胡夢雙，李巨

（1. 錦州醫(yī)科大學中國人民解放軍第202醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地，沈陽 110003；2. 中國人民解放軍第202醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110003）

鹽負荷和堿負荷對孕晚期大鼠離體子宮收縮力和催產(chǎn)素受體水平的影響

胡夢雙1，李巨2

（1. 錦州醫(yī)科大學中國人民解放軍第202醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地，沈陽 110003；2. 中國人民解放軍第202醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110003）

目的探討鹽負荷和堿負荷對孕晚期大鼠離體子宮收縮力和催產(chǎn)素受體（OXTR）水平的影響。方法將42只孕晚期大鼠隨機均分為3組，A組飲用自來水，B組飲用2% NaCl溶液，C組飲用5% NaHCO3溶液；分別于0、12、24、36、48、60和72 h時從3組中各隨機選取2只大鼠麻醉，先剖腹采腹主動脈血行動脈血氣分析，再將子宮縱向剖取數(shù)個均等肌條，檢測其肌張力，最后采用ELISA法測定肌條中OXTR的含量。結果3組在0 h時血Na+、HCO3-濃度差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；在其余各時間點，B組和C組血Na+濃度均顯著高于A組（P ＜ 0.05），C組血HCO3-濃度顯著高于A組和B組（P ＜ 0.05）。3組在0 h時子宮肌條收縮的振幅和頻率差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；B組在其余各時間點的振幅和頻率（除72 h振幅外）均顯著高于A組（P ＜ 0.05）；C組在12、24和60 h時振幅顯著高于A組（P ＜ 0.05），在48、60和72 h時頻率顯著高于A組（P ＜ 0.05）。3組0 h時OXTR含量差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）；其余各時間點，B組OXTR含量顯著高于A組（P ＜ 0.05）；C組在12、24、60和72 h時OXTR含量顯著高于A組（P ＜ 0.05）。結論鹽負荷可使子宮收縮振幅、頻率及子宮表面OXTR表達顯著增強；堿負荷60 h時可使子宮收縮振幅、頻率及OXTR表達三者均顯著增強。

鹽負荷； 堿負荷； 子宮； 催產(chǎn)素受體； 肌張力； ELISA

Abstract ObjectiveTo investigate changes in uterine contractility and oxytocin receptor （OXTR） level after salt and alkali load in rats during late pregnancy.MethodsA total of 42 pregnant rats were randomly divided into groups given tap water （group A），2% NaCl solution （group B），or 5% NaHCO3solution （group C）. Two rats were taken from each of the three groups at 0，12，24，36，48，60，and 72 h，respectively，for arterial blood gas analysis and preparation of uterine muscle strips for muscle tension measurement. The OXTR levels were measured using ELISA.ResultsThere were no significant differences in serum sodium and bicarbonate ion concentrations，muscle tension，or OXTR levels among the groups at 0 h （P ＞ 0.05）. At other time points，the sodium ion concentration in group B and group C was significantly higher than in group A （P ＜ 0.05），and bicarbonate ion concentration in group C was higher than in group A and group B （P ＜0.05）. Muscle tension （including amplitude and frequency） in group B was significantly greater than in group A （except at 72 h） （P ＜ 0.05）.The amplitude in group C was higher than in group A at 12，24，and 60 h （P ＜ 0.05），while the frequency was higher than in group A at 48，60，and 72 h （P ＜ 0.05）. The OXTR level in group B was significantly higher than in group A （P ＜ 0.05），and was higher in group C than in group A at 12，24，60，and 72 h （P ＜ 0.05）.ConclusionSalt and alkali loading can increase uterine contractility and OXTR levels at 60 h.

