蘇 華，錢文慧，廖 欣，白 汝，任海祥

（中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇 南京 210002）

研究

雙烏止痛酊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

蘇 華，錢文慧，廖 欣，白 汝，任海祥

（中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇 南京 210002）

目的制訂雙烏止痛酊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對雙烏止痛酊中的制天南星、當(dāng)歸及苯甲酰次烏頭原堿進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)對制劑中的毒性成分烏頭堿進(jìn)行限量檢查；采用高效液相色譜法測定苯甲酰新烏頭原堿含量，色譜柱選用Inertsustain C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 m），以乙腈 －0.02 mol／L 的磷酸二氫鈉（25∶75）為流動(dòng)相，檢測波長為 230 nm，柱溫為 30℃，流速為 1.0 mL ／min。結(jié)果雙烏止痛酊中制天南星、當(dāng)歸及苯甲酰次烏頭原堿的定性鑒別專屬性強(qiáng)，烏頭堿限量測定符合規(guī)定；苯甲酰新烏頭原堿的檢測質(zhì)量濃度在 0.012 44～0.099 52 g／L(r＝1.000 0，n＝5)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為 99.36% ，RSD ＝2.45%(n＝9）。結(jié)論該方法操作簡單，準(zhǔn)確可靠，可用于雙烏止痛酊的質(zhì)量控制。

雙烏止痛酊；苯甲酰新烏頭原堿；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法

雙烏止痛酊為我院院內(nèi)制劑，是由制川烏、制草烏、制天南星、細(xì)辛、丁香、當(dāng)歸、川芎等十幾味中藥通過滲漉法制成的外用酊劑，有效成分復(fù)雜多樣，臨床主要用于關(guān)節(jié)痛、腰腿痛、肩周炎等風(fēng)濕痹痛的治療，同時(shí)對各種急性扭傷、挫傷等有效，具有祛風(fēng)散寒、舒筋活絡(luò)、消炎止痛功效[1]。方中制川烏、制草烏中所含的烏頭類生物堿成分是制劑的毒／效成分，兩藥由生川烏、生草烏炮制而得，炮制后有毒的雙酯型生物堿類如烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿等成分大部分水解轉(zhuǎn)變成苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等單酯型烏頭堿[2－4]，而藥效并未發(fā)生改變。因此，雙烏止痛酊中既含有消炎鎮(zhèn)痛的有效成分單酯型烏頭堿，又含有毒性的雙酯型生物堿（如烏頭堿）?，F(xiàn)代研究中關(guān)于含制烏頭類毒／效成分的中成藥制劑的質(zhì)控研究較少。本研究旨在制訂雙烏止痛酊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立薄層定性鑒別和高效液相色譜定量測定制劑中的多種有效成分，同時(shí)結(jié)合對主要毒性成分烏頭堿的限量測定來全面控制該制劑質(zhì)量，以期為臨床安全使用烏頭類成分的制劑提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ－250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；FA1604S型電子天平（上海天平儀器廠）；AE240型電子分析天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

當(dāng)歸對照藥材（批號(hào)為 120927－201315），川芎對照藥材（批號(hào)為120918－201110），干姜對照藥材（批號(hào)為 120942－201309），烏頭堿對照品（批號(hào)為 110720－201111，純度為98.8%），苯甲酰次烏頭原堿對照品（批號(hào)為 111796－201303，純度為 97.5%），苯甲酰新烏頭原堿對照品（批號(hào)為111795－201303，純度為96.3%），均購自中國食品藥品檢定研究院；薄層層析硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）；甲醇（色譜醇，美國TEDIA公司）；雙烏止痛酊（規(guī)格為每瓶60 mL，醫(yī)院自制，批號(hào)分別為 160509，160613，160711）；其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 制川烏、制草烏

對制劑中制川烏、制草烏的有效成分苯甲酰次烏頭原堿進(jìn)行薄層色譜鑒別。取本品10 mL，揮去乙醇，加乙醚20 mL使溶解，加氨試液 2 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)佣燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。另取苯甲酰次烏頭原堿對照品，加異丙醇－三氯甲烷（1∶1）混合溶液制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。按處方比例稱取除制川烏、制草烏以外的藥材，研細(xì)，按本品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液 15 μL、對照品溶液10 μL、陰性對照品溶液15 μL分別點(diǎn)于同一硅膠 G（市售）薄層板上，以正己烷 －乙酸乙酯 －甲醇（6.4∶3.6∶1）為展開劑，氨蒸氣飽和15 min后展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對照品溶液色譜無此斑點(diǎn)(圖1)，表明處方中其他藥材對制川烏、制草烏的鑒別無干擾。在制劑有效期內(nèi)，該鑒別均呈正反應(yīng)，且3批樣品檢驗(yàn)結(jié)果均滿意。

