陳 燕 胡 浩 張詩軍 孫保國 楊宏志△

1.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院中醫(yī)科，廣東省肝臟疾病研究重點實驗室 (廣東 廣州， 510630) 2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科

四君子湯對原發(fā)性肝癌術(shù)后患者T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的影響及意義*

陳 燕1胡 浩2張詩軍2孫保國2楊宏志1△

1.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院中醫(yī)科，廣東省肝臟疾病研究重點實驗室 (廣東 廣州， 510630) 2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科

目的：觀察四君子湯對原發(fā)性肝癌術(shù)后患者T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的影響及意義。方法將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的128 例肝癌術(shù)后患者隨機分為治療組與對照組。治療組患者口服四君子湯，對照組患者不另服用藥物，觀察比較兩組患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率及生存率。流式細(xì)胞儀測定兩組患者第24個月外周血CD4+、CD8+和CD16+CD56+細(xì)胞水平，并進行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果治療組患者第1、3年腫瘤復(fù)發(fā)率均低于對照組，差異均有顯著性意義(P< 0.005)；治療組患者第1、3年生存率均高于對照組，差異均有顯著性意義(P< 0.001)；治療組患者CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞均高于對照組，差異均有顯著性意義(P<0.05)；治療組患者CD8+T細(xì)胞與對照組比較，差異無顯著性意義(P>0.05)。結(jié)論四君子湯提高肝癌術(shù)后患者生存率及降低腫瘤復(fù)發(fā)率的機制可能是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的免疫功能所致。

四君子湯；原發(fā)性肝癌；T淋巴細(xì)胞；NK細(xì)胞

AbstractObjective:To observe the efficacy on the T lymphocyte and NK cell after hepatocellular carcinoma operation treated with sijunzi decoction.Methods:One hundred and twenty eight cases after hepatocellular carcinoma operation and complying with the inclusive criteria were randomized into treatment group and control group. Therapeutic group was treated with sijunzi decoction; and the tumor recurrence and survival situation of two groups were analyzed; CD4+, CD8+and CD16+CD56+were detected with flow cytometry instrument at 24 months after operation.Results:The tumor recurrence rates of the treatment group at the first and the third year were lower than the control group (P<0.005); the survival rate of the treatment group at the first and the third year were higher than the control group (P<0.001); the rates of the CD4+T cell and NK cell were higher than the control group (P<0.05); the rates of the CD8+T cell were lower than the control group (P>0.05).Conclusion:The mechanism of Sijunzi decoction improving the survival rate and decreasing tumor recurrence rate of hepatocellular carcinoma patients with radical operation might be regulate T lymphocyte and NK cell immune function.

KeyWordsSijunzi decoction; Hepatocellular Carcinoma; T lymphocyte; NK cell

原發(fā)性肝癌(HCC)是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，在全球癌癥死亡率排名第3位[1]。目前HCC的主要治療方法為手術(shù)切除、肝臟移植、局部介入消融、化學(xué)治療、生物治療及分子靶向治療等[2]，但目前治療效果欠佳，腫瘤復(fù)發(fā)率高，死亡率極高，因此越來越多的醫(yī)家開始尋求肝癌的中醫(yī)藥治療方法。中醫(yī)理論認(rèn)為，肝癌是由于臟腑氣血虧虛，六淫邪毒乘虛入侵，進一步導(dǎo)致脾虛濕聚、痰凝血瘀、邪凝毒結(jié)，氣、血、濕、瘀、毒互結(jié)成為肝積，本病病位在肝，以機體氣血虧虛為本。著名中醫(yī)腫瘤專家于爾辛提出“肝癌之本是脾虛”的學(xué)術(shù)論點，確立扶正祛邪為其治療方法，強調(diào)扶正固本在肝癌治療過程中極為重要[3]。脾為后天之本，臨床發(fā)現(xiàn)中醫(yī)經(jīng)方四君子湯作為益氣健脾代表方，在改善肝癌患者術(shù)后生存質(zhì)量、延長生存期、降低復(fù)發(fā)率等方面具有獨特的優(yōu)勢，然而其分子機制尚未明確。我們從HCC術(shù)后患者外周血T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞變化的角度探討四君子湯對HCC患者術(shù)后的影響及作用機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 128例患者為2012年10月至2013年11月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽外科和中醫(yī)科門診及住院的肝癌根治術(shù)后患者，分為兩組，采用配對分組觀察。治療組68例，其中男52例，女16例，男:女 = 3.25:1，平均年齡(50.15±11.67)歲;對照組60例，其中男46例，女14例，男:女 = 3.29:1，平均年齡(52.58±10.83)歲。兩組患者在性別、年齡、病情等方面比較，差異均無顯著性意義(P>0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)[4]①行根治手術(shù)，且術(shù)后病理學(xué)診斷明確提示為HCC；②單個癌灶，腫瘤直徑≤5cm；或多個癌灶(≤4個)且每個腫瘤直徑≤3cm；③未經(jīng)過中藥治療和(或)術(shù)后7天即開始服用四君子湯治療兩年；④術(shù)后7天至2年未接受過免疫調(diào)節(jié)劑治療；⑤無合并免疫系統(tǒng)疾患，標(biāo)本采集前兩周內(nèi)無細(xì)菌和(或)其他病毒感染史；⑥所有患者均簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)[4]①圍手術(shù)期死于手術(shù)并發(fā)癥的患者；②淋巴細(xì)胞分類資料收集不全者；③未按醫(yī)囑進行正規(guī)治療者。

