張麗麗　王蘭英　唐萌

摘要：采用不同的有機溶劑對花臉香蘑（Lepista sordida）的發(fā)酵液進行萃取，并進行了花臉香蘑發(fā)酵液的抗菌活性試驗。結果表明，花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對所選菌種的生長均有一定的抑制作用，且效果較好。而小分子的正丁醇相的抗菌效果不穩(wěn)定，花臉香蘑的胞外小分子對G+、G-均有一定的抑制作用，表明花臉香蘑具有廣泛的抗菌活性。

關鍵詞：花臉香蘑（Lepista sordida）；液體發(fā)酵；抗菌活性

中圖分類號：S646 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）18-3528-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.18.034

Abstract： Using different organic solvent extracting of Lepista sordida fermented liquid，and the fermented liquid of Lepista sordida antibacterial activity test. The results showed the extracelluar small moleules ethyl acetate phase extracted from Lepista sordoda has certain inhibition effect on the growth of the selected strains and the effect is relatively good. However，the antibacterial effect of the small molecules n-butyl alcohol phase is unstable. The extra cellular small molecule of the lepista sordida has certain inhinition effect on G+ and G-，which manifests Lepista sordida has a wide range of antibacterial activity.

Key words： Lepista sordida； liquid fermentation； antibiotic activity

花臉香蘑（Lepista sordida），又名紫香花臉蘑，隸屬于傘菌目（Agaricales）白蘑科（Tricholomataceae）香蘑屬（Lepista），其子實體營養(yǎng)豐富、風味獨特，是一種具有較高開發(fā)價值的食用菌[1-3]。但人工栽培的花臉香蘑存在子實體易碎、不易運輸?shù)热毕??；樝隳⒌陌l(fā)酵培養(yǎng)技術應用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，極大地降低了花臉香蘑的生產(chǎn)成本、增大了產(chǎn)量，具有很高的市場潛力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料 花臉香蘑，由吉林大學珠海學院化學與藥學系實驗中心提供；牛肉膏，天津市福晨化學試劑廠；瓊脂粉，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；蛋白胨，廣州學友生物科技有限公司；無水乙醇、氫氧化鈉（分析純），廣東省精細化學品工程技術研究開發(fā)中心；氯化鈉（分析純），天津市福晨化學試劑廠；供試菌，大腸埃希氏菌ATCC25922、枯草芽孢桿菌CMCC63501、地桿菌ATCC33117、黏質沙雷氏菌ATCC43424、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞桿菌。

1.1.2 儀器 立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；烘箱，DHG-9140A型，上?！憧茖W儀器有限公司；氣浴恒溫振蕩器，ZD-85型，金壇市醫(yī)療儀器廠；恒溫培養(yǎng)箱，HPX-9272MBE型，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠。

1.2 方法

1.2.1 指示菌的制備 大腸埃希氏菌ATCC25922、枯草芽孢桿菌CMCC63501、地桿菌ATCC33117、黏質沙雷氏菌ATCC43424、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞桿菌采用LB培養(yǎng)基接種，37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，涂布培養(yǎng)法測定其菌液濃度，用無菌生理鹽水稀釋成109 CFU/mL菌懸液。指示菌于4 ℃冰箱保存待用。

1.2.2 胞外小分子的制備 花臉香蘑胞外小分子的制備流程如圖1所示。將花臉香蘑接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，120 r/min搖床培養(yǎng)5 d。乙醇沉淀多糖后的發(fā)酵液上清液濃縮至原體積，1∶1分別加入乙酸乙酯及正丁醇，反復萃取3次，獲得小分子乙酸乙酯相及小分子正丁醇相濃縮10倍備用。

1.2.3 抗菌活性的測定[4-10] 將活化好的菌種懸液用移液槍取1 mL加入50 ℃左右未凝固的培養(yǎng)基中，混勻備用。定性濾紙片以打孔器制成直徑6 mm的圓形紙片，121 ℃、0.103 MPa 蒸汽滅菌20 min。用鑷子夾取浸透小分子乙酸乙酯相及小分子正丁醇相的6 mm圓形濾紙片放于培養(yǎng)基上，并將浸透乙酸乙酯及正丁醇試劑濾紙片作為空白對照放于培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿共放4片濾紙，各紙片中心相距應大于24 mm，紙片中心距平板內邊緣應大于15 mm。避免鑷子觸碰培養(yǎng)基，以免造成交叉感染或培養(yǎng)基破損。將培養(yǎng)皿倒置，于32 ℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結束后，取出并分別測量濾紙片抑菌圈的直徑大小、拍照并記錄試驗結果。

2 結果與分析

利用乙酸乙酯和正丁醇提取花臉香蘑發(fā)酵液抑菌物質，以大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、地桿菌、黏質沙雷氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌作為指示菌，對花臉香蘑發(fā)酵液進行抑菌作用研究。結果（圖2、表1）表明，提取的花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對所選菌種的生長均有一定的抑制作用，且效果較好，其中對黏質沙雷氏菌（-）的抑制能力最強，抑菌圈達到12 mm，對銅綠假單胞桿菌（-）也有一定的抑制效果，抑菌圈達到10 mm。對金黃色葡萄球菌（+）和枯草芽孢桿菌（+）也有一定的抑制效果，抑菌圈都達到9 mm。對地桿菌和大腸埃希氏菌（-）有抑制效果，抑菌圈為8 mm。而花臉香蘑胞外子小分子的正丁醇相的抗菌效果不好，對大腸埃希氏菌（-）有一定的抑制效果，抑菌圈達到10 mm，對其他指示菌均無效果[11-14]。endprint

