王振恒+晉玲+馬毅+崔治家+李倩+黃得棟

[摘要] 收集不同產(chǎn)地南五味子藥材進(jìn)行等級劃分，采用藥典方法進(jìn)行水分、總灰分的測定，采用UPLC測定五味子酯甲含量進(jìn)測定，確定南五味子商品等級劃分和五味子酯甲之間的關(guān)系。結(jié)果表明不同產(chǎn)地的南五味子藥材水分、總灰分及五味子酯甲含量均合格。不同等級間的南五味子藥材五味子酯甲的含量無顯著差異，但是二等品含量最高，三等品、一等品含量低，等級與五味子酯甲的含量不成正相關(guān)關(guān)系。該研究結(jié)果對于南五味藥材的生產(chǎn)經(jīng)營和質(zhì)量評價(jià)具有一定指導(dǎo)意義。

[關(guān)鍵詞] 南五味子； 商品規(guī)格等級； 五味子酯甲； 超高效液相色譜法

[Abstract] Schisandrae Sphenantherae Fructus， from different producing areas， were collected and divided into three grades. The moisture content and total ash were determined on the basis of the pharmacopoeia method， and schisantherin was determined by UPLC. The study is aimed to find the commercial specifications and grades of Schisandrae Sphenantherae Fructus based on schisantherin content. The results showed that the content of water， total ash and schisantherin of Schisandrae Sphenantherae Fructus from different producing areas qualified. There was no significant difference between different grades of schisandrin content， but the second-class were the highest， first-class and third-class were lower. It means that schisandrin content is not positive correlation to commercial grade. The study will be helpful to the production， management and clinical practice of Schisandrae Sphenantherae Fructus.

[Key words] Schisandrae Sphenantherae Fructus； commercial grade； schisantherin； UPLC

南五味子來源于木蘭科植物華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果實(shí)^[1]。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有收斂固澀、補(bǔ)腎寧心等功效^[2]。南五味子廣泛分布在我國陜西、河南、湖南、安徽等地^[3]。研究資料表明南五味子中含有大量的木脂素類^[4-6]成分，其有效成分具保肝、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等作用^[7-8]，臨床應(yīng)用十分廣泛。

目前，南五味子的市場需求量較大，但在產(chǎn)地、采收時(shí)間、儲藏運(yùn)輸?shù)葪l件影響下，藥材的大小、形狀、色澤均有明顯差異，這些差異與藥材質(zhì)量的關(guān)系有待實(shí)驗(yàn)證實(shí)?，F(xiàn)在沿用的五味子商品規(guī)格五味子分了2個(gè)等級，南五味子并沒有分級標(biāo)準(zhǔn)^[9]。為了適應(yīng)市場經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，本實(shí)驗(yàn)參照本課題組南五味子商品規(guī)格等級劃標(biāo)準(zhǔn)，對收集到的藥材進(jìn)行等級劃分。并以五味子酯甲為重要衡量指標(biāo)對其質(zhì)量和等級之間的關(guān)系進(jìn)行考察，為藥材市場交易和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)收集了4個(gè)不同產(chǎn)地的南五味子藥材，并劃分成3個(gè)等級，對其進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，從而探索產(chǎn)地和等級與南五味子藥材質(zhì)量的關(guān)系。

1 材料

1.1 樣品

從藥材市場、藥材產(chǎn)地共購買南五味子藥材4份，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)晉玲教授鑒定，均為南五味子正品，見表1。南五味分級時(shí)，藥材共同點(diǎn)為干貨。呈不規(guī)則球形或扁球形顆粒。干癟皺縮，果肉常緊貼種子上。內(nèi)含腎形種子12粒，表面棕黃色，有光澤，種皮薄而脆。果肉氣微，味酸。無枝梗、雜質(zhì)、蟲蛀、霉變。一等品直徑5.05 mm以上，表面棕紅色至暗棕色；二等品直徑4.25～5.05 mm，表面棕紅色至暗棕色；三等品直徑52～4.25 mm，表面暗棕色或棕褐色。