1.4 治療方法 兩組患者均行HCC根治手術(shù)，術(shù)后每3月復(fù)查B超(或CT、MRI、ECT)、甲胎蛋白(AFP)和肝功能等。若腫瘤復(fù)發(fā)，采用綜合手段治療，包括介入以及其他局部治療。治療組患者術(shù)后7天開始口服四君子湯煎劑(組成：生曬參20g，白術(shù)、茯苓各15g，甘草6g)，1劑/d，水煎取汁300ml，早晚分服，療程為兩年;對照組患者不另用藥物。

1.5 觀察指標(biāo)與方法 觀察兩組患者第1年、第3年腫瘤復(fù)發(fā)率與生存率；CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞水平。手術(shù)后第24個月取患者靜脈血2 ml，肝素抗凝，用熒光抗體標(biāo)記淋巴細(xì)胞，利用FACS Calibur 流式細(xì)胞儀測定外周血CD4+、CD8+和CD16+CD56+水平，終末期患者死亡前及時采取外周血標(biāo)本，比較兩組患者術(shù)后第24個月及死亡患者終末期的T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)。

1.6 復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的判定標(biāo)準(zhǔn)[5]①術(shù)后血清AFP再次升高，并超過400 ng /mL；②影像學(xué)檢查B 超、CT、磁共振成像(MRI) 、發(fā)射型計算機斷層攝影(ECT)等發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)病灶；③病理檢測診斷為HCC。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者腫瘤復(fù)發(fā)情況 見表1。

表1 兩組患者腫瘤復(fù)發(fā)情況比較 [n(%)]

與對照組比較，*P< 0.005

2.2 兩組患者生存情況分析 見表2，圖1 。

表2 兩組患者生存率比較 [n(%)]

與對照組比較，*P< 0.001

圖1 兩組患者1-3年生存圖

2.3 兩組患者外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞檢測結(jié)果 見表3 。

表3 兩組患者CD4+、CD8+和CD16+CD56+結(jié)果比較

與對照組比較，*P< 0.05

3 討論

脾虛與腫瘤的關(guān)系密切[6]。《衛(wèi)生寶鑒》曰:“凡人脾胃虛弱，飲食不節(jié)或生冷過度，不能克化，致積聚結(jié)塊。” 張仲景《金匱要略》曰“夫治未病者，見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實脾”。故在肝病的診治中應(yīng)重視健脾。肝癌之所以發(fā)病，其中脾虛為本，肝郁、氣滯、血瘀、濕熱和瘀毒為標(biāo)，乃本虛標(biāo)實之證，治病應(yīng)求本。四君子湯來源于宋代《太平惠民和劑局方》，由人參、白術(shù)、茯苓和炙甘草4 味中藥組成，本方不偏不盛，不燥不熱，具有健脾益氣補中的效果，是健脾扶正固本的代表方。

臨床研究發(fā)現(xiàn)四君子湯在肝癌的治療過程中應(yīng)用極其廣泛。陳榮等研究發(fā)現(xiàn)四君子湯合血府逐瘀湯化裁方能改善肝癌術(shù)后患者肝功能，可減少因肝功能損害而引起的術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，促進患者快速康復(fù)，早日出院[7]。閆巖發(fā)現(xiàn)四君子湯聯(lián)合化療治療肝癌等惡性腫瘤的臨床療效可靠，能夠提高患者生活質(zhì)量，減少化療并發(fā)癥[8]。趙新運研究發(fā)現(xiàn)四君子湯加味可減輕肝癌肝動脈化療栓塞術(shù)后所致的惡心嘔吐、發(fā)熱、腹痛等癥狀[9, 10]?，F(xiàn)代藥理研究也發(fā)現(xiàn)四君子湯對肝癌細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用。施勝英等研究發(fā)現(xiàn)加味四君子湯含藥血清能抑制Hep-G2 細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，阻滯其于G0 /G1期，其機制可能通過阻斷PI3K/Akt /mTOR 信號通路而實現(xiàn)[11]。

