傅德江
(福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院,福建 福州 350002;國家加工食品監(jiān)督檢驗中心(福州),福建 福州 350002)
護(hù)手霜中菌落總數(shù)測定用培養(yǎng)基的探討
傅德江
(福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院,福建 福州 350002;國家加工食品監(jiān)督檢驗中心(福州),福建 福州 350002)
檢測化妝品菌落總數(shù)時,為使菌落在培養(yǎng)基中清晰可辨,允許在卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑(以下簡稱TTC)。文章以護(hù)手霜為樣品基質(zhì),分別加入適當(dāng)菌含量的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、酵母工作菌懸液,制備5mg/100mL濃度的TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂,同時以不添加TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行驗證,以營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為對照,對菌落計數(shù)結(jié)果進(jìn)行對比。結(jié)論:添加了5mg/100mLTTC的培養(yǎng)基用于化妝品菌落總數(shù)檢測時對G+有明顯的抑制作用,建議在日常檢測過程中需慎重選擇。
化妝品;菌落計數(shù);TTC
化妝品中富含脂肪、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、無機鹽等營養(yǎng)成分,是微生物良好的碳源和氮源,為微生物的生長、繁殖提供了良好的條件。菌落總數(shù)是判定化妝品被污染程度的標(biāo)志,在實際工作中,乳膏狀樣品常因檢驗樣品含有沉渣給菌落鑒別造成一定的困難。為了有利于菌落計數(shù),在培養(yǎng)基中加入適量的TTC,它能被細(xì)菌還原成為紅色物質(zhì)使菌落呈紅色[1],目前化妝品的微生物學(xué)質(zhì)量及檢驗方法依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版),菌落總數(shù)的檢驗所用培養(yǎng)基為卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,在必要時可以使用5mg/100mL TTC[2]。該濃度TTC對化妝品菌落總數(shù)測定是否有影響,文章通過實驗做一些探討。
5mg/100mL TTC卵磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;磷脂吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;營養(yǎng)瓊脂:北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司;滅菌生理鹽水:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
護(hù)手霜:淘寶。
表1 菌液試驗
表2 樣品對照試驗
表3 驗證試驗
金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希氏菌ATCC25922、酵母ATCC9763、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778,以上菌種均由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供。
高壓滅菌器:日本HIRAYAMA;恒溫培養(yǎng)箱:上海一恒科技有限公司;冰箱:海爾集團(tuán)
分別接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、酵母、蠟樣芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,36℃培養(yǎng)24h,上述培養(yǎng)物用無菌生理鹽水度稀釋,制成每1mL含菌量在30~300CFU的菌懸液。菌液制備后,保存在2~8℃,在24h內(nèi)使用。
取10g護(hù)手霜加入到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中,充分振蕩制成1:10供試液。
分別取2.1中的菌液2mL,分別注入兩個平皿中,加入培養(yǎng)基,于36℃培養(yǎng)48h,測定菌液中的菌落數(shù)。
取2.2中的1:10供試液2mL,分別注入兩個平皿中,加入培養(yǎng)基,于36℃培養(yǎng)48h,測定樣品中的菌落數(shù)。
取2.2中的1:10供試液1mL和2.1中的菌液1mL分別注入同一平皿中,同時做平行,加入培養(yǎng)基,于36℃培養(yǎng)48h,測定菌落數(shù)。
表1結(jié)果表明5mg/100mL TT C對革蘭氏陰性桿菌的生長繁殖無影響,但對革蘭氏陽性葡萄球菌有較強的抑制作用,結(jié)果顯示無細(xì)菌生長。酵母在36℃生長較差,且不顯色[3]。在實際工作中,菌落計數(shù)選擇在30~300CFU之間,菌落容易計數(shù),沒必要加入TTC,減少TTC對細(xì)菌的毒性。如果遇到樣品含較多顆粒,需要添加TTC時可以參考陳得云[4]等試驗在每100mL培養(yǎng)基加入TTC濃度2~3mg,可使多數(shù)菌落顯色且不抑制細(xì)菌的生長。
應(yīng)用TTC指示劑在化妝品菌落總數(shù)測定,便于區(qū)別化妝品中的顆粒與細(xì)菌,結(jié)果易于觀察,計數(shù)快速準(zhǔn)確。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版)中用5mg/100mL濃度的TTC在試驗中菌落均能顯色(酵母除外),但對金黃色葡萄球及蠟樣芽胞桿菌有較強的抑制作用,故在使用TTC進(jìn)行菌落計數(shù)會造成檢測結(jié)果誤差。
[1]李奇英.應(yīng)用TTC顯色測定食品中菌落總數(shù)[J].食品工業(yè)科技,1998,4(2):74-75.
[2]中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理總局.化妝品安全技術(shù)規(guī)范[EB/OL].(2015-12-23)[2017-01-02].http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0053/140161.html.
[3]孔秀珍.在化妝品菌落總數(shù)測定中應(yīng)用TTC的探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,7(2):831-832.
[4]陳得云,胡偉寧.研究TTC在細(xì)菌菌落檢測計數(shù)中的安全用量和應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004.14 :145—146.
10.3969/j.issn.1007-550X.2017.06.004
R117
A
1007-550X(2017)06-0043-03
2017-03-20
傅德江(1986-),男,福建三明人,本科,助理工程師,主要從事食品微生物相關(guān)檢測。