3 小結與討論

花臉香蘑胞外小分子乙酸乙酯相對大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、地桿菌、黏質沙雷氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞桿菌的生長均有一定的抑制作用，且效果較好，其中對黏質沙雷氏菌（-）的抑制能力最強，抑菌圈達到12 mm，對銅綠假單胞菌（-）也有一定的抑制效果。而花臉香蘑胞外小分子正丁醇相的抗菌效果不好?；樝隳庑》肿右宜嵋阴ハ嗄軌蛞种平瘘S色葡萄球菌的生長，而正丁醇相對金黃色葡萄球菌的生長無抑制作用，可見不同溶劑的提取物，對同一細菌有不同的抑菌作用，說明花臉香蘑中存在著不同溶解性的抑菌物質，為進一步的研究不同溶劑提取物的具體化學成分打下基礎[15-17]。

通過對花臉香蘑胞外小分子物質的抗菌活性試驗發(fā)現(xiàn)：花臉香蘑的胞外小分子對G+、G-均有一定的抑制作用，說明花臉香蘑具有廣泛的抗菌活性，這與張京良等[9]的花臉香蘑Lepista sordida LS7的鑒定及其發(fā)酵液抗菌活性分析的研究結果相吻合。說明可以對花臉香蘑抑菌活性深入研究，開發(fā)天然防腐劑。

花臉香蘑的發(fā)酵培養(yǎng)技術應用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，極大地降低了花臉香蘑的生產(chǎn)成本、增大了產(chǎn)量，具有很高的市場潛力。花臉香蘑抑菌效果較好，具有廣泛的抗菌活性。綜上所述，花臉香蘑在體外具有良好的抑菌作用，以期為花臉香蘑的深入開發(fā)利用提供一定的理論基礎。

參考文獻：

[1] 胡先運，江家志，羅心毅.花臉香蘑酯酶同工酶分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（18）：9593-9595.

[2] 鄧功成，王 經(jīng)，趙 洪，等.花臉香蘑菌絲體發(fā)酵條件優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（25）：12403-12405.

[3] 劉艷如，吳小君，鄭永標.發(fā)酵時間對花臉香蘑抑制水稻細條病病原菌活性的影響[J].福建農(nóng)業(yè)科技，2012（12）：47-49.

[4] 胡先運，李香莉，張勇民，等.花臉香蘑菌絲體氨基酸分析[J].氨基酸和生物資源，2007，29（1）：51-52.

[5] 王劍鋒，白 濤，饒 軍.花臉香蘑液態(tài)發(fā)酵條件研究[J].中國食用菌，2007，26（4）：44-46.

[6] 謝福泉，林遠崇，蔣陳軍，等.野生花臉香蘑人工控制條件栽培技術初探[J].菌物研究，2007，5（2）：89-92.

[7] 張京良.花臉香蘑（Lepista sordida）液體發(fā)酵及代謝產(chǎn)物的研究[D].山東青島：中國海洋大學，2010.

[8] 劉法顯，于長青，姚 笛，等.花臉香蘑菌絲體發(fā)酵條件的優(yōu)化[J].食品研究與開發(fā)，2016，37（22）：169-172.

[9] 張京良，李 蓉，孫炳竹，等.花臉香蘑功能飲料的研制[J].食用菌，2010，32（2）：61-62.

[10] 孟 玲，王麗華，黃 芳，等.花臉香蘑菌絲體培養(yǎng)特性的研究[J].食用菌學報，2010，17（3）：41-45.

[11] 張京良，李 蓉，江曉路.花臉香蘑Lepista sordida LS7的鑒定及其發(fā)酵液抗菌活性分析[J].食品與生物技術學報，2010， 29（6）：948-951.

[12] 彭衛(wèi)紅，王 勇，甘炳成，等.野生珍稀食用菌花臉香蘑菌絲體培養(yǎng)研究[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2004，17（4）：515-517.

[13] 秦 丹，孔 超，孫效樂，等.花臉香蘑粗多糖對雛雞免疫調節(jié)作用的研究[J].食用菌學報，2013，20（2）：37-41.

[14] 胡七金，謝福泉.花臉香蘑Le.s0529-1菌株的特性與熟料袋栽技術要點[J].浙江食用菌，2008，16（2）：15-17.

[15] 華秀紅，宋金俤，劉 超，等.四株野生花臉香蘑的人工馴化栽培試驗[J].浙江食用菌，2008（5）：13-15.

[16] 孟 玲，黃 芳，趙 晨，等.花臉香蘑發(fā)酵全液多糖提取條件的研究[J].食用菌學報，2009，16（4）：61-63.

[17] 劉法顯.花臉香蘑液體發(fā)酵及其多糖的提取和免疫活性初步研究[D].黑龍江大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學，2016.endprint