王新宇 舒琦瑾★ 李心蕓 李俊超 李欣

人類基因組測序［1］鑒定了2萬個(gè)編碼蛋白質(zhì)的基因，然而這些編碼基因占＜2%人類基因組。70%的人類基因組被轉(zhuǎn)錄成RNA，繼而產(chǎn)生了成千上萬的非編碼RNA。非編碼RNA可被分為以下幾種類型﹑持家RNA（housekeeping RNA）﹑短鏈非編碼RNA（sncRNA）和長鏈非編碼RNA（lncRNA）。多種lncRNA參與細(xì)胞分化，維持干細(xì)胞的多能性，以及組織或器官的發(fā)育。近年研究［2］發(fā)現(xiàn)，lncRNA作為癌基因或是抑癌基因在多種腫瘤中表達(dá)失調(diào)。膽囊癌（GBC）是一種起源于膽管上皮的高度惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，居膽道惡性腫瘤第一位，消化道惡性腫瘤第六位。膽囊癌的病因迄今未完全闡明，危險(xiǎn)因素包括高齡﹑女性性別﹑膽石癥﹑瓷樣膽囊﹑膽囊息肉﹑先天性膽囊囊腫﹑慢性感染和吸煙等。因早期癥狀不典型及缺乏特異性的腫瘤標(biāo)志物，多數(shù)患者就診時(shí)腫瘤已侵及鄰近器官或發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，僅有約20%的GBC患者在診斷時(shí)腫瘤局限于膽囊，5年總生存率＜5%。一個(gè)世紀(jì)以來，靶向治療在膽囊癌的治療中作用有限，膽囊癌總生存率始終無明顯改善。近年研究發(fā)現(xiàn)與膽囊癌相關(guān)的lncRNA有MALAT1﹑HOTAIR﹑KIAA0125等［3］，本文對其最新進(jìn)展作一綜述。

1 HOXA-AS2

HOXA-AS2（HOXA cluster antisense RNA 2） 定 位 于HOXA家族HOXA3和HOXA4之間的位點(diǎn)上，編碼長度1048bp，被認(rèn)為是急性早幼粒細(xì)胞白血病和胃癌的致癌基因。近年研究發(fā)現(xiàn)，HOXA-AS2在多種惡性腫瘤［4］中呈高表達(dá)，如肝細(xì)胞癌﹑乳腺癌﹑結(jié)直腸癌等，且表達(dá)水平與腫瘤直徑﹑TNM分期﹑淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌中，HOXAAS2可以調(diào)控細(xì)胞周期﹑影響細(xì)胞凋亡，通過與EZH2﹑LSD1的結(jié)合以抑制P21﹑KLF2的表達(dá)促進(jìn)腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移。在乳腺癌中，HOXA-AS2充當(dāng)miR-520c-3p的海綿并與miR-520c-3p結(jié)合，上調(diào)其靶基因TGFBR2﹑RELA的表達(dá)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖﹑浸潤和轉(zhuǎn)移。Peng Zhang等［5］發(fā)現(xiàn)，相較于鄰近正常組織，膽囊癌組織中的HOXA-AS2的表達(dá)明顯升高，且過表達(dá)的HOXA-AS2與瘤體大小﹑T分期﹑N分期密切相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)表明，沉默表達(dá)HOXA-AS2顯著抑制了膽囊癌GBD- SD細(xì)胞系細(xì)胞的增殖，轉(zhuǎn)染了HOXAAS2 siRNA的膽囊癌GBC-SD細(xì)胞系細(xì)胞較對照組細(xì)胞凋亡率高。沉默表達(dá)HOXA-AS2導(dǎo)致癌細(xì)胞周期停留于G1期，過表達(dá)HOXA-AS2則導(dǎo)致S期細(xì)胞增加，G0/G1期細(xì)胞減少，表明HOXA-AS2能通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡﹑調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞的增殖。上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化是一種上皮細(xì)胞失去極性轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)進(jìn)程，伴有上皮標(biāo)記物如E-黏鈣蛋白表達(dá)降低，間充質(zhì)標(biāo)記物如波形蛋白﹑N-黏鈣蛋白﹑slug表達(dá)升高，在腫瘤浸潤﹑轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。進(jìn)一步研究表明，HOXA-AS2可通過促進(jìn)波形蛋白﹑N-黏鈣蛋白的表達(dá)，抑制E-黏鈣蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移。

