張 云 陳俊玉 陳澤宇 張信仁

(三明出入境檢驗(yàn)檢疫局1，三明 365000)(東山出入境檢驗(yàn)檢疫局2，漳州 363401)

植物油中鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)研究

張 云1陳俊玉2陳澤宇1張信仁1

(三明出入境檢驗(yàn)檢疫局1，三明 365000)
(東山出入境檢驗(yàn)檢疫局2，漳州 363401)

建立了同時(shí)測(cè)定植物油中溴氰蟲酰胺、氟蟲雙酰胺、氯蟲苯甲酰胺3種鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥殘留的凝膠滲透色譜(GPC)-液相色譜檢測(cè)方法。植物油中殘留的鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥，經(jīng)環(huán)已烷-乙酸乙酯混合溶液提取后，用凝膠滲透色譜系統(tǒng)凈化，以乙腈∶0.1mol/L的乙酸銨水溶液(58∶42)作為流動(dòng)相，DAD檢測(cè)器測(cè)定，外標(biāo)法定量。測(cè)定結(jié)果表明：采用本方法檢測(cè)植物油中3種鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥，方法檢出限均能達(dá)到0.1mg/kg，在標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量濃度0.1～2 mg/L之間線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999 8，在0.1、0.2、1mg/kg水平添加回收，回收率在70.1%～99.1%范圍之間，準(zhǔn)確度較高；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍在3.0%～9.7%之間，精密度較好。

植物油 鄰氨基苯甲二酰胺 凝膠滲透色譜 液相色譜

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜儀(配DAD檢測(cè)器)、Autoclean凝膠滲透色譜儀：美國(guó)LabTech公司。

菜籽油：市售。乙腈、甲醇、乙酸胺為色譜純，環(huán)已烷、乙酸乙酯為分析純。水：符合GB/T 6682—2008中一級(jí)水的規(guī)定。 溴氰蟲酰胺、氟蟲雙酰胺、氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，純度均≥97%：Dr.Ehrenstorfer公司。分別稱取適量標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，該溶液在2～8 ℃環(huán)境中可保存3個(gè)月。使用時(shí)根據(jù)需要以流動(dòng)相配成標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理

稱取食用油樣品2 g(精確至0.1 g)于10mL容量瓶中，加入環(huán)已烷-乙酸乙酯(1∶1，體積比)混合溶液定容至刻度，取樣液2mL進(jìn)樣，用凝膠滲透色譜儀進(jìn)行分離凈化，收集9～15 min的組分，于氮吹儀中50 ℃條件下氮吹至干，用1 mL流動(dòng)相漩渦混勻溶解殘?jiān)?，過0.22 μm微孔濾膜后，高效液相色譜測(cè)定。

1.2.2 凝膠滲透色譜條件

凈化柱：S-X3 Bio-Beads(粒徑38～75 μm，填料22 g)；流動(dòng)相：環(huán)已烷-乙酸乙酯(1∶1，體積比)；等度洗脫；流速：5 mL/min；凈化程序：0～9 min棄去洗脫液，9～16 min收集洗脫液。

時(shí)光流逝了，記憶卻不會(huì)一下子隨風(fēng)彌散，她的身上有了另一種男人的味道，這讓她又難受又欣悅，難受的是她怕見到風(fēng)影，欣悅的是她終于又做了一回女人。人活在世上，也就那么一點(diǎn)樂趣，跟那些高雅、高貴或高尚的正人君子們不一樣，紅琴畢竟是個(gè)山野女子，昔日純粹的村姑清純?nèi)缢?，如今世俗的村婦艷麗如花。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-P柱，150 mm×4.6 mm(i.d.)，5 μm，或其它等效色譜柱；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：50 μL；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)器：DAD 檢測(cè)器，波長(zhǎng)：240 nm；流動(dòng)相：乙腈∶0.1mol/L的乙酸銨水溶液=58∶42。

1.2.4 定量測(cè)定

用混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液對(duì)樣品溶液進(jìn)行外標(biāo)法定量，樣品溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)與相應(yīng)濃度的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)響應(yīng)值相當(dāng)。

2 結(jié)果與討論

2.1 凈化條件的選擇與優(yōu)化

在植物油中檢測(cè)農(nóng)藥殘留，高含量的油脂成分是最大的基體干擾要素，必須采用有效的前處理方法，否則不但回收率不高，而且會(huì)對(duì)分析儀器造成嚴(yán)重污染，降低使用壽命[16]。常見的針對(duì)植物油中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有浸泡振蕩、液-液分配、超聲提取等傳統(tǒng)方法[17]，但該方法存在回收率低，凈化不徹底等問題；也有報(bào)道采用固相萃取法[18]進(jìn)行凈化，固相萃取柱可以去除植物油基質(zhì)，有機(jī)酸等雜質(zhì)，但存在選擇性不高，處理過程較為繁瑣等缺點(diǎn)。凝膠滲透色譜能將分子量較大的甘油三酯基質(zhì)與目標(biāo)農(nóng)藥組分有效分離開來，凈化效果良好，且省去了大量的人工操作，近年來得到廣泛推廣使用[19]。植物油中農(nóng)藥殘留檢測(cè)不同凈化方法對(duì)比見表1。