圖1 制川烏、制草烏中苯甲酰次烏頭原堿鑒別的薄層色譜圖

2.1.2 制天南星

按照2010年版《中國藥典（一部）》制天南星鑒別項(xiàng)下方法，選擇干姜作為觀察指標(biāo)對制劑中的制天南星藥材進(jìn)行薄層鑒別。取本品20 mL，揮去乙醇，加水30 mL使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次15 mL，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取干姜對照藥材0.5 g，加乙醇50 mL，加熱回流1.5 h，濾過，濾液蒸干，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。按處方比例稱取本制劑中除制天南星和干姜以外的藥材，研細(xì)，按本品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液 15 μL、對照品溶液10 μL、陰性對照品溶液15 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G（市售）薄層板上，以環(huán)己烷－乙醚－丙酮－冰醋酸（40 ∶10 ∶5 ∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，而陰性對照品溶液色譜中無此斑點(diǎn)(圖2)，表明處方中其他藥材對制天南星的鑒別無干擾。在制劑有效期內(nèi)，該鑒別均呈正反應(yīng)，且3批樣品檢驗(yàn)結(jié)果均滿意。

圖2 制天南星鑒別的薄層色譜圖

2.1.3 當(dāng)歸

按照2010年版《中國藥典（一部）》“當(dāng)歸”鑒別項(xiàng)下方法，選擇當(dāng)歸和川芎作為觀察指標(biāo)對制劑中的當(dāng)歸藥材進(jìn)行薄層鑒別。取本品10 mL，揮去乙醇，加水30 mL使溶解，用正丁醇振搖提取3次，每次10 mL，正丁醇提取液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸與川芎對照藥材各0.5 g，加75%乙醇50 mL，加熱回流1 h，濾過，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用正丁醇振搖提取3次，同供試品溶液制備方法分別制成當(dāng)歸對照藥材溶液與川芎對照藥材溶液。按處方比例稱取除當(dāng)歸和川芎以外的藥材，研細(xì)，按本品制備工藝及供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G（市售）薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（9 ∶1）為展開劑，展開，晾干，在紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，而陰性對照品溶液色譜中無此斑點(diǎn)(圖3)，表明處方中其他藥材對當(dāng)歸的鑒別無干擾。在制劑有效期內(nèi)，該鑒別均呈正反應(yīng)，且3批樣品檢驗(yàn)結(jié)果均滿意。

圖3 當(dāng)歸鑒別的薄層色譜圖

2.2 烏頭堿限量測定

烏頭堿是存在于生川烏、生草烏等植物中的主要毒性成分，口服純?yōu)躅^堿0.2 mg即可中毒。雙烏止痛酊處方中雖然使用的是制川烏、制草烏兩味中藥，但仍存在一定的毒性成分。為進(jìn)一步確保用藥安全，參照2010年版《中國藥典（一部）》“成方制劑”及相關(guān)文獻(xiàn)中關(guān)于烏頭堿限量的規(guī)定[5－6]對雙烏止痛酊中的烏頭堿進(jìn)行含量限度檢查。取本品40 mL，揮去乙醇，加乙醚－二氯甲烷混合液（3 ∶1）50 mL 溶解，加氨試液 4 mL，密塞，搖勻，放置過夜；振搖1 h，濾過，殘?jiān)靡颐眩燃淄榛旌弦海? ∶1）洗滌 3 次（20，10，10 mL），合并濾液，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取烏頭堿對照品，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（2010年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅵ B），吸取供試品溶液 12 μL、對照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G（市售）薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯 －甲醇（6.4 ∶3.6 ∶1）為展開劑，氨蒸氣飽和15 min后展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上不出現(xiàn)斑點(diǎn)(圖4)，符合規(guī)定。在制劑有效期內(nèi)，3批樣品檢驗(yàn)結(jié)果均滿意。

2.3 檢查

3批樣品均符合酊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅠN）。

2.4 苯甲酰新烏頭原堿含量測定(高效液相色譜法)

2.4.1 色譜條件[6]與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：InertsustainC18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 － 0.02 mol／L 磷酸二氫鈉（25 ∶75）；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL ／min；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按苯甲酰新烏頭原堿峰計(jì)算不低于20 000。

