夏爐明，孫泉云，陳 琦，沈朝建，張 毅，朱九超，衛(wèi)龍興，戴連群，趙洪進，沈素芳，盧 軍，王曲直

（1. 上海市動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；3. 上海市奉賢區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201400）

上海市規(guī)模豬場豬偽狂犬病傳播風(fēng)險因素調(diào)查

夏爐明1，孫泉云1，陳 琦1，沈朝建2，張 毅2，朱九超1，衛(wèi)龍興3，戴連群3，趙洪進1，沈素芳1，盧 軍1，王曲直1

（1. 上海市動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；3. 上海市奉賢區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201400）

為評估上海市規(guī)模豬場（母豬存欄量≥350頭）豬偽狂犬病（PR）場群流行率，探尋PR傳播的風(fēng)險因素，通過兩階段隨機抽樣策略，抽取91個規(guī)模豬場，采集母豬血清樣品1 349份；采用gpI-ELISA方法進行豬偽狂犬病病毒（PRV）野毒感染抗體檢測，同步對采樣規(guī)模豬場進行問卷調(diào)查；將調(diào)查的風(fēng)險因素轉(zhuǎn)換成二分類變量，用Epi infoTM7軟件進行單因素分析；篩選出P＜0.05的變量，對其進行多因素Logistic回歸分析，并建立ROC曲線，計算模型的預(yù)測概率?？贵w檢測結(jié)果顯示，上海市規(guī)模豬場PR場群流行率為62.76%（95%CI：52.82%～72.69%）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：1年內(nèi)引進種豬（OR：4.84，95%CI：1.53～15.3，P=0.007）、引進公豬精液（OR：10.63，95%CI：0.88～130.41，P=0.06）、病死豬收集場所位于場區(qū)內(nèi)（OR：3.65，95%CI：1.15～11.59，P=0.03）和場內(nèi)有流浪犬貓（OR：5.12，95%CI：1.47～17.81，P=0.01）是導(dǎo)致PR傳播的主要危害性因素；引種/引進精液時檢測PRV gE抗體（OR：0.31，95%CI：0.09～1.12，P=0.07）為主要保護性因素。多因素Logistic回歸模型建立的ROC曲線下面積為0.844（95%CI：75.3%～93.5%）。本研究掌握了上海市規(guī)模豬場PR的流行和分布情況，建立了規(guī)模豬場PR場間傳播的多因素Logistic風(fēng)險模型，為上海市規(guī)模豬場的PR防控和凈化工作提供了依據(jù)。

規(guī)模豬場；豬偽狂犬??；場群流行率；橫斷面研究；風(fēng)險因素

豬偽狂犬病（Porcine pseudorabies，PR）是由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的急性傳染病，主要感染豬、牛、羊、犬，以及野生哺乳動物，其中豬是主要傳播者和自然宿主[1-2]。豬群感染PRV后，其臨床癥狀因性別和生長階段不同而異。如：母豬感染后常出現(xiàn)返情或?qū)遗洳辉校粦言心肛i易發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎或木乃伊胎；幼齡仔豬表現(xiàn)為腹瀉及神經(jīng)癥狀，死亡率可高至100%；育肥豬表現(xiàn)為生長遲緩、飼料報酬降低等[3]。

北美和歐洲的許多國家（如美國、丹麥、德國等）通過實施嚴(yán)格的PR凈化計劃、大規(guī)模免疫gE基因缺失疫苗、監(jiān)測野毒抗體、淘汰陽性豬只、加強生物安全等策略，已成功在家豬中凈化了該病[4]。而我國規(guī)模豬場目前仍普遍存在PRV感染。從2012—2015年P(guān)RV感染調(diào)查結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，我國華東和華南地區(qū)豬群PRV野毒感染率總體呈現(xiàn)上升趨勢[5]。我國在《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020）》中，將PR列為優(yōu)先防治的動物疫病病種，并將其列為種畜禽凈化的重點疫病，要求到2020年全國所有種豬場達到凈化標(biāo)準(zhǔn)。這給規(guī)模豬場PR防控帶來嚴(yán)峻挑戰(zhàn)和重要機遇[6]。