1.2 儀器

Thermo Fisher ultimate 3000 RSLC超高效液相色譜儀（包括XRS自動進(jìn)樣器、RS柱溫箱、DAD二極陣列檢測器、Chromeleon 7.2色譜工作站，XRS高壓四元梯度泵）（美國賽默飛世爾科技公司），Al104 1/1萬電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），OHAUS corporation DV SERIES 1/10萬電子分析天平（奧豪斯儀器有限公司），DHG-9123A電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司），KQ-250TDB型高頻數(shù)控超聲波清洗器（昆侖山超聲儀器有限公司），800 型離心沉淀機(jī)（上海手術(shù)器十廠），DGG-9620A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海齊欣科普儀器有限公司），MYB型電子調(diào)溫電熱套（天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司），F(xiàn)W200型高速萬能粉碎機(jī)（北京科偉永興儀器有限公司），TM0612型馬福爐（上海亞榮生化儀器廠）。endprint

1.3 試劑

甲苯（分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠），甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司），超純水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；對照品五味子酯甲（批號 B21328，純度≥98%，上海源葉生物科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測定

取南五味子粉末15 g，精密稱定，置500 mL短頸圓底燒瓶中；加甲苯約200 mL，再加入數(shù)片干燥、潔凈的無釉小瓷片；連接儀器，自冷凝管頂端加入甲苯至充滿水分測定管的狹細(xì)部分。將500 mL短頸圓底燒瓶置電熱套中緩緩加熱，待甲苯沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒餾出2滴。待水分完全餾出（即測定管刻度部分的水量不再增加時(shí)），先用甲苯?jīng)_洗冷凝管內(nèi)部，再用純凈的甲苯將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5 min，冷卻至室溫，靜置使水與甲苯完全分離。檢讀水量，計(jì)算供試品的含水量，見表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)產(chǎn)地（每個(gè)產(chǎn)地3個(gè)等級）的南五味子樣品水分均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定（不得過12%）。4個(gè)產(chǎn)地藥材水分差異較小，等級間水分差異也較小，其中除30號湖南省外（二等品含水量最高），均是一等品含水量最高。

2.2 總灰分測定

將南五味子供試品粉碎，過2號篩，混合均勻后，取供試品2.5 g，精密稱定。置熾灼至恒重的坩堝中，稱定質(zhì)量（精確至0.01 g）。緩緩熾熱，避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)|(zhì)量，計(jì)算供試品中總灰分的含量，見表3。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)產(chǎn)地（各3個(gè)等級）的南五味子藥材總灰分均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定（不得過6%）。產(chǎn)地和等級間藥材總灰分差異較小，其中等級間以三等品總灰分較高。

2.3 指標(biāo)性成分測定

2.3.1 色譜條件 ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；以甲醇（B）-水（A）為流動相梯度洗脫；流速0.3 mL·min-1 ；檢測波長254 nm；柱溫 35 ℃；進(jìn)樣量3.0 μL；梯度比例見表4。樣品及對照品色譜圖見圖1，2。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取五味子酯甲對照品，置棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，配成145.6，87.36，58.24，29.12，14.56，2.912 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。于4 ℃下保存，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備 取南五味子藥材粉末（過60目篩）0.5 g，精密稱定，分別置于50 mL 具塞三角錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇，稱重，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，至室溫，再稱重，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取質(zhì)量濃度為2.912，14.56，29.12，58.24，87.36，145.6 mg·L-1的五味子酯甲對照品溶液各3 μL，注入超高效液相色譜儀（UPLC），以對照品質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，峰面積Y 為縱坐標(biāo)，得線性方程，結(jié)果為Y=9.456 1X-0.176 43（R2=0.999 18）。結(jié)果表明，五味子酯甲的質(zhì)量濃度在0.42～0.84 g·L-1，具有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 將質(zhì)量濃度為87.36 mg·L-1 的五味子酯甲對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 次，進(jìn)樣量為3 μL，測定峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果顯示五味子酯甲峰面積的RSD 0.42%，保留時(shí)間的RSD 0.17%。表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將湖南產(chǎn)南五味子一等品樣品溶液，在同一洗脫梯度的條件下，并按2.3.1項(xiàng)下色譜條件測定，分別在制備后0，2，4，6，8 h 進(jìn)樣，記錄色譜圖、保留時(shí)間和峰面積。計(jì)算RSD，結(jié)果顯示，峰面積的RSD 1.8%，保留時(shí)間的RSD為0.9%。表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)性定良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取湖南產(chǎn)南五味子一等品5 份，按照2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積和保留時(shí)間，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示五味子酯甲峰面積的RSD 1.8%，保留時(shí)間的RSD為0.33%。表明此試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.5 五味子酯甲含量測定

