呂 冰，尹帥星，陳達(dá)煒*，方從容，周 爽，趙云峰

(1.國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心/衛(wèi)生部食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021;2.島津技邇(上海)商貿(mào)有限公司，北京 100027)

QuEChERS-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜測定動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物殘留

呂 冰1，尹帥星2，陳達(dá)煒1*，方從容1，周 爽1，趙云峰1

(1.國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心/衛(wèi)生部食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021;2.島津技邇(上海)商貿(mào)有限公司，北京 100027)

基于低溫處理和QuEChERS方法，采用超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜建立了動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物殘留的分析檢測方法。樣品采用乙腈提取，經(jīng)低溫處理，N-丙基乙二胺(PSA)和C18粉分散固相萃取(d-SPE)凈化，以BEH C18色譜柱為分析柱，乙腈-0.1%乙酸溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫分離，外標(biāo)法定量。采用高分辨質(zhì)譜平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)掃描模式，以負(fù)離子采集進(jìn)行定性篩查和定量分析。氟蟲腈及其代謝物在0.02～2 μg/L和0.2～20 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)大于0.992。對(duì)液體或半液體樣品(如牛奶和雞蛋)和固體樣品(如雞肉)，方法的定量下限分別為0.1 μg/kg和 0.2 μg/kg。在不同濃度的加標(biāo)水平下，氟蟲腈及其代謝物在雞蛋中的平均回收率為81.6%～96.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.3%～11.5%；在雞肉中的平均回收率為81.2%～96.0%，RSD為3.4%～11.4%；在牛奶中的平均回收率為79.1%～100.1%，RSD為1.5%～10.7%。該方法簡單、靈敏、準(zhǔn)確，適用于動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的快速篩查和定量檢測，方法的靈敏度滿足歐盟的殘留限量要求。

氟蟲腈；動(dòng)物性食品；QuEChERS；高分辨質(zhì)譜；代謝物

氟蟲腈是一種苯基吡唑類殺蟲劑，主要用于殺滅鱗翅目和直翅目的害蟲以及在土壤中的鞘翅目害蟲的幼蟲，同時(shí)用以消除蚤、虱、蜱、蟑螂及螨等昆蟲[1]。近期，歐洲多國相繼報(bào)道在雞蛋中超標(biāo)檢出殺蟲劑“氟蟲腈”事件，并導(dǎo)致歐盟多國近千萬枚雞蛋下架[2]。由于短期大量攝入氟蟲腈會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響，而長期攝取氟蟲腈或會(huì)導(dǎo)致肝臟、甲狀腺等受損[3-4]，歐盟已明令禁止氟蟲腈用于人類食品產(chǎn)業(yè)鏈的畜禽養(yǎng)殖過程，并規(guī)定氟蟲腈(氟蟲腈和氟蟲腈砜之和，以氟蟲腈計(jì))在雞蛋中的最大殘留限量(MRL)為0.005 mg/kg。國際食品法典委員會(huì)(CAC)規(guī)定氟蟲腈在肉、蛋、奶中的MRL均為0.02 mg/kg。我國也制定了氟蟲腈在蔬菜、谷類等制品中的MRL，并將氟蟲腈的殘留物定義為氟蟲腈、氟甲腈(MB46513)、氟蟲腈砜(MB46136)、氟蟲腈亞砜(MB45950)之和[5]，但暫無在動(dòng)物性食品中的MRL規(guī)定。因此，建立動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的高效、快速的殘留檢測方法，以應(yīng)對(duì)可能因“氟蟲腈”事件引發(fā)的雞蛋、雞肉和牛奶等動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的檢測需要，對(duì)保障動(dòng)物性相關(guān)食品安全具有重要意義。

氟蟲腈及其代謝物的測定方法主要有氣相色譜法(GC)[6]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[6-8]、液相色譜法(HPLC)[9]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[10-12]。但這些檢測方法均是應(yīng)用于植物性樣品等基質(zhì)，而動(dòng)物性樣品的檢測分析方法鮮見報(bào)道。Zhang等[13]利用C18固相萃取柱結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了雞蛋和雞肉中氟蟲腈的分析方法，但該方法未對(duì)氟蟲腈的代謝物進(jìn)行檢測。世界糧農(nóng)組織(FAO)在氟蟲腈的評(píng)估報(bào)告中指出氟蟲腈在動(dòng)物體內(nèi)的氟蟲腈母體絕大部分轉(zhuǎn)化為氟蟲腈砜，后者在蛋黃、皮和脂肪中濃度最高[14]。因此，氟蟲腈母體在動(dòng)物性樣品中檢出含量較低，而氟蟲腈砜或其它代謝物將是檢測關(guān)注的重點(diǎn)。近年來，QTOF及Orbitrap等高分辨質(zhì)譜檢測技術(shù)在農(nóng)獸藥等化學(xué)污染物的檢測分析中得到廣泛應(yīng)用[15-17]。然而，高分辨質(zhì)譜技術(shù)對(duì)目標(biāo)物的定量檢測分析主要采用全掃描模式(Full scan,FS)，與三重四極桿的多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)相比，無法獲得較佳的儀器方法靈敏度。在前期研究中，本課題組應(yīng)用四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜(Q Exactive)的其它定量掃描模式，如靶向單一離子監(jiān)測(Target single ion monitoring,TSIM)[18-19]和平行反應(yīng)監(jiān)測(Parallel reaction monitoring,PRM)[20]，改善了儀器方法的靈敏度，可與三重四極桿的MRM模式相媲美。

