孟思妤 孟長明 陳昌福

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，453700；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，430070）

2 致病菌藥物敏感性測定

抗菌藥物敏感性試驗（AST）簡稱藥敏試驗（或耐藥試驗），旨在了解病原菌對各種抗生素的敏感（或耐受）程度，以指導(dǎo)藥物治療中合理選用抗生素藥物的微生物學(xué)試驗。某種抗生素如果能以很小的劑量抑制、殺滅致病菌，則稱該種致病菌對該抗生素“敏感”。反之，則稱為“不敏感”或“耐藥”。為了解致病菌對哪種抗生素敏感，以合理用藥，減少盲目性，就應(yīng)該進行對致病生物進行藥敏試驗。致病菌的藥敏試驗大致過程是：從患者的感染部位（病灶）采取含致病菌的標本，接種在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上，于一定條件下純化培養(yǎng)菌株。如果采用紙片瓊脂擴散法（K-B法）完成藥敏試驗，就可將分別沾有一定量各種抗生素的紙片貼在培養(yǎng)基表面（或用不銹鋼圈，內(nèi)放定量抗生素溶液），培養(yǎng)一定時間后觀察抑、殺菌結(jié)果。由于致病菌對各種抗生素的敏感程度不同，在藥物紙片周圍便出現(xiàn)不同大小的抑制致病菌生長而形成的“空圈”，稱為抑菌圈。抑菌圈大小與致病菌對各種抗生素的敏感程度成正比關(guān)系。因此，可以根據(jù)藥敏試驗結(jié)果有針對性地選用抗生素。最近已有自動化的藥敏試驗儀器問世，可以使藥敏試驗更加迅速、準確。

對水生動物致病菌的藥敏試驗結(jié)果不僅可為科學(xué)地選擇治療藥物提供重要參考，避免漁用藥物的濫用或者誤用，而且通過監(jiān)控病原菌的耐藥性變遷，還可用于評價研制漁用藥物中新藥的抗菌譜和抗菌活性等藥效學(xué)特征。目前，在水生動物疾病防控中濫用抗生素的現(xiàn)象比較普遍，致使抗藥致病菌急劇增加，甚至因長期大量使用廣譜抗生素，大量殺傷了水生動物體內(nèi)正常微生物，失去微生物的相互制約作用，從而使一些少見的或一般情況下的非致病菌大量繁殖，引起所謂“二次感染”的情況屢有發(fā)生，給藥物治療水生動物感染性疾病造成人為的困難。因此，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中提倡對水生動物致病菌進行藥敏試驗，對于做到精準用藥和堅持合理用藥是十分重要的。

目前常用的藥敏試驗方法有：紙片瓊脂擴散法（K-B法）、稀釋法、E試驗、檢測細菌耐藥性的方法。稀釋法又可分為液體稀釋法和瓊脂稀釋法。在人醫(yī)和獸醫(yī)方面，檢測細菌耐藥性的方法還包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的檢測、耐萬古霉素腸球菌（VER）的檢測、耐青霉素肺炎鏈球菌（PRP）的檢測、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的檢測和β-內(nèi)酰胺酶的檢測。

對于水生動物致病菌藥敏試驗主要采用紙片瓊脂擴散法（K-B法）和稀釋法進行。

1）紙片瓊脂擴散法（K-B法）

該方法是將含有定量抗菌藥物的藥敏片（藥敏片），貼在已接種了待測試致病菌的瓊脂培養(yǎng)基表面上，藥敏片中所含的藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數(shù)減少，在紙片的周圍形成藥物濃度梯度。導(dǎo)致藥敏片周圍能抑菌的藥物濃度范圍內(nèi)的致病菌不能生長，而處于藥物抑菌濃度范圍外的致病菌則可以生長。因此，在藥敏片周圍形成透明的抑菌圈。不同抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小即可以反映測試致病菌對藥物的敏感程度，并與該藥物對測試致病菌的MIC相關(guān)。

藥敏片可以購買或者自制。自制藥敏片時，取新華1號定性濾紙，用打孔機將其打成6.0毫米直徑的圓形紙片。取圓形紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15～20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使其完全干燥。

接著，向上述含有50片濾紙片的青霉素瓶內(nèi)加入藥液0.25mL，并翻動濾紙片，使各濾紙片充分浸透藥液，翻動濾紙片時不能將其搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，待其干燥后即密封，如有條件可真空干燥。切勿讓藥敏片受潮，置陰暗干燥處保存，制作好的藥敏片的有效期一般為3～6個月。

需要注意的是藥敏片的質(zhì)量一定要標準，這是做好藥敏試驗的關(guān)鍵。如果藥敏片質(zhì)量參差不齊（制作藥物紙片時，如果選擇的濾紙厚薄不一致，或者有缺損，就會導(dǎo)制備的藥敏片中藥物含量不均勻），常常引起抑制菌環(huán)不規(guī)則，使藥敏結(jié)果判斷不準確。因此，藥敏片間差和準確度都一定要達到標準。同時，為了保持藥敏片中的藥物活性，藥敏片的pH一般要求為中性；同時將其置放低溫條件（-10℃）下保存，避免潮濕。盛裝藥敏片的容器自低溫處取出時，應(yīng)放置在室溫條件下平衡至少10分鐘后再打開包裝容器，避免冷凝水影響到藥效。

（未完待續(xù)）