Keywordssalt load；alkali load；uterus；oxytocin recepter；muscle tension；ELISA

催產(chǎn)素（oxytocin，OXT）是治療產(chǎn)后出血的一線 用藥，通過與子宮平滑肌細胞上的催產(chǎn)素受體（oxytocin recepter，OXTR）結合來增強子宮收縮。OXTR屬于G蛋白耦聯(lián)受體家族［1］，與其他G蛋白耦聯(lián)受體一樣，OXTR會由于同源的反復刺激而導致快速分子脫敏［2］。臨床上，越來越多的學者發(fā)現(xiàn)應用OXT治療產(chǎn)后出血并不都能取得良好療效，并且OXT在使用一段時間和（或）一定劑量后療效有所降低，因此有些產(chǎn)婦不得不采取手術治療，甚至切除子宮。為了解決這個問題，尋找能夠增強子宮收縮的方法尤為重要。本研究通過分別給予孕晚期大鼠一定濃度的鹽負荷和堿負荷，觀察不同時間大鼠血Na+、HCO3-濃度變化和離體子宮肌條肌張力大小及其表面OXTR表達情況，探討鹽負荷或堿負荷是否可以增加子宮平滑肌的收縮力，以及是否可以增加子宮平滑肌細胞表面OXTR的表達。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

42只健康孕17 d的SD大鼠，體質量350～400 g，由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供。確保飼養(yǎng)期間溫度、濕度、光照及消毒等條件適宜，所有大鼠均給予專用顆粒飼料飼養(yǎng)，供水按照實驗分組要求配制。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組：將42只孕17 d的SD大鼠隨機平均分為3組，每組14只。A組，空白對照組；B組，鹽負荷組；C組，堿負荷組。3組大鼠依次給予自由飲用自來水、2% NaCl溶液和5% NaHCO3溶液，于飲用水0、12、24、36、48、60和72 h時分別從3組中隨機選取2只大鼠進行實驗。

1.2.2 動脈血氣分析：將各組各時間點取出的大鼠在10%水合氯醛下麻醉，縱向剖開腹部，用一次性采血針采取腹主動脈血，每只大鼠取血2管，做好標記后立即送檢行動脈血氣分析。

1.2.3 肌張力測定：采血后，用止血鉗夾閉血管，充分暴露“Y”字型子宮，將子宮頸縱向切開至一側子宮底部，輕輕剔出子宮內的胎鼠，將子宮鋪平，均等切取子宮肌條，每只大鼠子宮取6個肌條，做好標記立即置于臺式液中，另一側方法相同；然后將取下的每個肌條兩端均用0號手術縫合線進行打結，將恒溫平滑肌槽（HW200S，成都泰盟）溫度調整為37℃，槽內加入足量臺式液，將每個打結好的子宮肌條分別置于恒溫平滑肌槽內，頂端和底端打結處與張力傳感器（BL-420S，成都泰盟）兩端連接，調節(jié)張力傳感器至2 g左右的重量，對所有肌條分別進行肌張力測定。

1.2.4 OXTR含量測定：肌張力測定后，用總蛋白提取試劑盒（南京諾唯贊生物科技有限公司）提取肌條中的總蛋白，然后將提取的蛋白分裝放入-80 ℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?，防止蛋白反復凍融影響結果；最后用BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測分裝好的總蛋白中OXTR含量。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 動脈血氣分析

3組基礎血Na+、HCO3-濃度（即負荷0 h時）的差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。其他各時間點，B組和C組血Na+濃度均高于A組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），B、C組間血Na+濃度無統(tǒng)計學差異（P ＞0.05）；C組血HCO3-濃度分別高于A組、B組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），A、B組間血HCO3-濃度無統(tǒng)計學差異（P ＞ 0.05）。見表1。

2.2 肌張力測定結果

3組肌條收縮的基礎振幅和頻率（即負荷0 h時）差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。除72 h外，其他各時間點B組振幅均高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），B組頻率在各時間點均高于A組，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；C組在12、24和60 h時振幅高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），C組在48、60和72 h時頻率高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；B組在12 h、24 h時振幅低于C組（P ＜ 0.05），而頻率高于C組（P ＜ 0.05），B組在36和48 h時振幅高于C組（P ＜ 0.05），而48 h時頻率低于C組（P ＜ 0.05），36 h時B、C組頻率無統(tǒng)計學差異（P ＞ 0.05）。見表2。

