陳 斌,張占俠,趙洪妹,孔佳佳,李勇軍,董 超

（1.石家莊市動物園管理處，河北石家莊050200；2.昌黎縣農(nóng)林畜牧水產(chǎn)局，河北秦皇島066600；3.武安市農(nóng)牧局冶陶動物防疫監(jiān)督站，河北邯鄲056300；4.河北省科學院生物研究所，河北石家莊050081）

納豆芽孢菌劑對黑天鵝在放養(yǎng)初期生長狀態(tài)及抗氧化應(yīng)激的影響

陳 斌1,張占俠1,趙洪妹2,孔佳佳3,李勇軍1,董 超4

（1.石家莊市動物園管理處，河北石家莊050200；2.昌黎縣農(nóng)林畜牧水產(chǎn)局，河北秦皇島066600；3.武安市農(nóng)牧局冶陶動物防疫監(jiān)督站，河北邯鄲056300；4.河北省科學院生物研究所，河北石家莊050081）

[目的]通過記錄比較黑天鵝放養(yǎng)初期生長性能并檢測黑天鵝血清中部分抗氧化指標，探討納豆芽孢菌劑對黑天鵝在放養(yǎng)初期生長性能及抗氧化應(yīng)激的影響。[方法]選取放養(yǎng)初期露天圈養(yǎng)的黑天鵝16只，隨機分為對照組和試驗組，兩組均預飼養(yǎng)5天，之后對照組正常飼養(yǎng)，試驗組基礎(chǔ)日糧中添加10%的納豆芽孢菌劑。飼養(yǎng)35天，記錄全程采食量，測量第1、12、35天體重，于第1、6、12、35天采血并制備血清。測定血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。[結(jié)果]在放養(yǎng)初期應(yīng)激狀態(tài)，正常飼養(yǎng)的黑天鵝，體重和采食量隨機體成長而增加，血清中SOD逐步降低，MDA逐步升高；飼喂納豆芽孢菌劑的黑天鵝，體重增加，采食量下降，血清中SOD逐步升高，MDA逐步降低。[結(jié)論]黑天鵝在放養(yǎng)初期飼喂納豆芽孢菌劑能夠促進消化吸收，提高飼料利用率，提高抗氧化應(yīng)激能力，減少氧化應(yīng)激損傷，保護動物健康。

納豆芽孢菌劑；黑天鵝；超氧化物歧化酶；丙二醛；

新轉(zhuǎn)入動物園人工湖的游禽，由于應(yīng)激因素，機體受到氧化損傷而發(fā)病，在放養(yǎng)初期成活率較低。提高動物抗氧化能力是減輕應(yīng)激傷害的有效方法[1]。納豆芽孢菌劑在反芻動物[2]、黃羽肉雞[3]中進行過臨床應(yīng)用研究，確定有積極作用，但在野生動物方面的應(yīng)用研究較少。

前期研究表明，小天鵝在外放前，應(yīng)用納豆芽孢菌劑后，體質(zhì)明顯增強，外放后6個月的觀察期內(nèi)未出現(xiàn)死亡，臨床效果顯著優(yōu)于以前未應(yīng)用納豆芽孢菌劑的其它珍貴游禽4。本試驗著重探索納豆芽孢菌劑對黑天鵝在放養(yǎng)初期應(yīng)激反應(yīng)中生長性能和抗氧化作用的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和材料

黑天鵝：雁形目、鴨科、天鵝屬。石家莊市動物園同一批次孵化并于育幼室飼養(yǎng)，亞成年體，全部按規(guī)程進行免疫。

納豆芽孢菌劑：由河北省科學院生物研究所研制，為納豆芽孢桿菌發(fā)酵的全產(chǎn)物制劑。活菌含量3×108/g；γ-多聚谷氨酸，含量25mg/g；納豆激酶，含量20000 IU/g；納豆蛋白肽，含量30mg/g。

1.2 試驗設(shè)計

黑天鵝共16只，隨機分成對照組和試驗組，每組8只，均佩帶編號腳環(huán)。對照組和試驗組先進行5日預飼養(yǎng)，均飼喂基礎(chǔ)日糧，記錄采食量，若兩組采食量差異不顯著則進入試驗期，若采食量差異顯著則進行重新分組。對照組：飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗組：在基礎(chǔ)日糧中添加10%的納豆芽孢菌劑。基礎(chǔ)日糧成分詳見表1。

表1 對照組和試驗組日糧組成

1.3 飼養(yǎng)管理

黑天鵝在人工湖湖心島露天圈養(yǎng)，對照組和試驗組分籠飼養(yǎng)。兩組青綠飼料自由采食，自由飲水。

1.4 樣本采集與指標測定

1.4.1 樣本采集

對照組：飼喂基礎(chǔ)日糧，次日清晨將剩余飼料收集并稱重，記錄前一日采食量。試驗組：在基礎(chǔ)日糧中添加10%的納豆芽孢菌劑，次日清晨將剩余飼料收集并稱重，記錄前一日采食量。兩組在試驗第1、12、35天稱量體重。在試驗第1、6、12、35天，于腿部內(nèi)側(cè)采取靜脈血，促凝管儲存，靜止凝血完全后，4000r/min，離心5min，分離并分裝血清，在-20℃保存。