本研究采用QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)方法，以乙腈作為提取溶劑，經(jīng)鹽析后，提取液經(jīng)低溫冷凍處理和分散固相萃取(d-SPE)凈化，基于超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜的PRM模式，首次建立了動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物殘留的分析方法。方法的靈敏度滿足歐盟的殘留限量要求，為動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的高效、快速測定提供了技術(shù)保障。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀(Q-Exactive，美國賽默飛公司)、組織勻漿機(jī)(德國博朗公司)、渦旋混合器(美國Scientific Industries公司)、超聲波清洗器(寧波科生儀器廠)和冷凍離心機(jī)(德國Sigma公司)。

乙腈為色譜純(美國Fisher Scientific公司)，乙酸為HPLC級(jí)(美國Tedia公司)；氯化鈉和無水硫酸鈉為分析純(國藥試劑有限公司)；d-SPE凈化管，內(nèi)含N-丙基乙二胺(PSA)50 mg、C18粉50 mg和無水硫酸鈉250 mg(島津技邇(上海)商貿(mào)有限公司)；氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈砜和氟蟲腈亞砜標(biāo)準(zhǔn)品(純度>98%)購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水。實(shí)際樣品(雞蛋、雞肉、豬肉、豬肝和牛奶等)采購于北京各大超市和農(nóng)貿(mào)市場。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g(精確至0.000 1 g)于不同的10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-20 ℃儲(chǔ)存。氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)混合中間液(10 mg/L)和標(biāo)準(zhǔn)混合使用液(200 μg/L和20 μg/L)由乙腈逐級(jí)稀釋氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制得。準(zhǔn)確吸取氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)混合使用液(20 μg/L和200 μg/L)0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用50%乙腈水溶液定容，即得0.02～2 μg/L和0.2～20 μg/L質(zhì)量濃度范圍的兩套標(biāo)準(zhǔn)工作液，臨用現(xiàn)配。

1.3 試樣制備

取代表性動(dòng)物性樣品，用組織勻漿機(jī)充分?jǐn)囁榇騽?，取其?00 g分裝入潔凈容器中，密封，于-20 ℃保存。

1.4 試樣提取

1.4.1液體與半液體試樣準(zhǔn)確稱取樣品5.0 g(精確至0.001 g)，置于50 mL離心管中，渦旋混合30 s，加入10 mL乙腈，超聲提取15 min，加入2 g氯化鈉和6 g無水硫酸鈉，渦旋混合30 s，以9 500 r/min于4 ℃離心10 min，轉(zhuǎn)移上清液于15 mL離心管，待凈化。

1.4.2固體試樣準(zhǔn)確稱取樣品2.0 g(精確至0.001 g)，置于50 mL離心管中，加水3 mL，渦旋混合30 s，以下操作程序同“1.4.1”，并將上清提取液置于-20 ℃超低溫冰箱中低溫冷凍處理2 h后，待凈化。

1.5 試樣凈化

準(zhǔn)確吸取提取液1 mL于2 mL的 d-SPE凈化管中，渦旋混合30 s，取上清液0.5 mL，加水定容至1 mL，過有機(jī)微孔濾膜后，待測定。

1.6 儀器分析條件

色譜條件：BEH C18色譜柱(1.7 μm,2.1 mm×100 mm)，柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：A為0.1%乙酸溶液，B為乙腈，梯度洗脫，流速0.3 mL/min。梯度洗脫程序：0～6 min，55%～70% B；6～7 min，70%～100% B；7～8 min， 100% B；8～8.5 min，100%～55% B；8.5～11 min，55% B。進(jìn)樣體積：5 μL。