2.3 OXTR含量檢測結果

3組肌條中基礎OXTR含量（即負荷0 h時）差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05）。在其他各時間點，B組OXTR含量高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；C組OXTR含量在12、24、60和72 h時高于A組，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）。B、C組比較，由表2可知，在各個時間點均無振幅和頻率一致性增高或降低，故比較肌條中OXTR的含量無意義。見表3。

表1 各組各時間點動脈血氣分析結果（mmol/L）Tab.1 Arterial blood gas analysis in the three groups at each time point （mmol/L）

表2 各組各時間點肌條收縮振幅和頻率的比較Tab.2 Muscle contraction amplitude and frequency in the three groups at each time point

表3 各組各時間點肌條中OXTR含量的比較（ng/mL）Tab.3 The OXTR content in muscle strips in the three groups at each time point （ng/mL）

3 討論

國內外已有很多研究發(fā)現(xiàn)OXTR存在脫敏現(xiàn)象，如BALKI等［3］將孕鼠子宮肌層片段預先暴露于OXT中，與預先暴露于生理鹽水中的對照組比較，發(fā)現(xiàn)其子宮肌層的收縮振幅降低。YAMAGUCHIA等［4］也發(fā)現(xiàn)高劑量長時間使用OXT可能會導致子宮肌層OXTR脫敏，從而導致OXT臨床功效降低。

由于子宮收縮的調節(jié)與早產(chǎn)、產(chǎn)程進展及產(chǎn)后出血等息息相關，故在臨床上有效控制子宮收縮尤為重要。有研究［5］報道慢性鹽負荷可以使非孕大鼠下丘腦視上核中OXT hnRNA表達上調，并且使視上核中分泌至外周的OXT增多。JOHNSON等［6］報道通過使用新一代RNA測序方法檢測在正常滲透壓和鹽負荷條件下大鼠視上核中的基因表達，結果顯示在慢性鹽負荷期間，視上核中OXT和精氨酸加壓素基因表達幾乎翻倍，并且通過獲得的實時定量PCR數(shù)據(jù)分析證實。

鹽負荷可使血漿滲透壓升高，刺激下丘腦中滲透性神經(jīng)元即大細胞神經(jīng)元分泌OXT，OXT被轉運至外周，作用于子宮，與子宮肌細胞表面OXTR結合，使子宮收縮。本研究結果顯示，鹽負荷72 h內（除72 h振幅外）可使子宮收縮的振幅和頻率均顯著增加，而且可使子宮肌條OXTR表達上調。這與YUE等［5］研究結果一致，鹽負荷不僅可使下丘腦中OXT hnRNA表達上調，而且可使子宮肌層OXTR表達上調。另外，本研究結果顯示鹽負荷72 h時B組和A組的振幅差異無統(tǒng)計學意義，分析可能是因為實驗對象為孕晚期大鼠，負荷72 h時大鼠接近臨產(chǎn)，子宮過度伸張，導致鹽負荷組子宮振幅的增加與對照組無顯著差異。