上海市對2010—2014年采用gE基因缺失疫苗免疫的部分規(guī)模豬場母豬群的PRV gE抗體血清學(xué)調(diào)查顯示，母豬群PRV感染抗體居高不下，并呈現(xiàn)逐年上升趨勢[7]。為掌握上海市目前規(guī)模豬場PRV感染狀況，了解場群流行率和分布，尋找場間傳播風(fēng)險因素，本研究通過血清學(xué)檢測和問卷調(diào)查，對上海市91個規(guī)模豬場開展了針對性研究，旨在為PR防控和凈化提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 目標(biāo)群與研究單元

將上海市所有的128個規(guī)模豬場（母豬存欄量≥350頭）作為研究的目標(biāo)群。由于母豬是PR高風(fēng)險群[8]，本研究的研究單元是規(guī)模豬場的母豬。

1.2 抽樣策略和樣本量

采用兩階段隨機抽樣策略：第一階段，確定規(guī)模豬場抽樣數(shù)；第二階段，確定抽取規(guī)模豬場內(nèi)的母豬個體數(shù)。規(guī)模豬場群體水平抽樣框為上海市所有規(guī)模豬場（母豬存欄量≥350頭）。采用估計流行率方法計算抽樣豬場數(shù)量，按照95%置信水平，50%預(yù)期流行率和5%可接受誤差，用Win Episcope 2.0軟件計算需要抽取的規(guī)模豬場數(shù)量為97個。

對于母豬個體水平抽樣數(shù)量，根據(jù)規(guī)模豬場母豬數(shù)量，按照95%置信水平，18%預(yù)期流行率，用發(fā)現(xiàn)疫病的方法進行計算，用Win Episcope 2.0計算每場需采集母豬血清樣品15份。采用系統(tǒng)隨機抽樣方法，按照一定間隔，抽取定位欄中的母豬個體。

1.3 檢測方法

2015年9—11月，采用橫斷面研究方法，對規(guī)模豬場的生產(chǎn)母豬進行抽樣；對血清樣品，采用美國IDEXX公司的PRV gE-ELISA抗體檢測試劑盒進行PRV野毒感染抗體檢測，獲得上海市規(guī)模豬場PR場群表觀流行率和樣品陽性率。試驗的敏感性Se=98%，特異性Sp=99%[9]。

1.4 病例定義

PR陽性場：PRV gE-ELISA抗體檢測試劑盒檢出1份及以上母豬陽性個體的規(guī)模豬場定義為PR陽性場。

PR陰性場：PRV gE-ELISA抗體檢測試劑盒未檢出母豬陽性個體的規(guī)模豬場定義為PR陰性場。

1.5 潛在風(fēng)險因素調(diào)查

設(shè)計《上海市規(guī)模豬場豬偽狂犬病風(fēng)險因素調(diào)查表》，對基礎(chǔ)信息、飼養(yǎng)管理、生物安全、PR檢測和免疫等方面的42個風(fēng)險因素，展開問卷調(diào)查。

1.6 數(shù)據(jù)分析

1.6.1場群流行率估計 場群表觀流行率（HAP）為陽性規(guī)模豬場數(shù)與總抽樣規(guī)模豬場數(shù)的比值。對場群真實流行率（HTP），結(jié)合群敏感性（HSe）和群特異性（HSp）計算，公式為：HTP=（HAP+HSp?1）/（HSe+HSp?1）；HSe=1?[1?pSe?（1?p）（1?Sp）]n；HSp=Spn。其中，p是群內(nèi)預(yù)期流行率，Se是ELISA試劑盒的試驗敏感性，Sp是試驗特異性，n為場內(nèi)豬只抽樣數(shù)量[10]。

1.6.2風(fēng)險因素分析 將血清學(xué)檢測結(jié)果和問卷調(diào)查中收集到的豬場飼養(yǎng)管理和生物安全防護等相關(guān)信息輸入Microsoft excel 2010（所有變量均為二分類變量），以PR陰性場和陽性場為因變量，用Epi infoTM7軟件進行單因素分析；將疾病狀態(tài)和每個解釋變量之間的關(guān)聯(lián)通過χ2檢驗，篩選出P＜0.05的變量，對其進行多因素Logistic回歸分析；將篩選出P＜0.05的變量進行雙變量Pearson相關(guān)性檢驗；如果相關(guān)系數(shù)＞0.4，就選擇1個最符合生物學(xué)邏輯的因素進入Logistic回歸模型。應(yīng)用SPSS 22對最終篩選的變量進行多因素Logistic回歸分析。采用Hosmer-lemeshow方法，對建立的模型進行擬合優(yōu)度檢驗，選擇χ2最大的模型作為最終Logistic模型；對建立的Logistic模型制作ROC曲線，檢驗?zāi)Ｐ偷念A(yù)測概率。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模豬場母豬PR場群流行率