大量的免疫學(xué)研究證明，腫瘤一旦在機體發(fā)生和發(fā)展，機體的免疫系統(tǒng)可能通過多種途徑參與抗腫瘤的免疫效應(yīng)，以消除腫瘤細(xì)胞或控制腫瘤的生長[12]。機體抗腫瘤的免疫應(yīng)答機制主要是由細(xì)胞免疫介導(dǎo)，因此機體細(xì)胞免疫功能的減弱導(dǎo)致肝癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸是HCC發(fā)生和發(fā)展的重要原因[13]。CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞為主要的抗腫瘤免疫細(xì)胞，在腫瘤免疫初始應(yīng)答中起重要作用。NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞組分，在人類癌癥的發(fā)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是肝臟微環(huán)境中主要的免疫成分，NK細(xì)胞功能的改變，可能使腫瘤細(xì)胞逃逸免疫機制，導(dǎo)致腫瘤進展。因此CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞在肝癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。

本研究結(jié)果表明HCC根治術(shù)后患者口服四君子湯兩年，腫瘤的復(fù)發(fā)率明顯低于對照組患者，生存率則明顯高于對照組。研究還發(fā)現(xiàn)治療組患者CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞均高于對照組，提示四君子湯影響肝癌發(fā)生和發(fā)展的機制可能是增強了機體的細(xì)胞免疫功能。但由于本研究納入的患者例數(shù)較少，因此尚需進行更多的設(shè)計合理、執(zhí)行嚴(yán)格的多中心大樣本的、隨訪時間足夠長的隨機對照試驗，從而驗證四君子湯在肝癌臨床應(yīng)用中的價值。

[1] Vibert E, Ishizawa T. Hepatocellular carcinoma: Western and Eastern surgeons points of view[J].J Visc Surg, 2012,149(5):e302-e306.

[2] 張聰，王玉鳳，李隆敏，等. 靶向超聲微泡在肝癌治療領(lǐng)域的研究進展[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2017,25(1):154-157.

[3] 肖月升，耿建芳，楊瑞合，等. 初論“中心辨證”—─學(xué)習(xí)于爾辛教授“肝癌的‘本’是脾虛”論點的啟示[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2006，17(6):1062-1063.

[4] 王應(yīng)強，羅倩倩，李幼平，等. 對射頻消融術(shù)與肝切除術(shù)治療小肝癌系統(tǒng)評價/Meta分析的方法學(xué)質(zhì)量再評價[J]. 中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2014，14(5):561-574.

[5] 唐超峰，張玉鵬，李昭宇. 原發(fā)性肝癌術(shù)后預(yù)防性肝動脈栓塞化療的效果分析[J]. 寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，35(5):575-577.

[6] 倪育淳，趙紅艷，王晞星. 肝癌從脾論治的理論基礎(chǔ)和指導(dǎo)意義[J]. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,36(6):619-620.

[7] 陳榮，林嬰仔，王建春. 四君子湯合血府逐瘀湯化裁方治療肝癌術(shù)后肝功能損害的臨床觀察[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,11(4):517-520.

[8] 閆巖. 四君子湯聯(lián)合化療治療惡性腫瘤112例療效研究[J]. 當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2015,21(3):156-157.

[9] 趙新運. 四君子湯加味治療肝癌肝動脈化療栓塞術(shù)后綜合征84例療效觀察[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7(3):51-52.

[10] 王劭茁，洪立立，劉名龍，等. 加味四君子湯在原發(fā)性肝癌介入治療后應(yīng)用的臨床觀察[J]. 天津藥學(xué)，2008,20(1):34-35.

[11] 施勝英，林海楨，周溦，等. 加味四君子湯含藥血清對肝癌Hep-G2細(xì)胞的影響[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志，2016，22(18):88-93.

[12] 崔碧珺，于益芝. 惡性腫瘤的免疫逃逸機制[J]. 實用腫瘤雜志,2016,31(1):14-18.

[13] 武強，王立萍，張嘉寧，等. 肝癌免疫逃逸機制的研究進展[J]. 生命的化學(xué)，2015,35(6):796-800.

EffectoftheSijunzidecoctionontheTlymphocyteandNKcelloftheHepatocellularCarcinomapatientswithradicaloperation*

CHENYan1,HUHao2,ZHANGShijun2,YANGHong-zhi1△.

1.GuangdongkeylaboratoryofliverdiseaseResearch,theThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity(GuangzhouGuangdong, 510630)China

2016-12-15 編輯：黃育華)

10.3969/j.issn.1005-0264.2017.01.003

國家自然科學(xué)基金面上項目(No.81673909,No.81373500)，國家中醫(yī)藥管理局資助項目(No.JDZX2015173);△通訊作者，E-mail:hzyang1960@163.com