干眼治療中角膜樹突細(xì)胞的觀察研究

徐良丁亞莉

目的觀察干眼治療中角膜樹突細(xì)胞密度的變化。方法收集2015年5月至2016年5月我院診治的45例干眼患者的共聚焦顯微鏡檢查及復(fù)查結(jié)果，分析其治療前后角膜樹突細(xì)胞的密度變化。結(jié)果輕度患者16例，占35.6%，中度患者23例，占51.1%，重度患者6例，占13.3%。入組患者經(jīng)上述治療，癥狀及體征均有所改善。對(duì)每級(jí)患者治療前后的細(xì)胞密度均采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，治療后角膜樹突細(xì)胞密度明顯少于治療前，P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論我們利用共聚焦顯微鏡技術(shù)，通過在干眼治療及隨訪期間對(duì)樹突細(xì)胞密度進(jìn)行監(jiān)測，可以對(duì)抗炎時(shí)機(jī)的選擇及抗炎治療的效果做到精確的評(píng)估，也為干眼的抗炎治療提供了客觀依據(jù)。

角膜樹突細(xì)胞；干眼；共聚焦顯微鏡

干眼在世界范圍內(nèi)都是一種極為常見的眼表疾病，尤其近年來隨著社會(huì)信息化的發(fā)展,特別是在與視頻終端經(jīng)常接觸的人群中,其患病率增高尤其明顯。炎癥反應(yīng)在干眼的發(fā)病過程中扮演著重要角色，抗炎治療也是干眼治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。隨著活體共聚焦顯微鏡的出現(xiàn)，將我們對(duì)于干眼的觀察從宏觀引向了微觀，可以更加精確的觀察到干眼患者眼表組織的細(xì)微病理變化，特別是炎癥細(xì)胞質(zhì)和量的變化，使我們更加準(zhǔn)確客觀的治療干眼成為可能?，F(xiàn)總結(jié)我院于2015年5月至2016年5月收治的45例干眼患者的共焦顯微鏡檢查及復(fù)查結(jié)果，分析其治療前后角膜樹突細(xì)胞的密度變化，報(bào)告如下。

資料與方法

一、一般資料

我們選取2015年5月至2016年5月收治的45例雙眼新發(fā)干眼患者(排除干燥綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等全身免疫疾病)，治療前后均行共聚焦顯微鏡檢查。干眼的診斷及分級(jí)采用2013年干眼臨床診療專家共識(shí)[1]：(1)有干燥感、異物感、疲勞感、燒灼感、不適感、視力波動(dòng)等主觀癥狀之一和BUT≤5 s或Schirmer I試驗(yàn)≤5 mm/5 min可診斷干眼；(2)有上述主觀癥狀之一和5 s

二、檢查方法

采用德國海德堡激光共聚焦顯微鏡HRT-Ⅱ型(角膜模式)對(duì)患者進(jìn)行檢查。放大倍數(shù)為800倍，掃描深度為1500 μm，檢查時(shí),于患者結(jié)膜囊內(nèi)滴1滴鹽酸奧布卡因滴眼液(10 g/L)，表麻后選取矢狀軸掃描，對(duì)掃描后的角膜圖片，采用Image J軟件進(jìn)行處理，測定樹突細(xì)胞密度。

三、分析方法

本組45例患者(90只眼)治療前均行共聚焦顯微鏡檢查，根據(jù)干眼嚴(yán)重程度分級(jí)，輕度患者給予人工淚液點(diǎn)眼(0.3%玻璃酸鈉滴眼液，每天4～6次)，并囑患者改變不良生活方式。中、重患者加用低濃度糖皮質(zhì)激素點(diǎn)眼(0.02%氟米龍滴眼液，初始頻率為每天3次，好轉(zhuǎn)后逐漸減量)。在治療2周后復(fù)查共聚焦顯微鏡，觀察角膜樹突細(xì)胞，采用Image J圖像處理軟件對(duì)角膜樹突細(xì)胞密度進(jìn)行量化處理(隨機(jī)選取5幅圖像，統(tǒng)計(jì)每幅圖像的樹突細(xì)胞數(shù)量，取平均值，每幅圖像面積為0.16 mm2)。采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，分析其治療前后密度變化有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

根據(jù)干眼程度分級(jí)，輕度患者(圖1)16例，占35.6%，中度患者23例，占51.1%，重度患者(圖2)6例，占13.3%。入組患者經(jīng)上述治療，癥狀及體征均有所改善。對(duì)每級(jí)患者治療前后的細(xì)胞密度均采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，治療后角膜樹突細(xì)胞密度(圖3)明顯少于治療前，P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

