王悅

摘 要：目的：應(yīng)用氣相色譜儀并建立氣相色譜法對(duì)頭孢他啶中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定。方法：應(yīng)用頂空法使溶劑自動(dòng)進(jìn)樣，將頭孢他啶中二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯溶劑通過石英毛細(xì)柱進(jìn)行分離，分離程度較好，使用外標(biāo)法測(cè)定。結(jié)果：頭孢他啶中二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯溶劑平均回收率在99%～103%之間，有機(jī)溶劑變異系數(shù)在2.7%左右。結(jié)論：頂空氣相色譜法對(duì)頭孢他啶中所殘留溶劑二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯測(cè)定數(shù)值準(zhǔn)確，有較好重現(xiàn)性，操作方式簡(jiǎn)便，能夠滿足頭孢他啶殘留溶劑檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：氣相色譜儀；頭孢他啶；殘留溶劑

頭孢他啶是頭孢菌素類抗生素中第三代產(chǎn)品，有較好抗菌消炎作用，是臨床治療中應(yīng)用較為普遍的抗生類藥物之一。在頭孢他啶藥品制備過程中，常使用三乙胺、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑以提高藥品溶解度，存在一定殘留溶劑。但有機(jī)溶劑對(duì)人體有較大危害性，其在頭孢他啶中殘留量影響人們身體健康并阻礙藥效充分發(fā)揮，國(guó)際相關(guān)藥品監(jiān)管規(guī)定，頭孢他啶中有機(jī)溶劑殘留量不能高于0.1%。為此要對(duì)藥品生產(chǎn)中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定，以促進(jìn)頭孢他啶藥品生產(chǎn)質(zhì)量提升、國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力提高。應(yīng)用氣相色譜法對(duì)藥品生產(chǎn)原料中殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確率高、定量精準(zhǔn)、檢測(cè)效率高等優(yōu)點(diǎn)，本次研究中將使用頂空自動(dòng)進(jìn)樣方式并利用外標(biāo)法對(duì)頭孢他啶中有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行測(cè)定。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑。Agilent7890型氣相色譜儀，附火焰離子化檢測(cè)器（FID）。OPGU-2000型高純氫氣發(fā)生氣，GN-500A高純氮?dú)獍l(fā)生器，GA5000A型低噪音空氣泵（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司）。丙酮（色譜純）上?；瘜W(xué)試劑研究所。二氯甲烷（色譜純）上海化學(xué)試劑研究所。乙酸乙酯（色譜純）上?；瘜W(xué)試劑研究所。

1.2 色譜條件。氣相色譜條件：色譜柱：DB-1（30m×0.53mm×5μm）毛細(xì)管柱；柱溫：80℃保持7.8min；進(jìn)樣口溫度：150℃；FID檢測(cè)器溫度250℃；分流比10：1；壓力采用程序升壓：23.7Kp保持4.5min，再以29.4Kp/min的速率升到80Kp，保持1min；頂空平衡溫度80℃，平衡時(shí)間30min。

1.3 樣品測(cè)定

1.3.1 對(duì)照溶液：精密稱定二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯適量，用純化水溶解并稀釋成每1ml水中含丙酮約200μg、含二氯甲烷約100μg、含乙酸乙酯約200μg的溶液。精密量取5.0ml置頂空瓶中，密封瓶口，作為對(duì)照品溶液。

1.3.2 供試品溶液：取頭孢他啶約0.1g，精密稱定，置于頂空瓶中，加入0.01g碳酸鈉，加入5ml純化水使溶解，密封瓶口，作為供試品溶液。

1.3.3 測(cè)定：按照上述氣相色譜條件，進(jìn)對(duì)照品溶液和供試品溶液各1ml，按外標(biāo)法計(jì)算各個(gè)溶劑的含量。

2 結(jié)果

2.1 為了確定最佳的平衡條件，在選定頂空平衡溫度80℃時(shí)，對(duì)平衡時(shí)間對(duì)峰面積的影響作了如下試驗(yàn)：其中保留時(shí)間，2.27為丙酮，2.72為二氯甲烷，4.53為乙酸乙酯其中保留時(shí)間2.27為丙酮，2.72為二氯甲烷，4.53為乙酸乙酯制備含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三種組分的溶液，使每1ml溶液中含含丙酮約200μg、含二氯甲烷約100μg、含乙酸乙酯約200μg。精密量取5ml置于20ml頂空瓶中，密封瓶口，分別平衡10min、13min、15min、17min、20min、25min、28min、30min、35min、40min后進(jìn)樣，以平衡時(shí)間與峰面積做圖。在20min后基本達(dá)到平衡，選定30min作為平衡時(shí)間。另外，對(duì)平衡溫度和頭孢他啶助溶劑作了選擇試驗(yàn)，平衡溫度80℃，加入0.01g碳酸鈉助溶時(shí)效果較好。

2.2 線性范圍的測(cè)定：分別制備含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三種組分7個(gè)濃度水平的溶液進(jìn)行測(cè)定，使丙酮在（24～480μg/ml）；二氯甲烷在（13～263.0μg/ml）、乙酸乙酯在（20～408μg/ml）濃度范圍內(nèi)。以測(cè)得的信號(hào)作為被測(cè)組分的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。