1.4.2 指標測定

采用酶標儀 （Thermo Scientific Multiskan GO,Thermo）測定血清中超氧化物歧化酶（SOD），分光光度計（可見光分光光度計722G,上海儀電分析儀器有限公司）測定血清中丙二醛（MDA）的含量。具體步驟按照試劑盒（南京建成生物工程研究所）說明書操作。

1.5 統(tǒng)計與分析

采用SSPS統(tǒng)計軟件進行獨立樣本T檢驗、配對樣本T檢驗和單因素方差分析，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著，P＞0.05為差異不顯著，數(shù)據(jù)以（均數(shù)±標準差）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 納豆芽孢菌劑對黑天鵝采食和體重影響

選取試驗預飼養(yǎng)期5天（預飼養(yǎng)期），試驗第1-5天（飼養(yǎng)前期），試驗11-15天（飼養(yǎng)中期），試驗31-35天（飼養(yǎng)末期）的采食量進行比較，采食量變化見表2。體重變化見表3。

由表2可知，對照組和試驗組在預飼養(yǎng)期和飼養(yǎng)初期采食量差異不顯著 （p＞0.05）。飼養(yǎng)末期，對照組高于試驗組，差異極顯著（p＜0.01）。

試驗所用黑天鵝處于成長期，通常認為動物隨著成長，采食量和體重會逐步增加。對照組采食量從預飼養(yǎng)期到飼養(yǎng)末期，采食量逐步增加，飼養(yǎng)末期采食量高于飼養(yǎng)前期，差異極顯著（p＜0.01）。試驗組采食量從預飼養(yǎng)期到飼養(yǎng)初期，采食量增加，從飼養(yǎng)初期到飼養(yǎng)末期采食量減少，差異顯著（p＜0.05）。

由表3可知，對照組和試驗組體重均呈現(xiàn)增長趨勢。試驗各階段兩組間體重差異不顯著（p＞0.05），試驗第35天重于第1天，差異極顯著（p＜0.01）。

表2 采食量變化

表3 體重變化

2.2 納豆芽孢菌劑對黑天鵝血液中SOD和MDA的影響

兩組黑天鵝血液中SOD的變化見表4，MDA的變化見表5。

由表4可知，對照組與試驗組第1天SOD差異不顯著（p＞0.05）。 第 6、12、35 天，對照組低于試驗組，差異極顯著（p＜0.01）。對照組第35天SOD低于第1天，差異極顯著（p＜0.01）。試驗組第35天SOD高于第1天，差異極顯著 （p＜0.01）。試驗組第35天與第12天SOD差異不顯著（p＞0.05）。

表4 黑天鵝血液中SOD變化

表5 黑天鵝血液中MDA變化

由表5可知，對照組與試驗組第1天MDA差異不顯著（p＞0.05）。第 6、12、35 天，對照組高于試驗組，差異極顯著（p＜0.01）。對照組第35天MDA高于第1天，差異極顯著（p＜0.01）。對照組第35天MDA與第12天差異不顯著 （p＞0.05）。試驗組第35天MDA低于第1天，差異極顯著（p＜0.01）。試驗組第35天MDA與第12天差異不顯著（p＞0.05）。

3 討論

動物正常狀態(tài)下，自由基的產(chǎn)生和清除處于動態(tài)平衡中[5]。黑天鵝從籠舍環(huán)境進入比較嚴峻的露天圈養(yǎng)時，應(yīng)激較為嚴重和持久，使得機體的氧化和抗氧化能力失衡，損傷機體正常機能，引發(fā)疾病。再次出現(xiàn)其它應(yīng)激時，比如露天圈養(yǎng)之后的外放飼養(yǎng)，抵抗能力極大削弱，造成死亡[6]。

3.1 納豆芽孢菌劑對放養(yǎng)初期黑天鵝采食和體重的影響及分析

預試驗期和試驗初期，兩組間沒有顯著差異，說明試驗動物分配均勻合理，體質(zhì)相當。試驗所用黑天鵝處于成長期，通常認為動物隨著成長，體重和采食量會逐步增加。對照組的體重和采食量符合這個情況，且試驗末期體重和采食量呈現(xiàn)顯著增加。試驗組出現(xiàn)了不同情況。試驗組體重隨著成長逐步增加，但是采食量卻逐步減少，試驗末期體重顯著增加，采食量顯著減少。試驗組并沒有因采食減少而導致生長放緩。說明添加納豆芽孢菌劑后黑天鵝對飼料的吸收和利用度顯著增加。試驗組黑天鵝體重逐步增加，且與對照組沒有顯著差異，但是組內(nèi)個體的整齊度要優(yōu)于對照組。試驗末期，對照組內(nèi)個體體重差異比較明顯，體重更大的個體對于體重較輕的個體具有采食和行動的優(yōu)先權(quán)。體重輕的個體在外放后，爭取不到足夠的食物和空間，而被淘汰。添加納豆芽孢菌劑后，有利于黑天鵝外放后減少甚至避免個體競爭導致的死亡。

