充分的抵御效果[8]。近年來(lái)，針對(duì)Toll樣受體中比較具有代表性的TLR4及TLR7展開的研究發(fā)現(xiàn)，二者在人體中的表達(dá)水平與原發(fā)性及感染性腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展有密切的相關(guān)性，同時(shí)其也可在免疫治療中發(fā)揮較為突出的作用[9]。另外，有專家學(xué)者對(duì)Toll樣受體的信號(hào)通路在原發(fā)性腎病綜合征中的作用展開研究，一方面發(fā)現(xiàn)機(jī)體在發(fā)生感染及損傷的情況下時(shí)，可誘導(dǎo)產(chǎn)生Toll樣受體的依賴性炎癥，促進(jìn)疾病的進(jìn)展[10]。另一方面發(fā)現(xiàn)Toll樣受體能夠?qū)C(jī)體局勢(shì)細(xì)胞、NK細(xì)胞等一系列機(jī)體固有的免疫細(xì)胞產(chǎn)生明顯的活化作用，對(duì)例如核轉(zhuǎn)錄因子(NF-KB)等下游信號(hào)分子產(chǎn)生激活的作用，與機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生具有一定的關(guān)系，對(duì)炎癥因子也可產(chǎn)生激活作用[11]。

3.2不同病理類型下腎組織中的TLR4及TLR7的表達(dá)水平及意義

在本次研究中，我們針對(duì)不同病理類型下腎組織中的TLR4及TLR7的表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比觀察，可見觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平較高，不同病理類型組織中MCD型腎小管組織中TLR4的表達(dá)水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型。觀察組中的不同病理類型組與對(duì)照組相比腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平較高，不同病理類型組織中MsPGN型腎小管組織中TLR7的表達(dá)水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MCD型及FSGS型?？梢奣LR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病過(guò)程可能起到一定的作用，介導(dǎo)了IgA腎病免疫異常的情況，通過(guò)對(duì)TLR4及TLR7所識(shí)別的主要配體類型進(jìn)行分析可見，兒童原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)生可能與細(xì)菌及病毒感染相關(guān)[12]。另外，有臨床資料顯示，TLR7可通過(guò)升高抗RNA抗體的生成，誘導(dǎo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生發(fā)展[13]。

綜上所述，TLR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中呈現(xiàn)出較高的表達(dá)水平，且其表達(dá)水平在不同病理類型中具有一定的差異。但本次研究尚未對(duì)不同病理類型中TLR4及TLR7表達(dá)水平的規(guī)律進(jìn)行探究，仍存在不足，可進(jìn)一步研究以獲得更精確的結(jié)論，為兒童原發(fā)性腎病綜合征的診斷及治療提供可靠的依據(jù)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：孫 新]

Expression of toll like receptor 4 and 7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome

CHEN Guo-qiang1, HAO Ya-ning2

(1.DepartmentofNephrology,Xi’anChildren’sHospital,ShaanxiXi’an710003,China; 2.DepartmentofNephrology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To probe and analyze the expressions of toll like receptor 4 (TLR4) and TLR7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome and its clinical significance. Methods Renal tissues of 300 children with primary nephrotic syndrome hospitalized for renal biopsy in Xi’an Children’s Hospital from July 2013 to July 2016 were selected as observation group, and according to case classification divided into MCD type (78 cases), MN type (72 cases), MsPGN type (75 cases) and FSGS type (75 cases). Normal renal tissues of 70 children with nephroblastoma hospitalized at same period were chosen as control group. Immunohistochemical method was used to test the expression level of TLR4 and TLR7 in kidney tissues in two groups. Results Expression level of TLR4 in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, expression level of TLR4 in renal tubule tissue in MCD type was significantly higher than that in other types, with MN type, MsPGN and FSGS type followed in sequence, and difference had statistical significance (tvalue ranged 4.56 to 9.23, allP<0.05). TLR7 expression level in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, TLR7 expression level in renal tubule tissue in MsPGN type was significantly higher than that in other types, with MN type, MCD type and FSGS type followed in sequence, and difference was statistically significant (tvalue ranged 4.82 to 10.25, allP<0.05).Conclusion Expression levels of TLR4 and TLR7 are high in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome, and its expression level has a certain difference in different pathological type

children with primary nephrotic syndrome; kidney tissues; toll like receptor 4 (TLR4); toll like receptor 7 (TLR7)

2017-01-20

陳國(guó)強(qiáng)(1975—)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腎病綜合征方面的工作。

郝亞寧，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.004

R725.8

A

1673-5293(2017)08-0905-03