陳恩玉 宋婧

[摘要] 目的 研究四氧嘧啶造大鼠糖尿病模型的最適給藥方案。方法 分別給大鼠不同的造模給藥方案，在30 d內(nèi)測定空腹血糖值，并統(tǒng)計實(shí)驗期間動物的體重及存活率。第1組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（160 mg/kg BW）;第2組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（120 mg/kg BW），24 h后第2次給藥，腹腔注射四氧嘧啶（100 mg/kg BW）;第3組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（120 mg/kg BW），24 h后第2次給藥，腹腔注射四氧嘧啶（100 mg/kg BW）。第1次腹腔注射四氧嘧啶后，將飲水更換為20%葡萄糖溶液。并維持高糖飲水1周。對照組給予同等體積生理鹽水。結(jié)果 第1組的大鼠存活率為60%，模型成功率為20%;第2組的大鼠存活率為65%，模型稱功率為55%;第3組的大鼠存活率為100%，模型成功率為85%。結(jié)論 采用2次小劑量注射四氧嘧啶，并在給藥后高糖飲水可以大大提高糖尿病大鼠造模的存活率及模型成功率。

[關(guān)鍵詞] 四氧嘧啶;雙相血糖調(diào)節(jié);大鼠;糖尿病

[中圖分類號] R587.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1672-4062（2018）09（b）-0018-03

糖尿病是一類以高血糖及慢性血糖水平升高為特征的代謝性疾病[1]。它會對人體的眼、腎、神經(jīng)及心血管造成長期損害，導(dǎo)致功能不全和衰竭[2]。研究糖尿病的治療以及預(yù)防一直是科研工作者的重要任務(wù)。糖尿病大鼠模型的應(yīng)用對研究糖尿病具有不可替代的作用。因此快速、準(zhǔn)確的建立糖尿病大鼠模型具有重要的意義。目前糖尿病大鼠造模方法以化學(xué)藥物誘導(dǎo)最為常見。常用的誘導(dǎo)藥物包括四氧嘧啶（Alloxan，ALX）和鏈脲佐菌素（Streptozocin，STZ）。其中四氧嘧啶最為經(jīng)濟(jì)，但是受到造模方案的影響，其模型的成功率以及造模過程的死亡率相差較大。所以運(yùn)用有效的造模方案建立糖尿病大鼠模型尤為重要。該文主要討論的是四氧嘧啶誘導(dǎo)大鼠糖尿病模型過程中不同給藥方案對造模成功率以及大鼠死亡率的影響，以尋找最佳的造模方案，現(xiàn)報道如下。

1? 資料與方法

1.1? 實(shí)驗動物及飼養(yǎng)條件

SPF級SD大鼠，雄性，體重（180±200）g，購自上海斯萊克實(shí)驗動物有限責(zé)任公司，實(shí)驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（滬）2012-0002。實(shí)驗動物飼養(yǎng)于廈門大學(xué)實(shí)驗動物中心，實(shí)驗動物使用許可證號為SYXK（閩）2013-0006。

1.2? 藥品與試劑

四氧嘧啶（美國Sigma公司），20%葡萄糖溶液（廈門大學(xué)實(shí)驗動物中心配置）;強(qiáng)生穩(wěn)擇易試紙 （美國強(qiáng)生公司），強(qiáng)生穩(wěn)擇易型家用血糖儀（美國強(qiáng)生公司）。

1.3? 方法

取SD大鼠70只，隨機(jī)分為4組。其中對照組10只，第1組20只，第2組20只，第3組20只。分組后禁食4 h（自由飲水），測空腹血糖，作為該組動物的基礎(chǔ)血糖值。隨后禁食20 h（自由飲水）按照各種給藥方案制作大鼠高血糖模型。7 d后大鼠禁食4 h，測血糖，血糖值10～25 mmol/L為高血糖模型成功動物，30 d后大鼠禁食4 h，測血糖，血糖值10～25 mmol/L為穩(wěn)定高血糖模型動物。該實(shí)驗制定的3個給藥方案：第1組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（用前新鮮配制），劑量為160 mg/kg BW;第2組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（用前新鮮配制），劑量為120 mg/kg BW，24 h后第二次給藥，腹腔注射四氧嘧啶（用前新鮮配制），劑量為100 mg/kg BW;第3組給藥方案：腹腔注射四氧嘧啶（用前新鮮配制），劑量為120 mg/kg BW，24 h后第2次給藥，腹腔注射四氧嘧啶（用前新鮮配制），劑量為100 mg/kg BW。第1次腹腔注射四氧嘧啶后，將飲水更換為20%葡萄糖溶液（廈大實(shí)驗動物中心配制）。并維持高糖飲水1周。對照組給予同等體積生理鹽水。

1.4? 統(tǒng)計方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間差異采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 不同給藥方案對大鼠存活率的影響

首先考察不同給藥方案對大鼠存活率的影響，結(jié)果見表1，第1組大鼠存活12只，存活率為60%;第2組大鼠存活13只，存活率為65%;第3組和對照組大鼠全部存活。

