張玉霞，袁小遠(yuǎn)，孟凱，李莉，亓麗紅，艾武，王友令

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南250100）

肉雞安卡拉病與法氏囊混合感染的診治*

張玉霞，袁小遠(yuǎn)，孟凱，李莉，亓麗紅，艾武，王友令**

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南250100）

2015年以來(lái)在北方肉雞中流行一種以心包積液、肝臟腫大出血為特征的疾病，俗稱安卡拉病，也稱心包積液綜合征，主要感染1～3周齡商品白羽肉雞、817肉雞、麻雞，青年雞和產(chǎn)蛋雞感染后癥狀較輕，給當(dāng)前家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大危害。研究認(rèn)為該病毒與包涵體肝炎同屬于Ⅰ亞群禽腺病毒，目前認(rèn)為血清2型、3型、4型、5型、8型等血清型是雞包涵體肝炎的主要病原體，而該病毒為血清4型[1-3]。有報(bào)道稱，傳染性法氏囊病毒和雞貧血因子病毒可強(qiáng)化腺病毒的毒力，腺病毒具有作為繼發(fā)病原的作用[4]。

2016年7月，山東聊城某817肉雞場(chǎng)約5000只3周齡雞突然發(fā)病死亡，7d左右死亡率達(dá)到70%。我們對(duì)發(fā)病雞群的臨床癥狀、剖檢變化及飼料成分等進(jìn)行了詳細(xì)的分析研究，結(jié)合分子生物學(xué)診斷最終確診為雞腺病毒Ⅰ群血清4型與傳染性法氏囊病毒混合感染。

1 發(fā)病概況及剖檢變化

發(fā)病初期，有些雞出現(xiàn)精神沉郁、縮脖、畏冷、聚堆、嗜睡，羽毛臟亂無(wú)光澤，見圖1。食欲降低，雞群普遍腹瀉，拉黃白色稀便等。發(fā)病雞常在24～48h內(nèi)死亡，病程約7d，死亡率可達(dá)70%。

剖檢可見典型的肝臟腫脹、發(fā)黃、質(zhì)脆，有壞死灶。心包內(nèi)積有明顯的心包積水，顏色淡黃色澄清，見圖2，有的呈現(xiàn)膠凍樣癥狀，部分雞只腺胃與肌胃交界處出血，法氏囊黃色膠凍樣水腫，有粘液，腿肌與胸肌出血。根據(jù)以上發(fā)病情況及剖檢變化，懷疑為腺病毒與傳染性法氏囊病毒混合感染。

圖2 心包積液明顯積水

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 病毒分離按常規(guī)方法[5]，以無(wú)菌操作取具有典型癥狀的病雞的肝臟、法氏囊研磨成勻漿，用無(wú)菌生理鹽水按1：3稀釋，反復(fù)凍融2～3次后以3000r/min離心10min，取上清液2ml，用45μm注射濾器過濾，按2000U/ml各加入青霉素、鏈霉素置4℃冰箱過夜作用。無(wú)菌檢查合格后，分別用法氏囊單因子陽(yáng)性血清、雞腺病毒Ⅰ群血清4型單因子陽(yáng)性血清與各1ml上清液在38℃下中和1h，尿囊腔接種10日齡SPF雞胚、卵黃囊接種7日齡SPF雞胚各5枚，0.1ml/枚，于37℃溫箱培養(yǎng)。每天照胚4次，觀察并記錄死亡情況，收獲死亡雞胚尿囊液做進(jìn)一步鑒定（表1）。

表1 病毒分離雞胚接種結(jié)果

結(jié)果顯示，分別與兩種不同單因子陽(yáng)性血清中和過的病毒組雞胚均出現(xiàn)不同程度的胚體病變和死亡。雞腺病毒Ⅰ群血清4型單因子血清中和組死胚較早，于56～96h之間全部死亡，胚體發(fā)育停滯，水腫出血，絨膜尿囊膜水腫出血，較符合法氏囊病毒感染雞胚后產(chǎn)生的病變。法氏囊單因子血清中和組雞胚死亡出現(xiàn)較晚，雞胚可見發(fā)育不良，普遍較正常日齡矮小，體表潮紅，雞胚肝臟腫大，可見黃白色壞死，與腺病毒接種癥狀較一致。