按照2.3.2項(xiàng)下對4個(gè)產(chǎn)地（各3個(gè)等級）南五味子藥材商品制備供試品，按照2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測定，見表5。

4個(gè)產(chǎn)地的南五味子藥材五味子酯甲的含量均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定（不得少于0.20%）。產(chǎn)地對南五味子藥材中五味子酯甲含量影響較大，等級對五味子酯甲含量的影響較小，其中二等品含量較高，一等品含量較低，等級跟五味子酯甲的含量不成正相關(guān)關(guān)系。以產(chǎn)地考察，湖南南五味子質(zhì)量明顯優(yōu)于山西、陜西、河南產(chǎn)藥材。由于樣本量有限，有待進(jìn)一步考察，見表6，7。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，4個(gè)省的南五味子樣品中的水分、總灰分以及五味子酯甲含量均符合藥典規(guī)定，藥材總體質(zhì)量良好。其中一等品的南五味子含水量較高。不論是五味子，還是南五味子均以肉厚、油潤質(zhì)量為好，從大的方面講，五味子質(zhì)量好于南五味子，從南五味子本身來講，一等品含水量較高可能與其果肉相對厚度有關(guān)；三等品總灰分含量較高可能是因?yàn)槠浔旧碛泻芏嗥茡p的果實(shí)存在，導(dǎo)致泥土沙粒嵌在其中。南五味子藥材中五味子酯甲和等級的相關(guān)性較小，等級間含量沒有顯著性差異。植物基原單一，而且南五味子作為果實(shí)類藥材由于沒有次生生長，果實(shí)中種子1～2枚較少，在較短生長季節(jié)中，最終果實(shí)中五味子酯甲含量沒有產(chǎn)生顯著差異。

從2010年版藥典開始，南五味子和五味子分開作為兩種藥材，有利于解決市場的混亂，使其來源單一化。南五味子和五味子藥材藥用功效相同，但是市場價(jià)格五味子價(jià)格明顯高于南五味子^[10]，與傳統(tǒng)質(zhì)量評價(jià)有關(guān)，在商品外形也有體現(xiàn)。南五味子等級劃分之后，根據(jù)市場規(guī)律，價(jià)格和等級一般是一致的。但是從內(nèi)部質(zhì)量控制的角度來看，色澤最好個(gè)頭最大者五味子酯甲含量并不一定最高，二等品的質(zhì)量最好，其原因可能與五味子酯甲存在于藥材不同部位的多少有關(guān)。崔九成等^[11-13]的研究結(jié)論也支持了本推斷：南五味子藥材中，種子和果肉中化學(xué)成分存在一定差異，且種子特別是種仁中木脂素含量較高。一等品中果肉占比較大，五味子酯甲含量整體上低于二等品。endprint

南五味子和五味子商品購買時(shí)可根據(jù)藥材木脂素成分的含量高低選擇品種。南五味子和五味子在藥店都有銷售，而制藥廠多用的是五味子，監(jiān)督管理部門和購買者應(yīng)防止零售店以南五味子充五味子的行為發(fā)生。購買大量南五味子商品以二等品最為經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

按照藥典方法評價(jià)藥材質(zhì)量可以快速、方便、有效的保證藥材質(zhì)量。但只是用單一成分來評價(jià)藥材質(zhì)量仍顯得不太合理，要以多種有效成分為指標(biāo)，并且結(jié)合外觀性狀和生物效價(jià)檢測來綜合評價(jià)藥材質(zhì)量的優(yōu)劣才會顯得更加科學(xué)合理。

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[責(zé)任編輯 呂冬梅]endprint