圖4 烏頭堿限量測定的薄層色譜圖

2.4.2 溶液制備

稱取苯甲酰新烏頭原堿對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入0.05%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，配制成含苯甲酰新烏頭原堿0.124 4 g／L的對照品貯備液；精密吸取苯甲酰新烏頭原堿對照品貯備液4 mL，置10 mL容量瓶中，加0.05%鹽酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取本品8 mL，置10 mL容量瓶中，加0.05%鹽酸甲醇至刻度，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按處方比例和供試品制備工藝，不加制川烏和制草烏制成陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.4.3 測定法

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2.4.4 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密吸取 2.4.2項(xiàng)下 3種溶液各20 μL，按擬訂方法測定，記錄色譜圖，見圖5。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)保留時(shí)間處均有相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照品溶液則無此峰，表明陰性對照無干擾。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品貯備液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用0.05% 鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，以對照品質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝27 431.8 X－36 696.5，r＝1.000 0（n＝5）。結(jié)果表明，苯甲酰新烏頭原堿質(zhì)量濃度在 0.012 44～0.099 52 g／L范圍與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.4.2項(xiàng)下對照品溶液，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.96%（n ＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為160613）樣品，依法制備供試品溶液，常溫下分別于 0，1，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果苯甲酰新烏頭原堿峰面積在4 h內(nèi)較穩(wěn)定；到6 h時(shí)開始下降，同時(shí)峰形也變差，但 RSD值（2.58%）仍符合規(guī)定，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；到8 h時(shí)峰面積進(jìn)一步降低，總結(jié)原因，可能跟本方法選擇的溶劑有關(guān)。苯甲酰新烏頭原堿在甲醇中不穩(wěn)定，而在三氯甲烷或二氯甲烷中較穩(wěn)定，但前期試驗(yàn)表明，在本研究中的流動(dòng)相下，采用三氯甲烷作溶劑，供試品溶液色譜峰形較差，故本研究中采用0.05%甲醇作為溶劑。在酸性甲醇中樣品的穩(wěn)定性增加，但僅在6 h內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為160613）樣品5份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD為1.60%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

圖5 雙烏止痛酊高效液相色譜圖( ＝230 nm)

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的樣品（批號(hào)為160613）4 mL，共 9份，分別置10 mL容量瓶中，分別精密加入對照品貯備液1，2，3 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，精密吸取溶液各20 μL，注入色譜儀，測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 苯甲酰新烏頭原堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

檢測限與定量限測定：將對照品溶液逐漸稀釋，進(jìn)樣分析，當(dāng)信噪比（S／N）＝3時(shí)即為最低檢測限，當(dāng)S／N＝10時(shí)即為最低定量限。擬訂的色譜條件下，苯甲酰新烏頭原堿的最低檢測限為128 ng，最低定量限為327 ng。

2.4.5 樣品含量測定

取3批雙烏止痛酊（批號(hào)分別為 160509，160613，160711），依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果3批樣品中苯甲酰新烏頭原堿含量依次為 37.40，45.23，45.30 μg／mL。綜合測定結(jié)果，最終確定本品每 1 mL 含制川烏、制草烏以苯甲酰新烏頭原堿計(jì)不得低于20 μg。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別

雙烏止痛酊的有效成分復(fù)雜多樣，制川烏、制草烏、制天南星等藥材中含有的生物堿類成分具有消炎鎮(zhèn)痛、抗菌殺病毒的功效[7－8]，而其中當(dāng)歸、川芎等藥材中含有的阿魏酸、藁本內(nèi)酯等有效成分可以發(fā)揮舒筋活絡(luò)、祛瘀定痛的功效[9－10]。因此，本研究中選擇與制劑療效相關(guān)的制川烏、制草烏以及制天南星、當(dāng)歸作為定性鑒別的重要指標(biāo)。在制訂制川烏、制草烏的薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，根據(jù)前期液相含量測定的結(jié)果（苯甲酰新烏頭原堿的含量最高，其次是苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰烏頭原堿），首先選擇苯甲酰新烏頭原堿為對照品，樣品和對照品斑點(diǎn)均很清晰，但可能由于該制劑成分復(fù)雜，故制劑陰性位置處存在疑似干擾，重復(fù)試驗(yàn)仍存在同樣的問題。進(jìn)一步選擇苯甲酰次烏頭原堿為對照品，供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應(yīng)保留時(shí)間處顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾。因此，本研究中制川烏、制草烏的薄層定性鑒別以苯甲酰次烏頭原堿為對照品。