2.2 分子生物學(xué)診斷針對(duì)高度疑似腺病毒與法氏囊病毒混合感染的情況，根據(jù)參考文獻(xiàn)[6-7]和GenBank發(fā)表的腺病毒序列和法氏囊病毒序列，設(shè)計(jì)了兩種病毒的特異性引物，分別為腺病毒p1：5'-TTCGACCCCATGACGCGCCAGG-3';P2: 5'-GCGAAAGGCGTACGGAAGTAAGC-3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增503bp大小的片段。法氏囊病毒A：RP1 5'-AGAGGGTGCCACGCTATT-3',RP3 5'-TCCAGCCACATGAACAC-3'，用于RT-CR法擴(kuò)增453bp長(zhǎng)度的特定基因片段；以常規(guī)方法試劑盒提取病毒DNA，建立擴(kuò)增兩種病毒的PCR和RT-PCR方法，最終獲得了兩種病毒預(yù)期的目的片段，因此該病例確診為腺病毒與法氏囊病毒混合感染。

3 防治措施

3.1 傳染性法氏囊病毒主要侵害雞的中樞免疫器官法氏囊，傳播迅速、發(fā)病率及死亡率均較高，病程短，病毒抵抗能力強(qiáng)，能在雞舍內(nèi)存活100d以上，對(duì)氯仿、乙醚、胰蛋白酶不敏感，耐紫外線。目前已知有兩個(gè)血清型，即1型和2型。兩型病毒抗原相關(guān)性小于10%，相互交叉保護(hù)作用低。對(duì)雞有致病力的主要為1型。接種雞胚一般在3～7d死亡，病變以發(fā)育停滯、水腫出血為主。本病的根本措施在于環(huán)境消毒，加強(qiáng)衛(wèi)生管理，防范野毒感染，并根據(jù)本病的流行特點(diǎn)和管理?xiàng)l件，選擇最佳時(shí)機(jī)進(jìn)行免疫。一旦發(fā)生本病，采用高免卵黃抗體或血清進(jìn)行緊急治療，效果比較明顯。

3.2 研究認(rèn)為腺病毒在全世界家禽和野禽體內(nèi)廣泛存在，癥狀一般比較輕微或不表現(xiàn)感染癥狀，但出現(xiàn)并發(fā)感染時(shí)，該病毒可成為條件性病原[8]，因此要加強(qiáng)管理，減少其他疾病感染等誘因出現(xiàn)，1群禽腺病毒包括5個(gè)種12個(gè)血清型，其中心包積水-肝炎綜合征一般由血清4型病毒導(dǎo)致。近年來(lái)在中國(guó)大陸地區(qū)發(fā)病報(bào)道有逐漸增加趨勢(shì)，應(yīng)引起高度重視。

3.3 由于傳染性貧血因子與傳染性法氏囊病毒會(huì)增強(qiáng)腺病毒的致病性，因此應(yīng)控制或清除這兩種病毒在雞場(chǎng)的混合感染。腺病毒垂直傳播能力強(qiáng)，在引種過程中，要避免從疫區(qū)引進(jìn)種蛋和雛雞，并加強(qiáng)檢疫和防疫。另外也要防范水平傳播的可能性，雞場(chǎng)要重視養(yǎng)殖場(chǎng)的生物安全，養(yǎng)殖者必須做好隔離消毒工作，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少忽冷忽熱、斷喙、突然換料等可控的應(yīng)激因素。選用有效消毒藥搞好環(huán)境衛(wèi)生的消毒，同時(shí)減少各種應(yīng)激因素，使雞群在良好的飼養(yǎng)條件下處于最佳的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)狀態(tài)，盡量降低損失，才能增加經(jīng)濟(jì)效益。在疫病流行嚴(yán)重的地區(qū)，采用本場(chǎng)發(fā)病雞的肝臟制備自家苗加強(qiáng)免疫具有較好的防控效果。

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[3]張玉霞,袁小遠(yuǎn),王友令.雞腺病毒Ⅰ群血清4型的分離鑒定與防治[J].家禽科學(xué),2016(10）:29-30.

