林純忠，王韋達，陳美婷，劉慧強，張 清，杜業(yè)剛

（1.深圳市龍華區(qū)動植物檢驗檢測中心，廣東 深圳 518131；2.深圳市計量質(zhì)量檢測研究院，廣東 深圳 518100）

低共熔溶劑萃取熒光法快速檢測辣椒油中的羅丹明B

林純忠1，王韋達2，陳美婷2，劉慧強2，張 清1，杜業(yè)剛2

（1.深圳市龍華區(qū)動植物檢驗檢測中心，廣東 深圳 518131；2.深圳市計量質(zhì)量檢測研究院，廣東 深圳 518100）

羅丹明B是一種堿性工業(yè)染料，由于它對人體具有潛在的致癌毒性而被禁止添加在食品中。然而，一些不法商販用羅丹明B作為食品著色劑摻雜在辣椒油中。利用由氯化膽堿和乙二醇（摩爾比為1∶3）合成的低共熔溶劑作為提取介質(zhì)，酶標儀作為熒光信號檢測器實現(xiàn)了辣椒油中羅丹明B的快速定性檢測。

羅丹明B；低共熔溶劑；酶標儀；氧雜蒽染料

羅丹明B又稱堿性玫瑰精（分子結(jié)構(gòu)如圖1所示，pKa=3.7），是一種人工合成的氧雜蒽染料，作為熒光試劑被廣泛應用在金屬離子識別，蛋白標記等領(lǐng)域，但由于它對人體存在潛在的致癌、致畸性，被歐洲食品安全局禁止應用于食品中。然而，一些不法商家在利益的誘惑下將羅丹明B用作著色劑對辣椒油進行染色，以增加產(chǎn)品的色澤。盡管食品中羅丹明B的檢測方法已有眾多的報道，例如高效液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫分析法等，但這些方法檢測周期長，不適用于對大批量的辣椒油進行快速篩查。因此，有必要建立一種可以對羅丹明B進行快速定性的檢測方法。近年來，低共熔溶劑作為一類新型綠色環(huán)保溶劑在分離技術(shù)領(lǐng)域引起了廣泛的關(guān)注。楊國武等人發(fā)現(xiàn)，由氯化膽堿和乙二醇按照摩爾比1∶3組成的低共熔溶劑（DES-1）可以從辣椒油中選擇性萃取羅丹明B?？紤]到羅丹明B的熒光特性，我們產(chǎn)生了通過直接讀取提取液熒光信號對羅丹明B進行定性檢測的想法。為了將這一想法付諸實踐，我們利用酶標儀收集了提取液的熒光數(shù)據(jù)。

圖1 羅丹明B分子結(jié)構(gòu)式

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

多功能酶標儀（BioTek SynergyTM HTΧ，美國）；IKAGENIUS 3渦輪器：德國IKA公司；HERMLE Z323高速離心機：德國Hermle-Labortechnik公司；微孔過濾膜（0.22 μm）：美國Millipore公司；離心管（15 mL）：美國康寧公司。

甲醇（色譜純）：Merck公司；正己烷（色譜純）：Merck公司；氯化膽堿（分析純）：Aladdin公司；乙二醇（分析純）：上海凌峰化學公司；羅丹明B標準物質(zhì)（純度95.0%）：Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；羅丹明B溶解于甲醇中制備成儲備液（1.00 mg/L）。低共熔溶劑（DES-1）的合成：稱取27.908 g氯化膽堿和24.811 g乙二醇加入茄形瓶中，氮氣保護下加熱至100℃，磁力攪拌至反應液呈澄清透明狀，冷卻至室溫即可。

1.2 樣品前處理

稱取約1 g樣品，精確至0.001 g，置于15 mL離心管中，分別加入低共熔溶劑（DES-1）和正己烷1.0 mL和5.0 mL，渦旋震蕩1 min，于7 500 rpm離心5 min，用吸管取走上面的正己烷層，向剩余物中再次加入5.0 mL正己烷，渦旋震蕩1 min；于7 800 rpm離心3 min，用吸管取走上面的正己烷層，殘留物用甲醇定容至5.0 mL，過0.22 μm微孔濾膜，供檢測用。

1.3 熒光分析條件

測樣體積為200 μL，激發(fā)波長為530/25 nm，檢測波長為590/35 nm。

2 結(jié)果與討論

實驗結(jié)果如圖2所示，樣品提取液的熒光強度隨著羅丹明B濃度的增加而增強，且單個樣品的熒光檢測過程僅需要數(shù)秒即可完成，大大縮短了樣品的檢測周期。

圖2 羅丹明B不同添加水平的辣椒油提取液的熒光強度圖

實驗結(jié)果說明，辣椒油中是否含有羅丹明B可以通過酶標儀直接讀取樣品提取液的熒光信號進行快速定性，該方法的定性檢出限為200 μg/kg，可應用于大批量辣椒油的快速定性篩查，為保障食品安全提供一種新的便捷技術(shù)。

3 實際樣品檢測

市場隨機抽取辣椒油樣品50份，應用所建立的分析方法對這些樣品進行了羅丹明B的快速定性檢測。實驗結(jié)果顯示，在抽取的辣椒油樣品中未檢測到羅丹明B的特征熒光信號，檢測結(jié)果的準確性也得到了高效液相色譜儀（HPLC）的進一步驗證。另外，在添加羅丹明B的樣品中（添加水平為600 μg/kg），酶標儀均檢測到了較強的熒光信號。說明利用低共熔溶劑（DES-1）萃取結(jié)合酶標儀建立的羅丹明B快速定性方法具有潛在的市場應用價值。

4 結(jié)論

我們首次利用低共熔溶劑萃取結(jié)合酶標儀建立了羅丹明B的定性分析方法，該方法操作簡單，分析快速，可適用于大批量辣椒油的快速篩查工作，為食品安全提供了一種全新的便捷技術(shù)。

［1］陳家逸，蘇偉，王恩舉.基于1，8-萘酰亞胺與羅丹明B間熒光共振能量轉(zhuǎn)移的高選擇性Hg2+比率熒光探針［J］.高等學?；瘜W學報，2016（37）.

［2］王穎，李鐘卉，鐘文英，等.羅丹明B硅納米粒子探針及其在蛋白芯片檢測中的應用［J］.中國科學，2010（40）.

R187

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2017.21.032

2095－6835（2017）21－0032－02

林純忠（1976—），男，廣東揭陽人，碩士，工程師，研究方向為農(nóng)產(chǎn)品安全及食品化學分析。林業(yè)剛（1978—），男，博士，研究方向為食品化學分析。

〔編輯：張思楠〕