2 Linc00152

Linc00152（Long intergenic non-coding RNA 152） 定 位于人類染色體2p11.2上，編碼長度828 bp，因在肝癌發(fā)生進(jìn)程中差異去甲基化被發(fā)現(xiàn)。近年研究發(fā)現(xiàn)，Linc00152在多種腫瘤如肺腺癌﹑胃癌﹑肝癌﹑乳腺癌中均表達(dá)上調(diào)，且與預(yù)后不良顯著相關(guān)［6］。在腎細(xì)胞癌中，Linc00152通過后生抑制P16，并對miR-205進(jìn)行負(fù)調(diào)控促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中，Linc00152通過影響miR-103a-3p/FEZF1/CDC25A通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。Qiang Cai等［7］發(fā)現(xiàn)在膽囊癌組織中，Linc00152表達(dá)水平較鄰近無瘤組織明顯升高。Linc00152表達(dá)水平與腫瘤狀態(tài)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，但與性別﹑年齡﹑組織學(xué)級別﹑臨床分期無顯著相關(guān)，Linc00152高表達(dá)組較Linc00152低表達(dá)組的總生存期較縮短。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，膽囊癌組織中miR-138表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)水平與Linc00152呈負(fù)相關(guān)。既往研究［8］表明，miR-138 能夠抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移及上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在多種腫瘤中發(fā)揮抑癌作用。HIF-1a是一種低氧反應(yīng)蛋白，能夠激活上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化調(diào)控因子，常在人類癌癥中過度表達(dá)，miR-138可下調(diào)HIF-1a的表達(dá)進(jìn)而抑制上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。Linc00152部分通過充當(dāng)miR-138海綿并與其結(jié)合促進(jìn)膽囊癌浸潤﹑轉(zhuǎn)移和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程。Linc00152/miR-138/HIF-1a信號通路可能是膽囊癌的一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。

3 Linc-RoR

Linc-RoR（long intergenic non-coding RNA，regulator of reprogramming）最初發(fā)現(xiàn)于誘導(dǎo)性多功能干細(xì)胞，定位于人染色體18q21.31上，由4個(gè)外顯子組成，編碼長度為2.6 kb，在腫瘤的發(fā)展及化療耐藥中起重要作用。Linc-ROR在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)，包括口腔癌﹑子宮內(nèi)膜癌﹑乳腺癌﹑胰腺癌﹑肝細(xì)胞癌和鼻咽癌，在乳腺癌中，Linc-RoR通過下調(diào)miR - 34a表達(dá)逆轉(zhuǎn)了吉西他濱誘導(dǎo)的癌細(xì)胞凋亡和自噬。在鼻咽癌中，Linc-RoR部分通過抑制p53信號通路引起鼻咽癌耐藥。然而Linc-RoR也可部分通過阻斷KLF4的表達(dá)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中發(fā)揮抑癌作用。Shou-Hua Wang等［9］研究發(fā)現(xiàn)，與鄰近無瘤組織相比，Linc-RoR在膽囊癌組織中表達(dá)明顯升高，且其表達(dá)水平與腫瘤直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但與年齡﹑性別﹑臨床分期﹑組織學(xué)分級無明顯相關(guān)。Kaplan Meier生存分析及時(shí)序檢驗(yàn)顯示Linc-RoR表達(dá)水平高的膽囊癌患者較Linc-RoR表達(dá)水平低的患者總生存期明顯縮短。進(jìn)一步研究表明，沉默表達(dá)Linc-RoR使膽囊癌SGC-996細(xì)胞系細(xì)胞和膽囊癌Noz細(xì)胞系細(xì)胞的增殖受到抑制。此外，Linc-RoR沉默后，處于S期的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，侵襲性細(xì)胞的數(shù)量較對照組亦明顯減少。體外實(shí)驗(yàn)表明，利用si-RNA抑制Linc-RoR的表達(dá)后，E-黏鈣蛋白的表達(dá)水平顯著上升，而Twist1和波形蛋白的表達(dá)水平顯著下降。這些研究表明Linc-RoR能通過調(diào)控細(xì)胞周期﹑誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞的增殖﹑浸潤轉(zhuǎn)移。