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華南生物禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)獲批

2017年8月14日，由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司(以下簡(jiǎn)稱“華南生物”)共同研發(fā)的禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)通過農(nóng)業(yè)部獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)的審批，喜獲得農(nóng)業(yè)部核發(fā)的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)——獸藥生字190912293；商品名禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”適用于水禽和家禽，是針對(duì)多分支的H5亞型禽流感的二價(jià)滅活疫苗，于2017年3月獲得農(nóng)業(yè)部新獸藥注冊(cè)證書[(2017)新獸藥證字10號(hào)]。該產(chǎn)品選用D7株和rD8株作為疫苗毒株，其中D7株是華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廖明教授團(tuán)隊(duì)于2007年廣東發(fā)病鴨群分離，為H5和H9天然重組而產(chǎn)生的天然野毒株，對(duì)不同時(shí)期的Clade2.3.2均有良好的保護(hù)力，對(duì)水禽保護(hù)效果良好；rD8株為重組病毒，是以D7株為骨架，選用目前流行的H5N1亞型禽流感病毒CG1株(Clade 2.3.4.4)作為HA基因供體利用反向遺傳技術(shù)獲得，為全禽源禽流感病毒，具有高效的雞胚增殖能力，以及良好的家禽免疫良性。針對(duì)目前國(guó)內(nèi)流行的Clade 2.3.4.4和Clade 2.3.2.1分支的H5亞型禽流感病毒，產(chǎn)品的抗原性可以實(shí)現(xiàn)全覆蓋，具有良好的交叉保護(hù)作用，對(duì)雞和水禽均有良好的安全性和免疫效力。經(jīng)過多次臨床試驗(yàn)證明，禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)可有效預(yù)防家禽感染H5亞型禽流感。

禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”具備全禽源通用、針對(duì)性更強(qiáng)、免疫原性好、抗體水平高、一針免疫廣譜保護(hù)的五大特點(diǎn)及其良好的臨床試驗(yàn)效果，并且結(jié)合多項(xiàng)工藝的優(yōu)化及生產(chǎn)質(zhì)量的嚴(yán)格把控，使該產(chǎn)品更具有安全可靠、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì)。

“禽盾”批準(zhǔn)文號(hào)的獲批，完善了公司禽流感疫苗產(chǎn)品結(jié)構(gòu)，也將會(huì)給廣大養(yǎng)殖企業(yè)帶來(lái)新活力與新希望。華南生物公司也將始終秉承著“至臻至忱，至新至用”的經(jīng)營(yíng)理念，嚴(yán)把產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)，力爭(zhēng)不斷提供優(yōu)質(zhì)高效的禽流感疫苗，為養(yǎng)殖戶提供更多優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)，為動(dòng)物健康保駕護(hù)航。

S858.31

C

1673-1085（2017）09-0029-03

2017-08-19

1.山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016GNC110009）；2.山東省2017年度農(nóng)業(yè)重大應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目“肉雞呼吸道疾病的監(jiān)測(cè)和防控技術(shù)集成與示范”；3.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程“主要畜禽疫病監(jiān)測(cè)和預(yù)警”，項(xiàng)目編號(hào)：CXGC2016A10。

**通訊作者：王友令，博士，副研究員，主要從事家禽疫病及分子流行病學(xué)的研究。Email：Wangyouling71@163.com。