此次調(diào)查抽取的97個規(guī)模豬場中，由于個別規(guī)模豬場未配合采樣，以及部分規(guī)模豬場的調(diào)查問卷填寫質(zhì)量不佳，剔除了6個規(guī)模豬場，共檢測91個規(guī)模豬場1 349份生產(chǎn)母豬血清樣品，發(fā)現(xiàn)59個規(guī)模豬場為PR陽性場，452份母豬血清樣品為陽性，規(guī)模豬場場群表觀流行率（HAP）為64.84%，母豬樣品陽性率為33.51%。通過公式計算得到HSe=95%，HSp=86%，HTP=62.76%（95%CI：52.82%～72.69%）。

2.2 不同區(qū)域規(guī)模豬場母豬PR群流行率分布

將91個規(guī)模豬場按照地理區(qū)域分類，發(fā)現(xiàn)閔行區(qū)規(guī)模豬場PR場群流行率和母豬PR樣品陽性率最高，其次是奉賢區(qū)。崇明縣由于地理屏障優(yōu)勢，PR場群流行率和母豬PR樣品陽性率較其它各區(qū)縣低。各區(qū)縣規(guī)模豬場PR場群流行率和樣品陽性率檢測結(jié)果見表1。利用ArcGIS 9.3軟件，將上海市各區(qū)縣母豬PRV gE抗體樣品陽性率制作成空間分布圖（圖1）。

表1 不同區(qū)域規(guī)模豬場PR場群流行率和樣品陽性率檢測結(jié)果

圖1 上海市各區(qū)縣規(guī)模場母豬PRV gE抗體樣品陽性率空間分布

2.3 風(fēng)險因素分析

2.3.1單因素分析 對問卷調(diào)查收集的23個與PR場間傳播相關(guān)風(fēng)險因素進行單因素分析，篩選到12個有統(tǒng)計學(xué)意義的風(fēng)險因素（P＜0.05），其中4個風(fēng)險因素為保護性因素。導(dǎo)致規(guī)模豬場PR陽性的危害性風(fēng)險因素分別是：（1）1年內(nèi)引進種豬；（2）引進種豬隔離時間＜30 d；（3）引進公豬精液；（4）豬場距離主干道≤3 km；（5）駐場人員人均出入場區(qū)頻率≥4次/月；（6）病死豬收集場所位于場區(qū)內(nèi)；（7）全場定期消毒頻率≤4次/月；（8）場區(qū)內(nèi)有流浪犬貓。此外，單因素分析得出4個保護性因素：（1）引種/引進精液時檢測PRV gE抗體：（2）外來人員經(jīng)淋浴后進入生產(chǎn)區(qū)；（3）外來車輛噴霧消毒后進入場區(qū)；（4）商品豬免疫次數(shù)≤2次。具體結(jié)果見表2。

2.3.2多因素Logistic回歸分析 篩選出單因素分析P＜0.05的12個因素；對這12個變量進行Pearson相關(guān)性檢驗，發(fā)現(xiàn)“引進公豬精液”和“引進種豬隔離時間＜30 d”的Pearson相關(guān)系數(shù)＞0.4，說明“引進公豬精液”更符合生物學(xué)邏輯，因此選擇該風(fēng)險因素進入Logistic回歸模型。另外發(fā)現(xiàn)，“商品豬免疫次數(shù)≤2次”單因素分析為保護性因素。原因是PR陽性規(guī)模場防控壓力大，從而更傾向于提高商品豬免疫次數(shù)，具有一定的干擾性。因此，該因素不進入Logistic模型分析。多因素Logistic回歸結(jié)果顯示：最終進入Logistic回歸模型的危害性風(fēng)險因素為“1年內(nèi)引進種豬”“引進公豬精液”“病死豬收集場所位于場區(qū)內(nèi)”和“場內(nèi)有流浪犬貓”；保護性因素為“引種/引進精液時檢測PRV gE抗體”（表3）。Hosemer-lemeshow擬合優(yōu)度檢驗χ2=7.58（df=7，P=0.37＞0.05），說明進入模型的風(fēng)險因素與預(yù)期風(fēng)險因素?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異，模型擬合優(yōu)度較好。根據(jù)以上變量建立上海市規(guī)模豬場PR傳播概率模型：Log P/（1?P）= ?1.36+1.57X1+2.36X2?1.16X3+1.3X4+1.63X5。ROC曲線顯示，該模型預(yù)測PR的場間傳播概率為84.4%（95%CI：75.3%～93.5%，圖2）。