質(zhì)譜參數(shù)：采用HESI離子化方式；噴霧電壓為3.2 kV；毛細(xì)管溫度為320 ℃；加熱溫度為300 ℃；鞘氣為40 arb，輔助氣為10 arb；掃描模式為平行反應(yīng)監(jiān)測(PRM)，負(fù)離子采集模式；分辨率采用70 000 FWHM，碰撞能量(NCE)為20%。氟蟲腈及其代謝物的定性、定量離子對(duì)見表1。

表1 氟蟲腈及其代謝物的母離子和子離子信息Table 1 The information for parent and daughter ions of fipronil and its metabolites

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜與色譜條件的優(yōu)化

在質(zhì)譜響應(yīng)上，氟蟲腈及其代謝物的負(fù)離子采集模式優(yōu)于正離子采集模式。本研究比較了Q Exactive高分辨質(zhì)譜的FS、TSIM和PRM 3種定量采集模式。其中，F(xiàn)S采集模式是高分辨質(zhì)譜最為常用的定量模式，該模式是對(duì)一定質(zhì)量范圍內(nèi)的所有母離子進(jìn)行全掃描，TSIM采集模式是對(duì)單一母離子進(jìn)行掃描，而PRM采集模式是先從四極桿中選擇目標(biāo)母離子，然后將其送入高能碰撞池進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜碎裂，最后以母離子->子離子的精確質(zhì)量數(shù)離子對(duì)進(jìn)行定量，與三重四極桿以離子對(duì)為定量手段相似，但其高分辨質(zhì)譜的檢測能力增強(qiáng)了定性確證的能力，同時(shí)由于該模式可通過監(jiān)測其子離子的精確質(zhì)量數(shù)進(jìn)一步降低背景噪音響應(yīng)，從而提高了儀器的靈敏度。因此，本研究采用PRM模式對(duì)氟蟲腈及其代謝物進(jìn)行定性和定量采集。在PRM模式下，本研究進(jìn)一步對(duì)二級(jí)質(zhì)譜的碰撞能量(NCE)進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果顯示，氟蟲腈及其代謝物在20%的NCE下能夠獲得最佳的二級(jí)質(zhì)譜定量離子響應(yīng)。圖1A為氟蟲腈母離子在20%的NCE下所采集的二級(jí)質(zhì)譜圖譜，該圖譜包含了未被碎裂的母離子精確質(zhì)量數(shù)(m/z434.931 4)與二級(jí)質(zhì)譜子離子的精確質(zhì)量數(shù)(m/z329.959 5,249.958 1)，而圖1B則為該農(nóng)藥的二級(jí)質(zhì)譜定量子離子(m/z329.959 5)的提取離子色譜圖。

本研究采用BEH C18色譜柱，考察了氟蟲腈及其代謝物在乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸或乙酸水溶液、乙腈-5 mmol/L甲酸銨或乙酸銨水溶液為流動(dòng)相體系下的峰形及質(zhì)譜響應(yīng)效果。結(jié)果表明，氟蟲腈及其代謝物在中性或偏堿性流動(dòng)相體系下峰寬更寬，且氟蟲腈砜在酸性流動(dòng)相體系下具有更好的質(zhì)譜響應(yīng)，該現(xiàn)象與文獻(xiàn)報(bào)道相符[21]；而在酸性流動(dòng)相體系下，鑒于流動(dòng)相過低的pH值會(huì)抑制氟蟲腈及其代謝物的響應(yīng)，因此以乙腈和0.1%乙酸水溶液作為流動(dòng)相體系。圖2為此流動(dòng)相體系下所獲得的氟蟲腈及其代謝物的色譜圖。

2.2 樣品前處理方法的選擇

目前，乙腈作為提取溶劑具有較高的沉淀蛋白能力，對(duì)親脂性目標(biāo)物具有較好的提取效果，同時(shí)有助于下一步QuEChERS的凈化，因而在動(dòng)物性食品中具有較好的應(yīng)用[22]，對(duì)于固體樣品(如雞肉)，需預(yù)先加入3 mL 水并對(duì)其充分混勻，再用乙腈進(jìn)行提取，以提高對(duì)目標(biāo)物的提取效率。QuEChERS前處理方法由Anastassiades等[23]于2003年開發(fā)，其基于d-SPE技術(shù)被廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥多殘留檢測。本研究采用PSA和C18對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化，其中PSA能有效去除提取液中的極性物質(zhì)、有機(jī)酸和脂肪酸等雜質(zhì)；而C18對(duì)親脂性雜質(zhì)，尤其是脂肪等物質(zhì)具有較好的吸附效果。此外，本研究取1 mL樣品提取液進(jìn)行凈化，50 mg的PSA和50 mg的C18足以達(dá)到凈化效果，當(dāng)進(jìn)一步增加吸附劑填料對(duì)凈化效果并無明顯改善，同時(shí)當(dāng)C18的填料加到100 mg時(shí)，對(duì)親脂性的氟蟲腈及其代謝物會(huì)有一定程度的吸附，導(dǎo)致回收率下降7%～12%。因此，本研究采用內(nèi)含50 mg的PSA、50 mg的C18和250 mg無水硫酸鈉的d-SPE凈化管進(jìn)行凈化。