3.2 流動(dòng)相及檢測指標(biāo)的選擇

雙烏止痛酊處方中含有制川烏、制草烏以及元胡、干姜、天南星等多味中藥，成分十分復(fù)雜。其中制川烏、制草烏為方中君藥，因此研究之初擬通過測訂制川烏及制草烏的有效成分苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的含量來控制制劑的質(zhì)量。首先參照2010年版《中國藥典（二部）》中川烏藥材中關(guān)于苯甲酰新烏頭原堿的含量測定方法進(jìn)行了選擇試用：流動(dòng)相A為乙腈 －四氫呋喃（25 ∶15），流動(dòng)相 B 為 0.02 mol／L的醋酸銨緩沖液（每1 000 mL加入冰醋酸0.5 mL），梯度洗脫（0～48 min，15% ～26%A；48～48.1 min，26% ～35%A；48.1～58min，35%A；58.1～65min，35% ～15%A）。按照此梯度時(shí)，苯甲酰新烏頭原堿出峰時(shí)間合適，但峰形稍有拖尾，而苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿分離度不好，進(jìn)一步的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，此流動(dòng)相下制劑中其他成分干擾陰性樣品出峰；選擇乙腈－0.02 mol／L的磷酸二氫鈉（45∶55）為流動(dòng)相時(shí)，發(fā)現(xiàn)苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿出峰時(shí)間稍快，且樣品峰分離度不好；進(jìn)一步調(diào)整流動(dòng)相比例為乙腈 －0.02 mol／L 的磷酸二氫鈉（25 ∶75），樣品峰出峰時(shí)間合適，分離度等條件都較好，且后續(xù)試驗(yàn)證明在此流動(dòng)相下陰性樣品無干擾，故選擇其為最佳流動(dòng)相。

在上述流動(dòng)相條件下，對制劑的樣品含量進(jìn)行了初步測定，發(fā)現(xiàn)雙烏止痛酊中苯甲酰新烏頭原堿含量為47 μg／mL，而苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的含量較少，僅分別為 4.72 μg ／mL 和 13.76 μg／mL，已接近樣品的定量限的下限?？紤]到藥材本身產(chǎn)地及批次的差異，以及車間大生產(chǎn)的實(shí)際，為日后快速準(zhǔn)確地檢定樣品，最終決定選擇該制劑中含量較多的苯甲酰新烏頭原堿的含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

3.3 檢測波長的選擇

用紫外分光光度計(jì)對苯甲酰新烏頭原堿對照品溶液進(jìn)行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)苯甲酰新烏頭原堿的最大吸收波長為230 nm，故取其為檢測波長。

3.4 樣品溶劑及提取方法的選擇

烏頭堿類生物堿結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，文獻(xiàn)報(bào)道，純甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯等多種溶劑均能使其結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，使檢測結(jié)果不易重復(fù)[2，11－12]。因此，參閱文獻(xiàn)[6，13 － 14]，比較了常用的異丙醇－三氯甲烷（1∶1）和0.05%鹽酸甲醇2種溶劑對樣品峰形及穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)采用前者溶解的供試品峰形較差，并且曲線波動(dòng)較大，故采用0.05%鹽酸甲醇作為溶劑較合適。后續(xù)樣品的穩(wěn)定性研究中，發(fā)現(xiàn)樣品在酸性甲醇中穩(wěn)定性良好，但僅在6 h內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。

對于樣品的處理方法，前期的含量測定結(jié)果顯示樣品中苯甲酰新烏頭原堿含量約為45 μg／mL，含量并不高。故首先考慮將樣品在40℃以下低溫蒸干，然后用0.05%鹽酸甲醇溶解后濃縮定容，作為供試品溶液液。試驗(yàn)結(jié)果顯示，低溫濃縮法處理的樣品峰形欠佳，同時(shí)由于烏頭堿類生物堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，導(dǎo)致所測樣品中的少量新烏頭堿遇熱就會(huì)水解成苯甲酰新烏頭原堿，同時(shí)，苯甲酰新烏頭原堿在受熱的情況下本身也會(huì)部分水解。因此，該處理方法所測的含量并不準(zhǔn)確。進(jìn)一步對樣品采用簡單地直接稀釋處理方法，發(fā)現(xiàn)該方法下樣品峰形較好，曲線也較平穩(wěn)，同時(shí)所測得的含量值更接近理論投料含量。因此，經(jīng)過比較和試驗(yàn)，本研究中采取將樣品稀釋作為最終的樣品處理方式。該方法簡單易操作，同時(shí)也避免了濕熱可能導(dǎo)致的水解，使樣品含量值更穩(wěn)定和準(zhǔn)確。

[1]費(fèi)建紅，宋炳生，陳安蘭.雙烏止痛酊的質(zhì)量控制[J].中草藥，2002，33（12）：1085 － 1086.

