劉騫　程運(yùn)斌　張杰

摘要：建立了一種反相高效液相色譜法測(cè)定30%二氯吡啶酸水劑含量的方法。試樣用流動(dòng)相溶解，采用等度洗脫的方法，以甲醇-醋酸銨-氨水為流動(dòng)相，普通C18為色譜分析柱，對(duì)二氯吡啶酸進(jìn)行分離，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，該方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 6，變異系數(shù)為0.522%，平均回收率為100.3%。色譜圖峰形好，出峰時(shí)間短，對(duì)色譜柱要求低，滿足農(nóng)藥產(chǎn)品含量分析的要求。

關(guān)鍵詞：二氯吡啶酸；等度洗脫；反相高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）18-3534-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.18.036

Abstract： A RP-HPLC method was established for detection of clopyralid 30% AS. The sample was dissolved with mobile phase and analyzed by RP-HPLC using the mixture of methanol and ammonium acetate and ammonia as the mobile phase and ordinary C18 as chromatographic column in isocratic elution method. In addition， the quantificaation was calculated by external standard method. The linear correlation coefficient for clopyralid was 0.999 6，the variation coefficent was 0.552%， and the average recovery was 100.3%. Under the chromatographic conditions in this paper， the peak shape of dicloxypyridine acid is good， the retained time is short and low requires on the column. The method has met the requirements of analysis of pesticide products.

Key words： clopyralid； isocratic elution； RP-HPLC

二氯吡啶酸（Clopyralid）是一種化學(xué)合成的激素類除草劑，化學(xué)名稱為3，6-二氯吡啶-2-羧酸，商品名龍拳、畢草克等，由美國(guó)陶氏公司研制。殺死雜草途徑有兩種，一種是由植物莖葉吸收，破壞植物體內(nèi)激素平衡，導(dǎo)致雜草死亡，另一種是由韌皮部傳導(dǎo)至根，殺死深根類雜草。主要用于防治油菜、玉米、小麥田、草坪等田間的一年生闊葉雜草和深根多年生闊葉雜草（菊科和豆科雜草），其中對(duì)大刺兒菜、苦苣菜、藏薊等闊葉難防雜草效果較好[1-6]。

目前，有關(guān)這種農(nóng)藥分析的液相色譜法報(bào)道很多，但都采用酸性流動(dòng)相體系作為檢測(cè)條件，在該條件下分離檢測(cè)二氯吡啶酸對(duì)分析所用的色譜柱要求高，需要高水平的硅醇基封尾的色譜柱才能獲得保留時(shí)間合適且對(duì)稱性好的窄峰[7-10]。建立一種簡(jiǎn)便的高效液相色譜法，僅使用普通的C18色譜柱就可以在合適的分析時(shí)間內(nèi)得到對(duì)稱性好的窄峰的分析方法是非常有必要。因此，本研究采用甲醇-醋酸銨-氨水作為流動(dòng)相，建立了反相高效液相色譜法測(cè)定30%二氯吡啶酸水劑中二氯吡啶酸的含量。該方法僅使用普通的C18色譜柱就可在5 min內(nèi)完成分離工作，而且精密度高、準(zhǔn)確度好、線性關(guān)系良好，可為企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制和檢測(cè)機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-10AD型高效液相色譜儀，配備SPD-10AVP型紫外檢測(cè)器（日本SHIMADZU公司）；色譜柱為Inertsil？誖ODS-3 250 mm×4.6 mm，5 μm（日本SHIMADZU-GL公司）；XP504R型電子天平（瑞士Mettle Toledo公司）；SONOREX型超聲波清洗器（德國(guó)Bandelin公司）；Milli-Q型超純水儀器（美國(guó) Millipore公司）；有機(jī)系尼龍過濾頭，濾膜孔徑約為0.22 μm（天津津騰公司）。甲醇、醋酸銨（色譜純，美國(guó)J.T.Baker公司）；氨水（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

試驗(yàn)用水為超純水，二氯吡啶酸（98.1%，上海市農(nóng)藥研究所有限公司）；30%二氯吡啶酸水劑（由某企業(yè)提供）。

1.2 方法

1.2.1 液相色譜條件 流動(dòng)相為甲醇-醋酸銨-氨水溶液（體積比30∶70，醋酸銨溶液用氨水調(diào)pH至8.0），流速為1.0 mL/min，柱溫為40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，進(jìn)樣體積為20 μL，二氯吡啶酸的保留時(shí)間約為4.3 min。二氯吡啶酸的標(biāo)樣液相色譜見圖1，典型質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%二氯吡啶酸水劑樣品液相色譜見圖2。

1.2.2 標(biāo)樣的制備 稱取0.05 g（精確至0.000 1 g）二氯吡啶酸標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻作為母液備用。取2 mL母液于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻作為檢測(cè)樣品的標(biāo)樣溶液使用。