雞肉等固體動(dòng)物性食品基質(zhì)較為復(fù)雜，脂肪含量較高，單純依靠d-SPE凈化無法滿足去除脂肪的需要。因此為更好地去除脂肪，本研究在進(jìn)行d-SPE凈化前，先將提取液置-20 ℃超低溫冰箱中低溫冷凍處理，并對(duì)冷凍處理時(shí)間進(jìn)行了考察(30 min、1 h、2 h、6 h)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提取液冷凍處理2 h后可以達(dá)到較好的去除效果，而增加處理時(shí)間對(duì)去除效果并無明顯改進(jìn)，故選擇在d-SPE凈化前先對(duì)雞肉提取液進(jìn)行2 h的冷凍處理。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

按照“1.4”和“1.5”方法將試樣提取凈化，制備雞蛋、雞肉和牛奶3種空白基質(zhì)提取液，對(duì)空白基質(zhì)提取液進(jìn)行分析，確定其不含有痕量目標(biāo)化合物。用50%的乙腈水溶液及雞蛋、雞肉和牛奶3種空白基質(zhì)提取液分別配制濃度范圍為0.02～2 μg/L和0.2～20 μg/L的兩套混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。本研究依據(jù)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比值評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)，斜率值越接近1.0說明基質(zhì)效應(yīng)越弱。當(dāng)斜率比值在0.8～1.2范圍，認(rèn)為該方法的基質(zhì)效應(yīng)可以接受[24]。本方法在低濃度和高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi)對(duì)氟蟲腈及其代謝物的基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)如表2所示，雞蛋、雞肉和牛奶的斜率比值范圍在0.9～1.1之間，表明本方法中氟蟲腈及其代謝物在雞蛋、雞肉和牛奶中存在弱的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測定結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)，因而本實(shí)驗(yàn)采用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

表2 氟蟲腈及其代謝物的線性、基質(zhì)效應(yīng)、檢出限及定量下限Table 2 Linear relationship,matrix effect，LOD and LOQ of fipronil and its metabolites

-:no data

2.4 線性范圍與定量下限

本研究配制兩套氟蟲腈及其代謝物的低高濃度系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度范圍分別為0.02～2 μg/L和0.2～20 μg/L，以滿足不同濃度水平下實(shí)際樣品和加標(biāo)樣品的檢測。按“1.6”條件進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(X,μg/L)為橫坐標(biāo)，母離子->子離子對(duì)的精確質(zhì)量數(shù)的提取離子色譜峰峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，氟蟲腈及其代謝物在0.02～2 μg/L和0.2～20 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)>0.992。以空白樣品低水平加標(biāo)測試方法的檢出限和定量下限，以3倍信噪比(S/N=3)對(duì)應(yīng)的濃度為方法檢出限，以10倍信噪比(S/N=10)對(duì)應(yīng)的濃度為方法的定量下限。表2結(jié)果顯示，液體或半液體樣品(如牛奶和雞蛋)取樣量5 g時(shí)，氟蟲腈及其代謝物的方法檢出限(LOD)為0.05 μg/kg，定量下限(LOQ)為0.1 μg/kg；固體樣品(如雞肉)取樣量2 g時(shí)，氟蟲腈及其代謝物的方法檢出限為0.1 μg/kg，定量下限為0.2 μg/kg。該方法的定量下限均低于歐盟所制定的蛋類中氟蟲腈的最大殘留限量(5 μg/kg)和CAC所制定的蛋類中氟蟲腈的最大殘留限量(20 μg/kg)。