2.2? 不同給藥方案對大鼠體重的影響

在整個實(shí)驗周期中，記錄不同時間段，不同造模方案對大鼠體重的影響，結(jié)果見表2，第1組大鼠體重增加程度最高，第2組和第3組大鼠體重增加程度變化相近。

2.3? 不同給藥方案對大鼠血糖的影響

在整個實(shí)驗周期中，于不同時間段對大鼠的空腹血糖進(jìn)行檢查，考察模型的穩(wěn)定性，結(jié)果見表3，造模組大鼠血糖值穩(wěn)定。

2.4? 不同給藥方案對大鼠糖尿病模型成功率的影響

將血糖>11.1 mmol/L的大鼠記為糖尿病大鼠，第1組造模成功4只，成功率為20%，第2組造模成功11只，成功率為55%; 第3組造模成功17只，成功率為85%，見表4。

3? 討論

全球糖尿病和肥胖的患病率均在不斷增長，根據(jù)世界衛(wèi)生組織 2016年最新公布的全球糖尿病報告顯示，全球糖尿病患病率為 8.5%，成年糖尿病患者人數(shù)已達(dá) 4.22億[3]，而目前糖尿病的發(fā)病機(jī)制及藥物治療尚未完善，故建立理想的糖尿病動物模型顯得唯有重要。

國內(nèi)多用傳統(tǒng)的藥物法誘導(dǎo)急性糖尿病模型G誘導(dǎo)的化學(xué)藥物主要為鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）和四氧嘧啶（Alloxan，ALX）[4]，鏈脲佐菌素用藥量小，建模方法簡便，藥物毒性小，但價格昂貴，限制了其使用[5]。四氧嘧啶雖藥物毒性大，試驗動物死亡率高，但由于其建?？焖伲５膭游镅菨舛缺容^穩(wěn)定且維持時間長，有明顯的糖尿病癥狀，而且價格低廉，仍然是建立糖尿病動物模型的首選藥物，故在該實(shí)驗在尋求與探索四氧嘧啶合適劑量及最佳造模方案。

Sunarwidhi AL等[6]外國學(xué)者多采用一次性大劑量腹腔注射四氧嘧啶造模。但有研究[7]顯示一次給藥法會明顯降低大鼠存活率，因此選擇正確的給藥方并降低死亡率法對造模至關(guān)重要。多次給藥法相比于一次給藥法可以提高成模率，，是目前建立四氧嘧啶糖尿病模型的常用方法。因此設(shè)計了不同給藥劑量以及給藥頻次。通過實(shí)驗結(jié)果的觀察，四氧嘧啶注射之后，48 h會先產(chǎn)生的低血糖相，可引起動物死亡，為避免嚴(yán)重的低血糖反應(yīng)，將飲水更換為20%葡萄糖溶液，兩次小劑量造模，并及時給予葡萄糖溶液補(bǔ)液預(yù)防四氧嘧啶造模時產(chǎn)生的低血糖相，能夠有效地提高造模成功率以及降低造模死亡率。然而四氧嘧啶造模產(chǎn)生的雙相血糖結(jié)果與給藥后時間的關(guān)系，該研究并沒有深入研究。該次實(shí)驗僅觀察了單次大劑量與兩次小劑量造模及造模后補(bǔ)糖的影響。由于四氧嘧啶安全范圍大，建?？焖?，模型動物血糖濃度比較穩(wěn)定且維持時間長，有明顯的糖尿病癥狀，而且價格低廉，是建立糖尿病動物模型的理想藥物。該文推薦的第3種造模方案值得推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Inzucchi SE，BergenstaL RM，Buse JB，et a1.Management of hyperglycaemia in type 2 diabetes：a patient-centered approach.Position statement of the American Diabetes Association（ADA） and the European Association for the Study of Diabetes（EASD）[J].Diabetologia，2012，55（6）：1577-1596.

[2]? Looker AC，Eberhardt MS，Saydah SH.Diabetes and fracture risk in older US adults[J].Bone，2016，82：9-15.

[3]? World Health Organization. Global report on diabetes[EB/OL].World Health Organization， Geneva， 2016. http：//www.who.int/diabetes/global-report/en/

[4]? 孫子林.II型糖尿病動物模型及其進(jìn)展[J].實(shí)驗動物科學(xué)與管理，1999，16（2）：44-46.

[5]? 王芳，朱大菊，孫明謹(jǐn)，等.鏈脲菌素在糖尿病鼠模型中的應(yīng)用及其作用機(jī)理[J].鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，23（1）：15-17.

[6]? Sunarwidhi AL，Sudarsono S，Nuqroho AE.Hypoglyce-mic Effect of Combination of Azadirachta indica A.Juss and Gy-nura procumbens （Lour） Merr.Ethanolic Extracts Standardizedby Rutin and Quercetin in Alloxan-induced Hyperglycemic Rats[J].Adv Pharm Bull，2014，4（2）：613-618.

[7]? 艾靜，郭建，張永春，等.四氧嘧啶制大鼠高血糖模型的實(shí)驗研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2001，2（35）：94-96.