王玲 崔莉

摘要：目的：對 G C - M S / M S 法分析血液中唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物的方法進(jìn)行研究。方法：用固相萃取法提取血液中的唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物，再用質(zhì)譜對樣品含量進(jìn)行定性檢測，對唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物給予 G C -M S / M S 法分析 。結(jié)果：血液中唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物檢出濃度在0.05ug / m L -0.1 0 ug / m L范圍內(nèi)時(shí) ，工作曲線線性關(guān)系良好。 回 收 率 區(qū) 間 為 8 0.5 % -90.1 % 。結(jié)論 ： G C- M S / M S 法分析尿液中唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物具有簡單高效的優(yōu)點(diǎn)，可用于安眠鎮(zhèn)靜類藥物誤服中毒或刑事案件中毒者的血液樣本分析。

關(guān)鍵詞：固相萃取； 唑侖類；尿液；安眠鎮(zhèn)靜；色譜分析

目前，麻醉搶劫、麻醉強(qiáng)奸等刑事案件屬一種新型多發(fā)性案件，在這類案件中，常用的麻醉藥物為唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物，特別是三唑侖 （ Triazolam）、 阿譜唑侖 （ Alprazolam）和艾司唑侖 （ Estazolam）等 。 對受害人血液 、尿液中麻醉藥物或其代謝物進(jìn)行檢測，是用來判斷他們是否服用或注射這類安眠鎮(zhèn)靜藥物的直接依據(jù)，也是為查清案情及獲取犯罪證據(jù)等的迫切需要 。因此，唑侖類安眠鎮(zhèn)靜類藥物檢驗(yàn)是十分重要的，文獻(xiàn)報(bào)道的檢驗(yàn)安眠鎮(zhèn)靜類藥物方法主要為調(diào)節(jié)酸堿性后用有機(jī)溶劑或固相萃取方法提取，以氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用法[1-6] 進(jìn)行分析，操作過程繁瑣。本次研究采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用 （ G C-M S/ M S）的方法對唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物進(jìn)行定性、定量檢測，結(jié)果表明此方法具備操作簡捷、高效靈敏的優(yōu)點(diǎn)。

1材料與方法

1.1主要儀器與試劑

PE Clarus SQ8氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國珀金埃爾默（PerkinElmer）公司產(chǎn)品；Turbomass 6.0 軟件；12管固相萃取裝置：GC Science 公司；氮吹儀：美國PIERCE 公司；精密移液器：大龍醫(yī)療設(shè)備（上海）有限公司；固相萃取柱：① Waters 公司 Oasis HLBcartridge（3 cc/60 mg）；② varian 公司 Bond ElutC 18 （3 cc/200 mg ）；③ varian 公司 Bond Elut C 2 （3cc/200 mg ）；超聲波清洗儀等。

實(shí)驗(yàn)用安定、三唑侖、阿譜唑侖、艾司唑侖標(biāo)準(zhǔn)品為公安部物證鑒定中心提供， 其它試劑均為分析純；pH 6.0 磷酸鹽緩沖液；空白血樣來源于不含上述混合樣的健康人血。

1.2檢驗(yàn)方法

100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：安定、三唑侖、阿譜唑侖、艾司唑侖 、SKF 525A 各 100 mg 加入到 100 mL 容量瓶中，用乙醇定容至刻度， 配制成濃度為 1 mg/mL 的混合溶液， 再移取 10 mL 混合溶液至100 mL容量瓶中精確定容， 配制好的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為 100μg/mL。

血液樣本處理：取血樣2mL于離心管中，加100μg/ mL標(biāo)準(zhǔn)溶液250 μL和pH 6.0磷酸鹽緩沖液混勻，超聲振蕩5 min， 10 000 r/min 離心 10 min，取上清液于試管中。