4 SPRY4-IT1

SPRY4-IT1（long non-coding RNA SPRY4 intronic transcript 1）首先發(fā)現(xiàn)于脂肪組織中，并從SPRY4基因的第2個(gè)內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄，定位于人染色體］5q31.3上。SPRY4-IT1在多種惡性腫瘤［10-11］中表達(dá)水平升高，如骨肉瘤﹑卵巢癌﹑食管鱗狀細(xì)胞癌﹑黑色素瘤﹑肝細(xì)胞癌，并與腫瘤細(xì)胞增殖﹑浸潤﹑轉(zhuǎn)移﹑上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。在食管鱗狀細(xì)胞癌中［11］，過表達(dá)的spry4 - it1可以通過增加波形蛋白及纖連蛋白的表達(dá)，減少E-黏鈣蛋白和zo -1的表達(dá)誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）以增加癌細(xì)胞的體外活性，也能直接促進(jìn)Snail的轉(zhuǎn)錄﹑表達(dá)及細(xì)胞核定位誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程。在肝細(xì)胞癌中，過表達(dá)的SPRY4-IT1既能通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Twist1和波形蛋白的表達(dá)，抑制E - 黏鈣蛋白表達(dá)，促進(jìn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，又能通過招募EZH2至E-鈣粘蛋白啟動子引起表觀遺傳抑制。Liang Yang等［12］發(fā)現(xiàn)，與鄰近正常組織相比，膽囊癌組織中SPRY4-IT1的表達(dá)水平明顯升高，并且其表達(dá)水平與腫瘤大小﹑腫瘤狀態(tài)﹑淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但與性別﹑年齡無關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)表明，SPRY4-IT1沉默后膽囊癌Noz細(xì)胞系細(xì)胞的增殖及集落形成能力明顯受到抑制，過表達(dá)SPRY4-IT1可促進(jìn)膽囊癌GBC-SD細(xì)胞系細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)SPRY4-IT1使膽囊癌GBC-SD細(xì)胞中E-黏鈣蛋白的表達(dá)升高，波形蛋白表達(dá)降低。而沉默表達(dá)SPRY4-IT1使膽囊癌Noz細(xì)胞系細(xì)胞中E-黏鈣蛋白表達(dá)降低，波形蛋白的表達(dá)升高，表明SPRY4-IT1可能部分通過誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程促進(jìn)膽囊癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

5 TUG1

TUG1（taurine- upregulated gene 1，也被稱作TI- 227H﹑Linc00080﹑ lnc RNA00080）最初發(fā)現(xiàn)于新生小鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞中，位于人染色體22q12.2上，包含4個(gè)外顯子，編碼長度598bp。近年研究發(fā)現(xiàn)，TUG1在多種腫瘤［13-14］如小細(xì)胞肺癌﹑宮頸癌﹑乳腺癌﹑食管鱗狀細(xì)胞癌﹑肝細(xì)胞癌﹑膀胱上皮癌﹑骨肉瘤﹑直腸癌中表達(dá)上調(diào)，在非小細(xì)胞肺癌及神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá)下調(diào)。過表達(dá)的TUG1與腫瘤浸潤﹑轉(zhuǎn)移及化療耐藥密切相關(guān)。Fei Ma等［15］研究發(fā)現(xiàn)，相較于鄰近正常組織，膽囊癌組織中的TUG1表達(dá)明顯上調(diào)，且其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。瘤體直徑＞5cm的膽囊癌組織中TUG1的表達(dá)水平高于瘤體直徑＜5cm的膽囊癌組織，但差異并不顯著。沉默表達(dá)TUG1明顯抑制了膽囊癌SGC-996細(xì)胞系細(xì)胞的增殖，但TUG1介導(dǎo)的GBC細(xì)胞增殖與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡無關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TUG1表達(dá)與波形蛋白平行，與E-粘鈣蛋白相反，證實(shí)沉默TUG1部分影響EMT進(jìn)程進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。mi R-300在膽囊癌組織中明顯下調(diào)，其表達(dá)水平與TUG1呈顯著負(fù)相關(guān)，沉默表達(dá)TUG1使SGC-996 及GBC-SD細(xì)胞系中miR-300明顯上調(diào)，證實(shí)TUG1部分通過抑制miR-300的表達(dá)促進(jìn)膽囊癌的進(jìn)展。總之，TUG1充當(dāng)miR-300的海綿并與其結(jié)合消除miR-300的內(nèi)源性效應(yīng)，促進(jìn)了膽囊癌細(xì)胞的增殖﹑浸潤及轉(zhuǎn)移。TUG1 / miR-300調(diào)控通路可能成為膽囊癌治療中的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

綜上所述，lncRNA廣泛地參與腫瘤的增殖﹑浸潤﹑轉(zhuǎn)移及化療耐藥，并成為腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。然而關(guān)于膽囊癌與lncRNA的研究并不充分，且大部分研究停留在檢測lncRNA在腫瘤組織中表達(dá)水平及調(diào)控細(xì)胞周期﹑促進(jìn)細(xì)胞凋亡方面，如何影響膽囊癌細(xì)胞增殖﹑浸潤﹑轉(zhuǎn)移﹑化療耐藥的分子機(jī)制尚未明確。不過，目前研究已證實(shí) lncRNA可協(xié)助判斷膽囊癌的預(yù)后并且為膽囊癌的靶向治療提供新的方向。更深入的研究有待于展開以明確lncRNA如何影響膽囊癌發(fā)生﹑發(fā)展﹑化療耐藥的分子機(jī)制。

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