2.5 準(zhǔn)確度與精密度

本研究取3種代表性樣品(雞蛋、雞肉和牛奶)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，以回收率考察方法的準(zhǔn)確度，回收率平行測試結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)考察方法的精密度。加標(biāo)水平的選擇以接近定量下限水平的0.2 μg/kg為低加標(biāo)水平，以歐盟制定的蛋類中氟蟲腈的最大殘留限量5 μg/kg為中加標(biāo)水平，以CAC制定的蛋類中氟蟲腈的最大殘留限量20 μg/kg為高加標(biāo)水平。取雞蛋、雞肉和牛奶3種空白樣品分別添加低、中和高加標(biāo)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后，搖勻，放置一定時(shí)間后，按照本方法處理，每個(gè)濃度水平重復(fù)5次，其回收率和RSD結(jié)果見表3。由表3可見,氟蟲腈及其代謝物在雞蛋中的平均回收率為81.6%～96.9%，RSD為1.3%～11.5%；在雞肉中的平均回收率為81.2%～96.0%，RSD為3.4%～11.4%；而在牛奶中的平均回收率為79.1%～100.1%，RSD為1.5%～10.7%。

表3 不同加標(biāo)水平下的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 3 Recovery and relative standard deviation of different spiked levels

2.6 實(shí)際樣品的測定

采用本方法檢測市售31份雞蛋、3份雞肉、6份豬肉、4份豬肝和5份牛奶等樣品中的氟蟲腈及其代謝物殘留，結(jié)果顯示，在雞肉、豬肉、豬肝和牛奶樣品中均未檢測到氟蟲腈及其代謝物，但有8份雞蛋樣品中檢出氟蟲腈砜，含量為0.13～1.1 μg/kg，低于歐盟所規(guī)定的最大殘留限量。

3 結(jié) 論

本文采用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合冷凍處理和分散固相萃取凈化，首次建立了動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的分析方法，并應(yīng)用于實(shí)際樣品定性和定量的快速篩查分析。本方法具有樣品前處理操作簡單、價(jià)格低和基質(zhì)效應(yīng)低等特點(diǎn)，有利于快速監(jiān)測動(dòng)物性食品中氟蟲腈及其代謝物的殘留情況；高分辨質(zhì)譜技術(shù)的PRM掃描模式與三重四極桿MRM模式相似，但由于其提供精確的碎片質(zhì)量數(shù)，可進(jìn)一步降低背景噪音的干擾，提高檢測方法的靈敏度。

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Determination of Fipronil and Its Metabolites in Animal Derived Foods by QuEChERSMethod Combined with Ultra Performance Liquid Chromatography-High-resolution Benchtop Q Exactive Mass Spectrometry

Lü Bing1,YIN Shuai-xing2,CHEN Da-wei1*,FANG Cong-rong1,ZHOU Shuang1,ZHAO Yun-feng1

(1.China National Center for Food Safety Risk Assessment/Key Laboratory of Food Safety Risk Assessment,Ministry of Health,Beijing 100021，China;2.Shimadzu-GL Sciences(Shanghai)Laboratory Supplies Co.,Ltd.,Beijing 100027，China)

Based on cryogenic treatment and QuEChERS method,an ultra performance liquid chromatography-high-resolution benchtop Q Exactive mass spectrometry method for the determination of fipronil and its metabolites in animal derived foods was established.The samples were extracted with acetonitrile,and cleaned up by the cryogenic treatment and dispersive solid phase extraction(d-SPE)with the N-propylethlene diamine(PSA)and C18.The chromatographic analysis was performed on a BEH C18column with 0.1% acetic acid and acetonitrile as mobile phase by gradient elution,and the external standard calibration was used for quantification.The negative ion acquisition mode was applied,and the quantitative analysis was carried out by high resolution mass spectrometry using parallel reaction monitoring(PRM)mode.Fipronil and its metabolites showed good linearities in the concentration ranges of 0.02-2 μg/L and 0.2-20 μg/L,with the correlation coefficients(r2)above 0.992.For liquid or semi-liquid samples(such as milk and eggs)and the solid samples(such as chicken)，the limits of quantification(LOQs)for 4 analytes were between 0.1 μg/kg and 0.2 μg/kg.At different spiked levels,the average recoveries of fipronil and its metabolites in eggs,chicken and milk were in the ranges of 81.6%-96.9%,81.2%-96.0% and 79.1%-100.1%,with the relative standard deviations(RSDs)of 1.3%-11.5%,3.4%-11.4% and 1.5%-10.7%,respectively.The method was simple,sensitive and accurate,and was suitable for the rapid screening and quantitative analysis of fipronil and its metabolites in animal derived foods,and the sensitivity of the method could meet the requirement for residual limitation of EU.

fipronil;animal derived food;QuEChERS;high-resolution mass spectrometry;metabolites

2017-08-22；

2017-08-30

國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心高層次人才隊(duì)伍建設(shè)523項(xiàng)目

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陳達(dá)煒，博士，副研究員，研究方向：食品衛(wèi)生，Tel：010-67779768，E-mail:chendw@cfsa.net.cn

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.12.002

O657.7

A

1004-4957(2017)12-1424-07