王凱悅+閆茗茗+李闖+趙杰

摘要：目的：探討程序性死亡因子5在Graves?。℅D）患者外周血單個核細(xì)胞（PBMC）的表達(dá)。方法：RT-PCR法檢測50例Graves病患者外周血單個核細(xì)胞PDCD5mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：與正常對照比較，PDCD5mRNA在GD患者PBMC中表達(dá)升高（P<0.05），患者PDCD5mRNA表達(dá)水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關(guān)（均P<0.01），與血清T4水平及|lgTSH|呈顯著負(fù)相關(guān)（均P<0.05）。結(jié)論：PDCD5mRNA在GD患者PBMC表達(dá)升高，PDCD5參與了GD淋巴細(xì)胞凋亡平衡異常。

關(guān)鍵詞：程序性死亡因子5；PBMC；GD

中圖分類號：G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-9324（2017）42-0044-02

Graves?。℅raves disease，簡稱GD）是一種較為常見的自身免疫性甲狀腺?。ˋITD）。GD又稱毒性彌漫性甲狀腺腫，是甲狀腺功能亢進(jìn)的最常見類型，約占全部甲亢的90%，本病為一多系統(tǒng)損害綜合征，一般認(rèn)為細(xì)胞免疫及體液免疫參與了其發(fā)病過程。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡參與了自身免疫性甲狀腺病的發(fā)病，甲狀腺細(xì)胞凋亡的調(diào)控異常是導(dǎo)致GD發(fā)病的主要原因之一[1]。

程序性死亡因子5（PDCD5）是由北京大學(xué)人類疾病基因研究中心從正常培養(yǎng)的白血病細(xì)胞株TF-1細(xì)胞中克隆到的凋亡相關(guān)新基因。PDCD5定位于染色體19q12- q13.1，由6個外顯子和5個內(nèi)含子組成，cDNA全長為559bp[2]。研究表明，PDCD5可作為凋亡促進(jìn)劑參與多種腫瘤、自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程[3-5]。本研究旨在從mRNA水平研究Graves病患者PDCD5表達(dá)情況變化。

一、對象和方法

1.研究對象與分組：GD組：GD患者50例，男15例，女35例，平均年齡42.50±10.61歲。所有病人都接受了必要的臨床檢查，常規(guī)抽取患者空腹靜脈血，實驗室檢測甲狀腺功能指標(biāo)及相關(guān)抗體參數(shù)，甲狀腺攝131I率的測定和甲狀腺ECT顯像，均為新發(fā)病未給予任何藥物治療的初診患者。

正常對照組（NC）50例，為本院健康查體人員，年齡36.10±10.38歲，男18例，女32例。

2.方法：（1）外周血單個核細(xì)胞PDCD5mRNA的表達(dá)：采集所有研究對象的空腹肘靜脈血5ml，采用異硫氰酸胍一步法提取單個核細(xì)胞，用RT-PCR方法提取單個核細(xì)胞總mRNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，加PDCD5及β-actinPCR引物，在Taq酶作用下進(jìn)行PCR。反應(yīng)條件為：預(yù)變性：94℃ 3min，94℃ 40秒，61℃ 45秒，72℃ 50秒，循環(huán)35次，72℃延伸5分鐘。8μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射儀觀察，BIORAD-GD2000凝膠成像系統(tǒng)攝取圖像并用Quantity One軟件測量灰度，基因表達(dá)水平用PDCD5/β-actin灰度比。

（2）PDCD5上游引物5-CAA CAG GAA GCA AAG CAC-3；下游引物為5-GAT CTT AAC TTC TGT CCT AGAC-3。β-actin上游引物5-CCC AGG CAC CAG GGC GTG ATG GT-3；下游引物為5-GGA CTC CAT GCC CAG GAA GGA A-3。

（3）統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組均數(shù)間比較采用雙尾Student's t檢驗。對可能影響PDCD5表達(dá)水平的因素進(jìn)行直線相關(guān)分析。變量TSH呈偏態(tài)分布，經(jīng)過對數(shù)轉(zhuǎn)換后符合正態(tài)分布，并采用對數(shù)形式進(jìn)行統(tǒng)計分析。P<0.05差異具有顯著意義，所有數(shù)據(jù)采用SPSS14.0進(jìn)行統(tǒng)計處理。

二、結(jié)果

1.外周血單個核細(xì)胞PDCD5mRNA的表達(dá)（表1）：GD組顯著高于正常對照組（P<0.05）。

2.PDCD5mRNA表達(dá)水平與臨床參數(shù)的直線相關(guān)關(guān)系分析。運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)直線相關(guān)分析，患者PDCD5mRNA表達(dá)水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關(guān)（均P<0.01），與血清T4水平及|lgTSH|呈顯著負(fù)相關(guān)（均P<0.05），與患者年齡、病史、血T3、FT3、FT4和TRAb水平無顯著相關(guān)性（表2）。

三、討論

PDCD5mRNA在Graves病患者中的表達(dá)量高于正常對照組，且與正常人比較差異有顯著性（P<0.05）。PDCD5在Graves病PBMC中的過表達(dá)，提示PDCD5可能是Graves病發(fā)病的重要因素，并且這種表達(dá)量的增加在轉(zhuǎn)錄水平就已經(jīng)開始了。GD患者外周血單個核細(xì)胞PDCD5的表達(dá)與甲狀腺自身抗體TM-Ab、TG-Ab滴度呈正相關(guān)，與血清T4水平及|lgTSH|呈負(fù)相關(guān)。GD時產(chǎn)生的自身抗體主要包括TSH受體抗體、TM-Ab、TG-Ab。TM-Ab水平常與AITD活動有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，PDCD5表達(dá)水平與TM-Ab、TG-Ab呈顯著正相關(guān)，可以認(rèn)為PDCD5與GD病情進(jìn)展密切相關(guān)。血清TSH及T4是反映GD的主要指標(biāo)，隨著GD病情的逐漸加重，血清中TSH下降及T4數(shù)值升高。本研究結(jié)果表明GD病情越加重反而PDCD5表達(dá)越低，考慮PDCD5主要在發(fā)病初期起作用發(fā)揮其促凋亡的作用。已有的研究表明，凋亡促進(jìn)基因及凋亡抑制基因的表達(dá)失衡在GD的發(fā)病中有重要作用[6]，甲狀腺細(xì)胞中抑制凋亡基因占優(yōu)勢，使甲狀腺細(xì)胞凋亡減少?？紤]外周血淋巴細(xì)胞可能存在類似的凋亡機(jī)制，隨著GD病情的進(jìn)展凋亡抑制因素逐漸占優(yōu)勢，所以PDCD5的表達(dá)反而減少。

綜上所述，PDCD5在Graves病患者外周血單個核細(xì)胞中表達(dá)增加，參與了Graves病的發(fā)病過程，研究PDCD5的表達(dá)對于探索細(xì)胞凋亡在Graves病發(fā)病過程中的影響有重要的意義。

參考文獻(xiàn)：

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