應(yīng)激狀態(tài)下，動物自身分泌的消化酶不充足，導致飼料中營養(yǎng)消化率低，而未被消化營養(yǎng)物質(zhì)到達后腸道時，被致病菌利用，導致有害菌增值。納豆芽孢桿菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生納豆激酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等，這些酶類構(gòu)成龐大的細胞外消化體系，彌補機體消化酶分泌不足，促進飼料的消化。納豆芽孢桿菌在腸道定植，競爭性抑制有害菌增值，減少腸道損傷，也是促進消化吸收的一個方面。納豆芽孢菌劑中含有γ-多聚谷氨酸，它作為活性載體[7]，具有良好的生物相容性，能夠與納豆制劑中肽類、酶類、納豆菌體等結(jié)合，保護活性物質(zhì)通過胃，到達小腸，同時作為緩釋劑持續(xù)釋放這些活性物質(zhì)，使得機體吸收更加充分。

3.2 納豆芽孢菌劑對放養(yǎng)初期黑天鵝血液中SOD和MDA的影響

SOD是機體抗氧化酶促系統(tǒng)最重要的成員，能有效清除超氧自由基，保護細胞免受損傷。本研究顯示，在放養(yǎng)初期應(yīng)激狀態(tài)下，對照組血液中SOD水平顯著下降，這說明SOD被過分消耗或者生成受到抑制。試驗組血液中SOD，從第6天到第12天時出現(xiàn)顯著升高，再到第35天雖然繼續(xù)升高，但差異不顯著。從試驗第6天開始，試驗組血液中SOD含量顯著高于對照組，這個差異隨時間而逐漸擴大，在試驗第12天，試驗組血液中SOD含量極顯著高于對照組，說明試驗組抗氧化能力極顯著的高于對照組。這說明添加納豆芽孢菌劑后需要一段時間才能顯著提高機體的抗氧化損傷能力，但是當抗氧化能力達到一定水平時，不會繼續(xù)提高，而是維持在這個水平上。

MDA是氧自由基會攻擊細胞產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化物之一，是毒性最大的一種。因此通過MDA的測定可反映機體氧化損傷細胞的程度[8]。本研究顯示，在放養(yǎng)初期應(yīng)激狀態(tài)下，對照組血液中MDA顯著增加，但是經(jīng)過一定時間（12天）就不在顯著增加。試驗組血液中MDA顯著減少，但經(jīng)過一定時間（12天）也不在顯著減少。從試驗第6天開始，試驗組血液中MDA含量顯著高于對照組，這個差異隨時間而逐漸擴大，在試驗第12天，試驗組血液中MDA含量極顯著高于對照組，說明試驗組收到的氧化損傷極顯著的低于對照組。

飼喂納豆芽孢菌劑提高黑天鵝抗氧化應(yīng)激的能力，一方面是因為飼喂納豆芽孢菌劑的黑天鵝消化吸收能力增強，體質(zhì)改善，自身調(diào)節(jié)機制恢復；另一方面，納豆芽孢菌劑中的SOD、納豆蛋白肽、納豆異黃酮、維生素E、卵磷脂和不飽和脂肪酸發(fā)揮積極做用。有研究顯示[9]納豆中含有SOD，這部分SOD可直接吸收。本研究顯示飼喂納豆芽孢菌劑的黑天鵝血液中SOD含量顯著增加，一方面是體質(zhì)增強，自身形成足量SOD；另一方面是納豆芽孢菌劑補充了SOD。試驗用的納豆芽孢菌劑（河北省科學院生物研究所研制）中納豆蛋白肽含量高達30mg/g，按精飼料量添加10%的納豆芽孢菌劑，則每公斤飼料相當于添加入3000mg納豆蛋白肽。有研究顯示高劑量的植物蛋白肽，短期添加，能有效增加動物血液中SOD活性，降低MDA含量，提高總抗氧化能力[10、11]。

綜合上述情況，添加納豆芽孢菌劑后，可以顯著提高放養(yǎng)初期黑天鵝的抗氧化應(yīng)激能力，顯著降低氧化應(yīng)激對機體的損傷。

4 結(jié)論

納豆芽孢菌劑提高黑天鵝放養(yǎng)初期的生長性能和抗氧化應(yīng)激能力，是一個復雜的增效體系，通過同時提高消化吸收能力、增加抗氧化物質(zhì)產(chǎn)生、減少過氧化物產(chǎn)生實現(xiàn)。試驗說明，納豆芽孢菌劑能夠促進放養(yǎng)初期黑天鵝的消化吸收，能夠快速提高動物抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷，修復機體功能，提高動物生長性能。

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S858.3

A

1003-8655（2017）05-0094-04

石家莊市科學技術(shù)研究與發(fā)展計劃（161500182A）

陳斌（1980-），河北保定人，碩士，獸醫(yī)師，野生動物疾病防治，電子信箱：49343147@qq.com。