表2 上海市規(guī)模豬場PR場間傳播風(fēng)險因素單變量分析結(jié)果

3 討論

本研究首次將上海市所有128個規(guī)模豬場（母豬存欄量≥350頭）作為研究的目標(biāo)群，通過概率抽樣的方法，來了解PR場群流行率，并結(jié)合問卷調(diào)查對導(dǎo)致規(guī)模豬場PR場間流行的風(fēng)險因素進行研究。結(jié)果顯示，上海市規(guī)模豬場PR場群流行率高達62.76%（95%CI：52.82%～72.69%），表明上海市規(guī)模豬場PRV感染狀況不容樂觀，污染面較大。本研究建立的規(guī)模豬場PR場間傳播風(fēng)險因素Logistic回歸模型發(fā)現(xiàn)，“1年內(nèi)引進種豬”“引進公豬精液”“病死豬收集場所位于場區(qū)內(nèi)”和“場內(nèi)有流浪犬貓”為主要危害性因素[11]，同時發(fā)現(xiàn)“引種/引進精液時檢測PRV gE抗體”為主要保護性因素。這些關(guān)鍵風(fēng)險因素獲得，將對上海市規(guī)模豬場下一步的PR防控和凈化具有指導(dǎo)和實踐意義。

表3 上海市規(guī)模豬場PR場間傳播風(fēng)險因素多變量Logistic回歸分析結(jié)果

圖2 回歸模型的ROC曲線（曲線下面積0.844）

結(jié)合單因素分析和Logisitic回歸分析結(jié)果，建議上海市規(guī)模豬場PR防控和凈化應(yīng)從以下幾個方面加強各項措施落實：首先，謹(jǐn)慎引種或引進公豬精液，在必須引種或引進公豬精液的情況下，要做好引種和引進精液前PRV gE抗體的檢測工作。其次，加強生物安全措施。如：外來人員（銷售人員，官方獸醫(yī)等）進入生產(chǎn)區(qū)必須淋浴并更換工作服后方可進入；駐場人員出入場區(qū)的頻率不高于4次/月；全場定期消毒頻率不低于4次/月；驅(qū)逐場區(qū)內(nèi)的流浪犬、貓。由于上海市病死畜禽是統(tǒng)一送市動物無害化處理中心集中處理，收集病死豬的無害化車輛串場可能會帶來一定的疫情隱患，因此規(guī)模豬場病死豬的收集場所要距場外200 m以上為宜。最后，要做好主要疫病的定期監(jiān)測，嚴(yán)格淘汰PRV gE抗體陽性豬只[12]。

本研究的局限性在于：一是用發(fā)現(xiàn)疫病方法抽取群內(nèi)母豬個體時，預(yù)期流行率設(shè)定為18%，導(dǎo)致群內(nèi)流行率低于18%的規(guī)模豬場很難被發(fā)現(xiàn)而被認(rèn)定為陰性場。結(jié)合PRV生物學(xué)特征，該病毒除可通過直接接觸傳播外，還可經(jīng)空氣傳播。有研究顯示，PRV在擁擠、中等濕度和低空氣更換量豬舍，通過氣溶膠傳播的能力很強[13]，極易迅速蔓延，因此18%的預(yù)期流行率對陽性場的鑒別影響不大。二是在群內(nèi)個體抽樣檢測方面，針對的是生產(chǎn)母豬，未選擇種公豬、仔豬及育肥豬。規(guī)模豬場母豬由于飼養(yǎng)周期長，妊娠母豬感染本病時，還可通過垂直傳播方式感染胎兒，因此母豬群是PRV感染的高風(fēng)險群，也是PR防控凈化的關(guān)鍵群[7，14]。本研究針對規(guī)模豬場母豬群開展的PRV野毒感染抗體血清學(xué)調(diào)查，有助于了解和評估上海市豬群的整體感染狀態(tài)。從血清流行病學(xué)調(diào)查的角度而言，母豬的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果更為準(zhǔn)確。因為仔豬體內(nèi)的gE抗體既可能是由于PRV感染所致的，也可能是來源母源抗體。三是問卷調(diào)查結(jié)果存在一定的信息偏倚。本研究在風(fēng)險因素問卷設(shè)計上，綜合了近年來上海市規(guī)模豬場PR防控和凈化工作的短板和瓶頸，并經(jīng)專家多次討論后定稿。但本次問卷調(diào)查，主要依靠本市各區(qū)縣動物疫病控制中心去開展，加上問卷的預(yù)調(diào)查和培訓(xùn)工作比較欠缺，從而導(dǎo)致調(diào)查人員和規(guī)模豬場技術(shù)人員對某些問卷問題的理解不一致、不全面。