[2]張聿梅，魯 靜，蔣 渝，等.川烏和制川烏中單酯及雙酯型生物堿成分的含量測定[J].藥物分析雜志，2005，25（7）：807－811.

[3]Taki M，Niitu K，Omiya Y，et al.8 － O － cinnamoylneoline，a new alkaloid from the flower buds of Aconitum carmichaeli and its toxic and analgesic activities[J].Planta Med，2003，69（9）：800 － 803.

[4]陳東安，易進(jìn)海，黃志芳，等.附子煎煮過程中酯型生物堿含量的動(dòng)態(tài)變化[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（3）：64 －68.

[5]王兵娥，焦 玉，黃德紅.消腫止痛洗劑的薄層色譜鑒別和烏頭堿限度檢查[J].湖北中醫(yī)雜志，2013，35（4）：72 － 73.

[6]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：220－222，792 －793，附錄Ⅵ D.

[7]艾 嫦，朱妍妍，趙長琦.烏頭屬植物化學(xué)成分、藥理作用及其內(nèi)生菌的研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（2）：248－259.

[8]李夢然，曲 瑋，梁敬鈺.烏頭屬化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2010，22（4）：1 － 6.

[9]黃珍輝，盛文兵，劉艷群，等.阿魏酸酯類衍生物的藥理作用及合成研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（19）：8 －9.

[10]左愛華，王 莉，肖紅斌.藁本內(nèi)酯藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2012，37（22）：3350 －3353.

[11]李德斌，黃志芳，劉云華，等.炮天雄質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（23）：146 － 150.

[12]李麗敏，王欣美，王 柯，等.RP－HPLC測定鎮(zhèn)痛活絡(luò)酊中3 種烏頭類生物堿含量[J].中成藥，2008，30（12）：1785.

[13]毛坤軍，潘以琳，李富強(qiáng)，等.HPLC同時(shí)測定烏七祛風(fēng)散片中4種生物堿的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（22）：74 －77.

[14]崔恩忠，唐安福，劉文雅，等.高效液相色譜法測定益腎丸中特女貞苷含量 [J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2015，28（11）：79 －81.

Quality Standard of Shuangwu Zhitong Tincture

Su Hua， Qian Wenhui，Liao Xin， Bai Ru，Ren Haixiang
（Department of Preparation Division，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command of PLA，Nanjing，Jiangsu，China 210002）

Objective To establish the quality standard of Shuangwu Zhitong Tincture.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification ofRhizoma Arisaematis，Angelica Sinensis and benzoylhypaconine in Shuangwu Zhitong Tincture and the limited quantity of aconitine was determined.HPLC method was used to determine the content of benzoylmesaconitine in Shuangwu Zhitong Tincture，the Inertsustain C18column （250 mm × 4.6 mm，5 μm） was adopted，the mobile phase system was acetonitrile－0.02 mol／L NaH2PO4（25 ∶75），the detection wavelength was set at 230 nm,the column temperature was 30 ℃ ,and the flow rate was 1.0 mL ／min.Results The qualitative identification ofRhizoma Arisaematis， Angelica Sinensis，and benzoylhypaconine in Shuangwu Zhitong Tincture was specific，the limited quantity of aconitine accorded with the regulations.The liner range of benzoylmesaconitine was 0.012 44 －0.099 52 g／L，r＝1.000 0(n ＝5），and the average recovery was 99.36% ，RSD ＝2.45% （n ＝9）.Conclusion The method is simple，accurate and reliable，which can be used for the quality control of Shuangwu Zhitong Tincture.

Shuangwu Zhitong Tincture；benzoylmesaconitine；quality standard；TLC；HPLC

R284.1

A

1006－4931(2017)20－0001－05

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.001

全軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題重點(diǎn)項(xiàng)目[14ZJZ08]。

蘇華（1978－），女，碩士研究生，主管藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑學(xué)和靶向制劑學(xué)，（電子信箱）suhuash＠sina.com。

任海祥（1966－），男，碩士研究生，副主任藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑學(xué)，（電話）025－80860166（電子信箱）rhx1111＠sina.cn。

2017－07－10)