2.3 精密度的測(cè)定：分別制備含丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯三種組分三個(gè)濃度水平的溶液，每個(gè)濃度水平測(cè)定6次，按峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。測(cè)定結(jié)果列于表2。

2.4 回收率的測(cè)定：在已知?dú)埩羧軇舛鹊臉悠分?，分別加入高、中、低已知濃度的丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯，進(jìn)行六次重復(fù)測(cè)定。

3 討論

醫(yī)療技術(shù)進(jìn)步促使藥品更新?lián)Q代頻繁，藥品生產(chǎn)水平提高、效用逐漸突出，為人們身體健康提供保障。為了保證藥品質(zhì)量，人們開始提高藥品檢測(cè)技術(shù)。頭孢他啶是臨床治療中常用抗生素，具有較好抗菌消炎作用，是頭孢菌素類藥物研究中第三代產(chǎn)品，由于頭孢他啶親水性較差，當(dāng)其處于水中時(shí)溶解度較低，為提高溶解度，在生產(chǎn)過程中應(yīng)用丙酮、三氟氟利昂、甲醛等作為有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑屬于有害于人體的雜質(zhì)，因此需對(duì)其進(jìn)行處理，并檢測(cè)其殘留量，確保藥品符合生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，避免對(duì)人體產(chǎn)生危害。

本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用氣相色譜儀用以測(cè)定頭孢他啶中有機(jī)溶劑殘留量。將頭孢他啶藥品樣本放入二甲基甲酰胺以提高其溶解度，此種方式能夠促使實(shí)驗(yàn)靈敏度提升。二甲基甲酰胺沸點(diǎn)高、穩(wěn)定性好，在本次實(shí)驗(yàn)中放置20min時(shí)間內(nèi)對(duì)分離檢測(cè)實(shí)驗(yàn)無影響，因此以二甲基甲酰胺為溶劑有利于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。根據(jù)峰面積比用比較法計(jì)算各樣品中有機(jī)溶劑殘留量。樣品中僅檢出殘留丙酮及大量的吡啶，三批樣品中丙酮含量分別為0.0449%、0.0539%、0.0548%。三氟氟里昂、甲醇、二氯甲烷、三乙胺均未檢出，說明樣品中這4種有機(jī)溶劑殘留均低于各自的最低檢測(cè)濃度。

頭孢他啶生產(chǎn)過程中以吡啶為主要生產(chǎn)原料，同時(shí)吡啶又可從頭孢他啶降解后物質(zhì)中獲得，吡啶常用HPLC法進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，在本次實(shí)驗(yàn)中，吡啶含量極高，幾乎達(dá)到10%，證明當(dāng)頭孢他啶處于20℃氣化條件下時(shí)，已全部分解為吡啶或其他物質(zhì)小分子，但當(dāng)15min后，吡啶峰值開始下降，對(duì)其余有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定無干擾。氣相色譜法無法應(yīng)用于吡啶測(cè)量實(shí)驗(yàn)，通常使用高效液相法進(jìn)行測(cè)量。

頭孢他啶有機(jī)溶劑殘留量數(shù)據(jù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)受多種因素影響，色柱柱溫不同、載氣流量高低以及檢測(cè)器溫度都會(huì)影響樣品中殘留溶劑的測(cè)定靈敏程度、檢測(cè)效率與分析時(shí)間長(zhǎng)短。因此在檢測(cè)過程中需嚴(yán)格按照操作步驟對(duì)色譜條件環(huán)境進(jìn)行選擇。需要保證容器清潔、設(shè)備運(yùn)行良好、樣品中無其他雜質(zhì)。

分別提取溶液中丙酮、乙酸乙酯以及二氯甲烷，應(yīng)用毛細(xì)柱對(duì)三種溶劑進(jìn)行分離，找出分離效果最好的毛細(xì)柱類型；測(cè)定三種溶劑在相同含量、不同放置時(shí)間下對(duì)溶液的影響以及在相同放置時(shí)間、不同含量條件下對(duì)溶液的影響，從而實(shí)現(xiàn)溶液殘留溶劑檢測(cè)。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)應(yīng)用毛細(xì)柱DB-1時(shí)，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷分離效果較好，頂空自動(dòng)進(jìn)樣方式外標(biāo)法應(yīng)用能夠提供高水平重現(xiàn)，對(duì)制劑含量定量精準(zhǔn)，此種方式操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)效率較高，能夠?qū)崿F(xiàn)頭孢他啶殘留溶劑檢測(cè)的自動(dòng)化。非常符合藥品中殘留溶劑的檢測(cè)要求，有利于藥品質(zhì)量的控制。此方法可以應(yīng)用于企業(yè)的頂空氣相色譜法測(cè)定頭孢他啶中的殘留溶劑丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]金米聰，王立，符展明.毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定雞蛋中的膽固醇和維生素E[J].色譜，2001，19（5）.

[2]張瑩，黃志強(qiáng)，李擁軍.氣相色譜法測(cè)定茶葉中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J].色譜，2001，19（3）.

[3]熊芳，戴華，黃志強(qiáng).氣相色譜法測(cè)定葡萄中烯唑醇農(nóng)藥的殘留量[J].色譜，2002，20（4）.

[4]王福軍，雷軍，董寶琴等.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定水中碘化物[J].色譜，2005，23（3）.endprint