4 結(jié)論

上海市規(guī)模豬場PR場群流行率為62.76%，PRV污染面較廣?！?年內(nèi)引進種豬”“引進公豬精液”“病死豬收集場所位于場區(qū)內(nèi)和場內(nèi)有流浪犬貓”是導(dǎo)致PRV場間傳播的主要危害性因素；“引種/引進精液時檢測PRV gE抗體”為主要保護性因素。綜合問卷調(diào)查和風(fēng)險因素分析結(jié)果，建議規(guī)模豬場謹(jǐn)慎引種或引進公豬精液；在引種/引進公豬精液前，需要進行PRV gE抗體檢測；加強生物安全措施；做好主要疫病定期監(jiān)測工作，嚴(yán)格淘汰PRV gE抗體陽性豬只。

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A Survey on the Risk Factors of Porcine Pseudorabies Transmission in Scaled Swine Farms of Shanghai City

Xia Luming1，Sun Quanyun1，Chen Qi1，Shen Chaojian2，Zhang Yi2，Zhu Jiuchao1，Wei Longxing3，Dai Lianqun3，Zhao Hongjin1，Shen Sufang1，Lu Jun1，Wang Quzhi1
（1. Shanghai Animal Disease Prevention and Control Center，Shanghai 201103，China；2. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shangdong 266032，China；3. Fengxian District Animal Disease Prevention and Control Center，Shanghai 201400，China）

In order to evaluate the herd prevalence of Porcine pseudorabies（PR）in scaled swine farms（sow number≥ 350）of Shanghai City and to identify the risk factors of PR transmission，1 349 sow serum samples were collected in 91 scaled swine farms by two-stage random sampling strategy. Detection of antibody to PRV field strain was carried out by gpI-ELISA，and the questionnaire survey on the scaled swine farms was implemented at the same time.All the risk factors were converted to binary variables and univariate analysis was carried out by Epi infoTM7. Variables（P＜ 0.05）were screened and analyzed by multivariate logistic regression analysis，and the ROC curve was established to calculate the predicted probability of Logistic regression model. The antibody test results showed that the herd prevalence of PR in Shanghai City was 62.76%（95%CI：52.82%-72.69%）. The multivariate Logistic regression analysis results indicated that the introduction of boar in 1 year（OR ：4.84，95%CI：1.53-15.30，P=0.007），the introduction of boar semen（OR ：10.63，95%CI：0.88-130.41，P=0.06），the collection station of dead swine was located in swine farm（OR：3.65，95%CI：1.15-11.59，P=0.03），the street dogs and cats were found in farm（OR：5.12，95%CI：1.47-17.81，P=0.01）were significant risk factors of PRV transmission，and testing the gE antibody while introducing boar semen（OR ：0.31，95%CI：0.09-1.12，P=0.07）was a significant protective factor. The area under ROC curve was 0.844（95%CI：75.3%-93.5%）. Through this study，the prevalence and distribution of PR in scaled swine farms of Shanghai City were recognized，and a multi-factor Logistic risk model of PR field spread in scaled swine farms was established，which could provide guidance for PR prevention，control and purification of scaled swine farms in Shanghai City.

scaled swine farm；porcine pseudorabies；herd prevalence；cross-sectional study；risk factor

S851.3

A

1005-944X（2018）01-0001-06

10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.001

國家重點研發(fā)計劃項目（2017YFC1200500）；上海市生豬產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)（滬農(nóng)科產(chǎn)字（2017）第6號）

朱迪國）