1.2.3 試樣溶液的制備 稱取0.200 0 g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%二氯吡啶酸水劑樣品于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解超聲15 min后再稀釋至刻度，取上述樣品溶液2 mL于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻后用0.22 μm微孔濾膜過濾后檢測(cè)其二氯吡啶酸的含量。endprint

1.2.4 二氯吡啶酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定 待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針二氯吡啶酸的峰面積相對(duì)變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中二氯吡啶酸的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中二氯吡啶酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按式（1）計(jì)算。

式中，A1為標(biāo)樣溶液中二氯吡啶酸面積的平均值，A2為試樣溶液中二氯吡啶酸峰面積的平均值，m1為二氯吡啶酸標(biāo)樣的稱樣量（g），m2為試樣的稱樣量（g），V1為標(biāo)樣的定容體積（mL），V2為試樣的定容體積（mL），P為標(biāo)樣中二氯吡啶酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 通過LC-10AD型高效液相色譜儀的光譜掃描功能，獲得二氯吡啶酸的紫外波長(zhǎng)光譜圖（圖3）。從圖3可以看到，二氯吡啶酸在277.73 nm處有最大吸收波長(zhǎng)，故選擇280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇 二氯吡啶酸的檢測(cè)多采用反向液相色譜法，其檢測(cè)條件為酸性流動(dòng)相體系，本研究也利用了該方法檢測(cè)了二氯吡啶酸，但二氯吡啶酸的峰形不佳，存在峰拖尾、峰展寬以及峰不對(duì)稱的問題，且分析時(shí)間較長(zhǎng)，不便用于實(shí)際的檢測(cè)工作中（圖4a、4b、4c）?？赡苁且?yàn)槎冗拎に岬姆肿咏Y(jié)構(gòu)中的吡啶環(huán)與色譜柱填料中的硅羥基的相互作用，導(dǎo)致峰拖尾和保留時(shí)間增大。因此，本研究采用甲醇-醋酸銨-氨水（甲醇∶醋酸銨=30∶70，醋酸銨溶液濃度為87.5 mmol/L，pH 8.0）流動(dòng)相體系，得到對(duì)稱的窄峰（圖4d），且分析時(shí)間短，可用于實(shí)際的檢測(cè)分析。

進(jìn)一步驗(yàn)證是否是二氯吡啶酸的分子結(jié)構(gòu)中的吡啶環(huán)與色譜柱填料中的硅羥基的相互作用而導(dǎo)致峰拖尾，選用了資生堂的C18 MGⅡ的色譜柱為分析柱，該柱子的硅醇基被高水平封尾適用于困難的堿性化合物的分析，在酸性流動(dòng)相體系下分離檢測(cè)二氯吡啶酸，得到的峰形尚可，保留時(shí)間較短（圖4e），也可用于實(shí)際的檢測(cè)分析。說明之前峰拖尾的原因是因?yàn)槎冗拎に岬姆肿咏Y(jié)構(gòu)中的吡啶環(huán)與色譜柱填料中的硅羥基的相互作用。

綜上所述，在酸性流動(dòng)相體系下分離檢測(cè)二氯吡啶酸，要獲得好的峰形和合適的保留時(shí)間，需要使用特殊的色譜柱，而在本研究建立的色譜方法中不需要特殊的色譜柱，僅需改變流動(dòng)相的組成就可以獲得優(yōu)于使用特殊的色譜柱時(shí)的峰形和合適的保留時(shí)間，在實(shí)際應(yīng)用中更為便捷。

2.2 線性相關(guān)性試驗(yàn)

將標(biāo)樣溶液在上述色譜條件下進(jìn)行分析，進(jìn)樣量分別為12、14、16、18、20、22、24 μL，以質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，二氯吡啶酸的線性相關(guān)曲線為y=45 931.4x+5 569.60，R2=0.999 6，可滿足定量分析的要求。

2.3 精密度試驗(yàn)

從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5份試樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，測(cè)得二氯吡啶酸的平均含量為28.3%，變異系數(shù)為0.522%（表1），表明該方法具有較高的精密度。

2.4 回收率試驗(yàn)

稱取5個(gè)已知含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%二氯吡啶酸水劑樣品，分別加入一定量的二氯吡啶酸標(biāo)樣（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.2%），在上述色譜條件下分析測(cè)定二氯吡啶酸的加標(biāo)回收率，測(cè)得二氯吡啶酸的回收率在99.6%～101.1%，平均回收率為100.3%（表2），表明該方法具有較好的準(zhǔn)確度。

3 小結(jié)

利用反相高效液相色譜法測(cè)定農(nóng)藥產(chǎn)品中的二氯吡啶酸的含量。該方法操作簡(jiǎn)便，分析時(shí)間短，對(duì)色譜柱的要求不高，而且具有良好的線性相關(guān)性、高精密度和準(zhǔn)確度，實(shí)用性高，可為農(nóng)藥產(chǎn)品企業(yè)制定企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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