伊萬(wàn)偉 李方華 張永久 崔興林

（酒泉職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程系，甘肅酒泉 735000）

降低仙客來(lái)組培苗成本的研究初報(bào)

伊萬(wàn)偉 李方華 張永久 崔興林

（酒泉職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程系，甘肅酒泉 735000）

以仙客來(lái)種子無(wú)菌培養(yǎng)獲得的葉片為外植體，研究了培養(yǎng)基成分的廉價(jià)替代、培養(yǎng)基成分含量的降低對(duì)仙客來(lái)組織培養(yǎng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，用食用白砂糖替代分析純蔗糖，用自來(lái)水替代蒸餾水，培養(yǎng)基大量元素含量降低1/2，其培養(yǎng)效果和常規(guī)MS培養(yǎng)基效果基本相似，而成本可大幅降低。

仙客來(lái)；組織培養(yǎng)；成本降低

仙客來(lái)（Cyclamen persicum）是報(bào)春花科仙客來(lái)屬半耐寒多年生球莖類草本植物，花色艷麗，花期長(zhǎng)（約6個(gè)月），深受人們喜愛(ài)，具有較高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。目前，用植物組織培養(yǎng)的方法對(duì)仙客來(lái)進(jìn)行繁殖能夠保持其優(yōu)良性狀并具有較高繁殖率［1］，但是，在仙客來(lái)組培快繁過(guò)程中，芽的誘導(dǎo)率低、污染率高和培養(yǎng)基成本大等原因，造成組培成本較高，嚴(yán)重制約了仙客來(lái)組培苗工廠化生產(chǎn)的發(fā)展。本試驗(yàn)從降低仙客來(lái)組織培養(yǎng)成本入手，分析培養(yǎng)基成分的廉價(jià)替代和成分含量的降低對(duì)仙客來(lái)繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的影響，以期降低仙客來(lái)組培苗的成本，為仙客來(lái)組培苗工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

仙客來(lái)種子（蘭州昶榮園林有限公司提供）用流水沖洗20min，然后在35～40℃無(wú)菌水中浸泡12h，取出后用70%酒精浸泡1min，再用無(wú)菌水沖洗3次，然后用0.1%升汞溶液浸泡并震蕩8min，最后用無(wú)菌水沖洗6次。將處理過(guò)的種子用無(wú)菌濾紙吸干水分，接入MS培養(yǎng)基（3%蔗糖、0.5%瓊脂，pH值5.6～5.8）上，每瓶培養(yǎng)基接種3粒種子。培養(yǎng)溫度15～20℃，經(jīng)過(guò)45d培養(yǎng)后，90%種子長(zhǎng)出白色小根，70d后，植株長(zhǎng)大，展開(kāi)2片葉片，獲得無(wú)菌苗。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基成分的廉價(jià)替代

組織培養(yǎng)過(guò)程中，分別用食用白糖和自來(lái)水代替分析純蔗糖和蒸餾水來(lái)配制繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，以常規(guī)配制的MS培養(yǎng)基為對(duì)照，研究廉價(jià)替代后的培養(yǎng)基對(duì)仙客來(lái)繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的影響。

1.2.2 培養(yǎng)基成分量的降低

在繼代培養(yǎng)階段，用1/2MS、1/3MS培養(yǎng)基［2］進(jìn)行仙客來(lái)的增殖培養(yǎng)，觀察增殖情況，分析培養(yǎng)基成分量的降低對(duì)增殖培養(yǎng)的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基成分的廉價(jià)替代

由表1可知，在仙客來(lái)繼代培養(yǎng)階段，用食用白砂糖代替分析純蔗糖，芽的增殖倍數(shù)為4.1倍，用自來(lái)水代替蒸餾水，芽的增殖倍數(shù)為4.4倍，而常規(guī)MS培養(yǎng)基則為4.6倍。由表2可知，在仙客來(lái)生根培養(yǎng)階段，用食用白砂糖代替分析純蔗糖，仙客來(lái)發(fā)根率為79.3%；用自來(lái)水代替蒸餾水，發(fā)根率為79.0%；常規(guī)MS培養(yǎng)基發(fā)根率為80.0%。試驗(yàn)結(jié)果表明，在仙客來(lái)繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)階段，用食用白砂糖代替分析純蔗糖和用自來(lái)水代替蒸餾水，培養(yǎng)效果基本相似。

表1 培養(yǎng)基成分廉價(jià)替代對(duì)仙客來(lái)繼代培養(yǎng)的影響

表2 培養(yǎng)基成分廉價(jià)替代對(duì)仙客來(lái)生根培養(yǎng)的影響

2.2 培養(yǎng)基成分量的降低

由表3可知，在仙客來(lái)繼代培養(yǎng)過(guò)程中，1/2MS培養(yǎng)基芽的增殖倍數(shù)為4.4，且芽長(zhǎng)勢(shì)良好，1/3MS培養(yǎng)基芽的增殖倍數(shù)為2.5，MS培養(yǎng)基芽的增殖倍數(shù)為4.6。試驗(yàn)結(jié)果表明，在培養(yǎng)基大量元素降低情況下，1/2MS培養(yǎng)基的繼代培養(yǎng)效果和MS培養(yǎng)基基本相同，而1/3MS培養(yǎng)基不論芽增殖倍數(shù)還是其生長(zhǎng)情況都有所下降。

表3 培養(yǎng)基成分量的降低對(duì)仙客來(lái)繼代培養(yǎng)的影響

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基成分的改變和含量的降低可有效降低仙客來(lái)組織培養(yǎng)的成本。用食用白砂糖替代分析純蔗糖，用自來(lái)水替代蒸餾水，將培養(yǎng)基大量元素含量降低1/2，仙客來(lái)培養(yǎng)的效果和常規(guī)MS培養(yǎng)基效果基本相似，而成本可大幅降低。然而，造成仙客來(lái)組培成本高的原因還有高污染、低誘導(dǎo)率等，因此，系統(tǒng)的降低組培成本需要在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探尋可能的措施或方法。

［1］余會(huì)寧.仙客來(lái)的離體無(wú)性試管繁殖研究［J］.氨基酸和生物資源，2001，23（3）：21～23。

［2］龔一富.植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［M］.北京：科學(xué)出版社，2011∶15～36.