固相萃取柱活化：用5mL甲醇以1mL/min 的流速淋洗活化柱子，然后將上清液以0.5 mL/min的流速通過柱子，再將5mL蒸餾水以1 mL/min的流速過柱洗雜，通氮?dú)飧稍?min，最后用氯仿以0.5mL/min 的流速洗脫藥物，收集洗脫液于試管中，氮吹儀濃縮至干，加250μL乙醇溶解，供 GC/MS 檢驗(yàn)。

氣相色譜條件：色譜柱30 m x 0.2 5m m x 0.2 5μm，彈性石英毛細(xì)柱 以He為載氣，柱體溫度80℃，持續(xù)2 min，升溫速率為20℃/ min升溫至280℃后保持18min，進(jìn)樣口溫度280℃，進(jìn)樣量為 1μL，不分流。

質(zhì)譜條件：離子阱溫度190℃，倍增器電壓1700V，掃描質(zhì)量區(qū)間 40- 450 m /z，掃描模式為全掃描采集模式，掃描時(shí)3.2 m in -30 min，熔劑延時(shí)間3min，E I電子轟擊源70 eV。

2結(jié)果

2.1色譜分離

對提取溶劑進(jìn)行考察表明，藥物和內(nèi)標(biāo)均顯示出良好的提取效果，各 待測物質(zhì)在色譜條件下分離完全，且檢測不受空白血液干擾影響。

2.2定性分析

采用全離子掃描檢測模式。檢測分析物和內(nèi)標(biāo)的定量離子，根據(jù)色譜峰面積用內(nèi)標(biāo)工作曲線法進(jìn)行定性分析。檢出濃度限在0.05ug / m L -0.10 ug / m L范圍內(nèi)。本次研究采用p H 值為6的磷酸鹽緩釋液，平行操作3次，可知回收率區(qū)間為 80.5 % -90.1 %。

3討論

本次研究結(jié)果表明，使G C- M S / M S 法對血液中唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物進(jìn)行定性、定量測定，在pH值為6的體系中，唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物回收率區(qū)間為80.5 % -90.1 %。此外，離子阱串聯(lián)質(zhì)譜的應(yīng)用 在對唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物進(jìn)行定性 定量測定的同時(shí)還可避免干擾物的影響，縮小檢驗(yàn)誤差。所以，G C - M S/ M S 法分析血液中唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物具有簡單高效的優(yōu)點(diǎn)，可用于唑侖類安眠鎮(zhèn)靜藥物誤服中毒或刑事案件中毒者的血液樣本分析。

參考文獻(xiàn)

[1]劉暢，夏晶，胡青，等. LC/MS 法對中成藥中非法添加 9種鎮(zhèn)靜催眠類化學(xué)藥品檢測方法的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25（3）：254-256.

[2]卓先義，向平. LC-MS/MS 同時(shí)分析血液中五種巴比妥類藥物[J]. 中國司法鑒定，2007（2）：17-19.

[3]陳建虎. 固相萃取/離子阱氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用對血液中多種安眠藥物的同時(shí)測定[J]. 分析測試學(xué)報(bào)，2010，29（6）：84-87.

[4]郭海榮，裴茂清.生物檢材中巴比妥類藥物固相萃取及分析方法[J]. 刑事技術(shù)，2008，（6）：16-18.

[5]陳建虎. GC-MS/MS 測定血液中巴比妥類安眠藥物[J].刑事技術(shù)，2010，（5）：32-34.

[6]劉洪濤，馬安德. 血中 22 種常見毒/藥物的液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法快速鑒定[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（8）：1665-1667.

作者簡介：王玲（1984.9-），女，滿族，吉林伊通，吉林省四平市公安局查支隊(duì)，工程師，全日制本科，研究方向：毒物毒品檢驗(yàn).

崔莉（1989.05-），女 ，滿族，遼寧省撫順市，吉林省四平市公安局刑事偵查支隊(duì)，職稱：無 ，研究生，研究方向：毒物毒品檢驗(yàn).