表1 植物油中農(nóng)藥殘留檢測(cè)不同凈化方法對(duì)比

利用凝膠滲透色譜法對(duì)植物油中鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥進(jìn)行凈化。為確定最佳的樣品收集時(shí)間，從6 min起，以1 min為步長(zhǎng)，每分鐘收集1管洗脫液，共收集15管，收集液于氮吹儀中50 ℃條件下氮吹至干，流動(dòng)相溶解后過濾，液相色譜測(cè)定。結(jié)果表明，前3管未檢出，后5管也均未檢出，檢測(cè)結(jié)果見圖1。因此，確定收集時(shí)間為9～15 min。

圖1 添加1 mg/kg目標(biāo)物各時(shí)間段檢出結(jié)果

2.2 色譜條件的優(yōu)化

乙腈和甲醇是檢測(cè)農(nóng)藥殘留最常用的2種有機(jī)系流動(dòng)相。亢曉冬等[13]曾采用(甲醇+水)作為氯蟲苯甲酰胺的流動(dòng)相，也有報(bào)道采用(乙腈+水+磷酸)作為流動(dòng)相[20]。為了獲取目標(biāo)物較好的保留、分離和響應(yīng)效果，本試驗(yàn)對(duì)比了(甲醇+水)、(乙腈+水+磷酸)以及(乙腈+水)作為流動(dòng)相的效果，發(fā)現(xiàn)采用乙腈為有機(jī)系流動(dòng)相時(shí)分離效果較好，靈敏度較高，且柱壓較低。對(duì)比了乙腈為有機(jī)系流動(dòng)相時(shí)，加酸與不加酸條件下的信號(hào)大小，結(jié)果基本一致，但添加一定濃度的乙酸銨，峰型較好，標(biāo)準(zhǔn)樣品譜圖見圖2。

注:a為溴氰蟲酰胺；b為氯蟲苯甲酰胺；c為氟蟲雙酰胺圖2 0.1 mg/L雙酰胺類標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.3 方法的線性相關(guān)性和測(cè)定低限

準(zhǔn)確配制鄰氨基苯甲二酰胺類系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度分別為0.1、0.2、0.5、1、2 mg/L。按照1.2中的儀器條件進(jìn)樣分析后，以峰面積y對(duì)質(zhì)量濃度x繪制工作曲線。線性相關(guān)系數(shù)R均大于等于0.999 8，在0.1～2mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表2。根據(jù)信噪比S/N≥10為定量限(limit of quantitation, LOQ)和S/N≥3為檢出限(limit of detection, LOD)的參考規(guī)定，結(jié)合樣品處理過程中的稀釋倍數(shù)，計(jì)算各組分的方法檢出限分別為0.008、0.027、0.016 mg/kg，定量限分別為0.03、0.09和0.06 mg/kg。

表2 鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥的線性回歸方程、 相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

以不含溴氰蟲酰胺、氟蟲雙酰胺和氯蟲苯甲酰胺的植物油樣品為本底，分別添加系列濃度的待測(cè)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表3。方法回收率在70.1%～99.1%之間，同一目標(biāo)物的平均回收率隨著添加濃度的增加而逐漸提高；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.0～9.7之間，在高的添加水平上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差更小，結(jié)果重復(fù)性更好。

表3 植物油樣品中鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥 的回收率和精密度(n=6)

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

應(yīng)用本研究所建立的方法對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的10批菜籽油樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在一批樣品中檢出氯蟲苯甲酰胺，檢出值為0.41 mg/kg，超過GB 2763中規(guī)定的最大殘留限量0.3 mg/kg。由圖3可見，在目標(biāo)物質(zhì)出峰前后沒有雜質(zhì)峰干擾。

圖3 實(shí)際樣品色譜圖

3 結(jié)論

本研究將GPC凈化技術(shù)和液相色譜檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合測(cè)定植物油中溴氰蟲酰胺、氟蟲雙酰胺和氯蟲苯甲酰胺等3種鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥殘留。各化合物測(cè)定低限均可達(dá)到0.1mg/kg；在質(zhì)量濃度0.1～2mg/L之間線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R均大于0.999 8；對(duì)于0.1、0.2、1 mg/kg 3個(gè)水平添加回收，回收率在70.1%～99.1%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.0%～9.7%之間。該方法快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、凈化效果好，顯著地縮短了檢測(cè)時(shí)間，可應(yīng)用于植物油中鄰氨基苯甲二酰胺類農(nóng)藥的快速分析。

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Detection Technology of O-Amino Benzoic Diamide Pesticide Residues in Vegetable Oil

Zhang Yun1Chen Junyu2Chen Zeyu1Zhang Xinren1

(Sanming Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau1, Sanming 365000) (Dongshan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau2, Zhangzhou 363401)

A gel permeation chromatography (GPC)-liquid chromatography method was developed for the simultaneous determination of 3 kinds of o-amino benzoic diamide pesticide residues (cyantraniliprole, flubendiamide and chlorantraniliprole) in vegetable oil. O-amino benzoic diamide pesticide residues in vegetable oil extracted with cyclohexane and ethyl acetate mixture solution was purified by gel permeation chromatography system; acetonitrile and 0.1 mol/L ammonium acetate aqueous solution (58∶42) was taken as mobile phase to determine by the DAD detector and quantify by external standard method. The results showed that by using this method to determine 3 kinds of o-amino benzoic diamide pesticides, the limit of detection could achieved 0.1 mg/kg; the relative modular were better than 0.9998 for the standard curve concentration between 0.1～2 mg/L; the recoveries were between 70.1%～99.1% for 0.1, 0.2, 1 mg/kg add level; the relatively standard deviations (RSDs) were between 3.0%～9.7% with a good degree of precision.

vegetable oil，O-amino benzoic diamide，GPC，HPLC

O657.7

：A

：1003-0174(2017)08-0118-05