圖1 輕度干眼患者角膜內(nèi)皮樹突細(xì)胞數(shù)較少，且大部分處于未激活狀態(tài)，呈短棒狀、橢圓形圖2 重度干眼患者角膜內(nèi)皮樹突細(xì)胞數(shù)大量增加，且處于激活狀態(tài)，呈偽足樣突起的粗大細(xì)胞圖3 經(jīng)規(guī)范治療后，樹突細(xì)胞密度明顯減少

表1 治療前后干眼患者角膜樹突細(xì)胞密度值

注：各組治療前后比較，均P<0.05

討 論

2013年干眼診療臨床專家共識(shí)[2]中在中重度干眼的治療方案里特別提出了抗炎治療，足以說明炎癥反應(yīng)在干眼的發(fā)病及發(fā)展過程中所扮演的角色相當(dāng)重要，而干眼的炎癥改變反映在細(xì)胞水平主要變現(xiàn)為角膜樹突細(xì)胞的活化和數(shù)量的增多[2]，這也是我們可以利用共聚焦顯微鏡能夠定量分析的客觀指標(biāo)之一。角膜樹突細(xì)胞是上皮來源的朗格漢斯細(xì)胞，它們的任務(wù)是誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的聚集并激活T淋巴細(xì)胞來控制角膜的炎癥反應(yīng)。正常成人的角膜樹突細(xì)胞一般位于角膜神經(jīng)纖維附近,角膜中央?yún)^(qū)樹突細(xì)胞的密度明顯少于角膜周邊區(qū)[3]。國外有研究報(bào)道[4]健康角膜中央?yún)^(qū)的樹突細(xì)胞密度為(34.9±5.7)/mm2，而干燥綜合征患者的角膜中央樹突細(xì)胞密度為(127.9±23.7)/mm2，非干燥綜合征相關(guān)性干眼患者角膜中央樹突細(xì)胞密度為(89.8±10.8)/mm2，明顯高于健康人。因此，有國外學(xué)者認(rèn)為5]干眼的本質(zhì)就是眼表局部的慢性炎癥，而導(dǎo)致這種炎癥改變的原因則是眼表的促炎反應(yīng)和保護(hù)性免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的失衡。

綜上所述，抗炎治療是干眼治療中非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，隨著對(duì)干眼抗炎治療研究的不斷深入，如何能夠更加合理、客觀、精確的選擇抗炎藥物及抗炎時(shí)機(jī)，成為未來干眼治療的發(fā)展趨勢。我們利用共聚焦顯微鏡技術(shù)，通過在干眼治療及隨訪期間對(duì)樹突細(xì)胞密度進(jìn)行監(jiān)測，可以對(duì)抗炎時(shí)機(jī)的選擇及抗炎治療的效果做到精確的評(píng)估，也為干眼的抗炎治療提供了客觀依據(jù)。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)眼科學(xué)分會(huì)角膜病學(xué)組.干眼臨床診療專家共識(shí)(2013).中華眼科雜志,2013,49:73-75.

[2] Hattori T,Chauhan SK,Lee H ,et al .Characterization of Langerin-expressing dendritic cell subsets in the normalcornea.Invest Ophthalmol Vis Sci,2011,52:4598-4604.

[3] Cruzat A，Witkin D，Baniasadi N，et al．Inflammation and the nervous system：the connection in the cornea in patients with infectious keratitis .Invest Ophthalmol Vis Sci，2011，52：5136-5143.

[4] Lin H，Li W，Dong N，et al．Changes in corneal epithelial layer inflammatory cells in aqueous tear-defcient dry eye．Invest Ophthalmol Vis Sci，2010，51：122-128.

[5] Stern ME， Schaumburg CS，Pflugfelder SC．Dry eye as a mucosal autoimmune disease．Int Rev Immunol，2013，32：19-41.

Researchonthecornealdendriticcellsinthetreatmentofdryeye

XuLiang,DingYali.

NanyangEyeHospital,Nanyang,Henan473000,China

ObjectiveObserve the density of corneal dendritic cells in the treatment of dry eye.MethodsTo collect the results of 56 cases of dry eye patients in our hospital from May 2015 to May 2016, and to review the changes of density of corneal dendritic cells before and after treatment.Results16 patients (35.6%) were mild dry eye, 23 patients (51.1%) moderate and 6 patients (13.3%)were severe. After the treatment, symptoms and signs improved in all patients. Cell density before and after each stage were compared using a paired t-test.After treatment, corneal dendritic cell density was significantly lower (P<0.05).ConclusionsWe used in vivo confocal microscopy during the treatment and follow-up to monitorthe density of dendritic cells.Confocal microscopy can give an accurate and objective assessment on the timing and effects of anti-inflammatory treatment.

Dendritic cell; Dry eye; Invivo confocal microscopy

[JClinOphthalmol,2017,25:426]

10.3969/j.issn.1006-8422.2017.05.013

473000 河南省南陽市眼科醫(yī)院

徐良(Email:xuliangking@126.com)

[臨床眼科雜志，2017，25：426]

(收稿：2017-03-18)