有臨床研究［7］報道，產(chǎn)前靜滴一定濃度NaHCO3溶液的孕婦與未靜滴NaHCO3溶液的孕婦相比，產(chǎn)后出血發(fā)生率降低，分析可能是因為臨產(chǎn)時產(chǎn)婦生理疼痛增多、精神緊張等，加上臨產(chǎn)時產(chǎn)婦過度換氣，易出現(xiàn)呼吸性堿中毒和代謝性酸中毒，從而對子宮平滑肌的收縮產(chǎn)生干擾，而相關的動物實驗及其具體機制國內外尚未見報道。本研究對孕晚期大鼠施加堿負荷，結果顯示，在負荷12、24和60 h時，C組肌條收縮的振幅顯著高于A組；在負荷48、60和72 h時，C組肌條收縮頻率顯著高于A組；而C組和A組OXTR含量比較，除36 h外，其余各時間點差異均有統(tǒng)計學意義。綜合可知，除堿負荷36 h外，其余各時間點的振幅或頻率的增加尚與OXTR含量的增加一致，而在60 h時堿負荷組肌條收縮的振幅、頻率和OXTR含量均顯著增加。這也證實了謝秀敏等［7］的研究結果。

鹽負荷和堿負荷在一定程度上均可增強子宮收縮力和OXTR的表達，這不僅可為OXT用于治療產(chǎn)后出血中出現(xiàn)的脫敏現(xiàn)象提供新的思路，而且可為臨床上子宮收縮調節(jié)的研究提供一定的理論基礎。然而，一些具體的更深入的機制及如何權衡負荷量與負荷后產(chǎn)生的不良反應間的關系等有待進一步的研究。

［1］ KIMURA T，OGITA K，KUMASAWA K，et al. Molecular analysis of parturition via oxytocin receptor expression ［J］. Taiwan J Obstet Gynecol，2013，52（2）：165-170. DOI：10.1016/j.tjog.2013.04.004.

［2］ ZINGG HH，LAPORTE SA. The oxytocin receptor ［J］. Trends Endocrinol Metab，2003，14（5）：222-227.

［3］ BALKI M，ERIKSOUSSI M，KINGDOM J，et al. Oxytocin pretreatment attenuates oxytocin-induced contractions in human myometrium in vitro［J］. Anesthesiology，2013，119（3）：552-561. DOI：10.1097/ALN.0b013e318297d347.

［4］ YAMAGUCHI ET，SIAULYS MM，TORRES ML. Oxytocin in cesarean-sections.What’s new? ［J］. Braz J Anesthesiol，2016，66（4）：402-407. DOI：10.1016/j.bjane.2014.11.015.

［5］ YUE C，MUTSUGA N，SUGIMURA Y，et al. Differential kinetics of oxytocin and vasopressin heteronuclear RNA expression in the rat supraoptic nucleus in response to chronic salt loading in vivo［J］.J Neuroendocrinol，2008，20（2）：227-232. DOI：10.1111/j.1365-2826.2007.01640.x.

［6］ JOHNSON KR，HINDMARCH CC，SALINAS YD，et al. A RNA-Seq analysis of the rat supraoptic nucleus transcriptome：effects of salt loading on gene expression ［J］. PloS One，2015，10（4）：1-28.DOI：10.1371/journal.pone.0131892.

［7］ 謝秀敏，郭麗璇，陳曉敏. 葡萄糖酸鈣與碳酸氫鈉聯(lián)合應用防治自然分娩產(chǎn)后出血的臨床療效觀察［J］. 實用醫(yī)學雜志，2013，29（8）：1373-1374. DOI：10.3969/j.issn.1006-5725.2013.08.076.

（編輯 陳 姜）

Effects of Salt and Alkali Load on Isolated Uterine Contractility and Oxytocin Receptor Level in Rats During Late Pregnancy

HU Mengshuang1，LI Ju2

（1. Joint Graduate Training Base of No. 202 Hospital of PLA，Jinzhou Medical University，Shenyang 110003，China； 2. Department of Obstetrics and Gynecology，No. 202 Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

R714.46

A

0258-4646（2017）10-0891-04

http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20170927.1452.014.html

10.12007/j.issn.0258‐4646.2017.10.007

遼寧省科學技術計劃（2014225005）

胡夢雙（1991 -），女，碩士研究生.

李巨，E-mail：liju202@126.com

2017-06-07

網(wǎng)絡出版時間：2017-09-27 14:52