郁再洛 （廣西凌云縣動物疫病預防控制中心 533199）

1 試劑因素

試劑選擇是保證抗體檢測質量的關鍵要素，但不同廠家的試劑在使用效果上仍存在差異，在購買與ELISA檢測相關試劑時應引起注意，盡量購買與ELISA檢測試劑盒相配套的化學試劑，注意ELISA檢測試劑盒相配套的化學試劑生產日期及保存環(huán)境溫度。保存方式不對均會影響ELISA檢測結果，過期的試劑也會出現(xiàn)假陽性[1]。

2 樣品因素

被檢測的樣本應該是新鮮的，尤其是血清樣本，在采集過程中，應使用無菌采集管和采集針，分離血清后要分裝到無菌EP管中，由于被檢樣品的污染可以導致ELISA敏感性和準確性降低。因此，采集樣品時應注意無菌操作，減少被檢驗品的污染。被檢樣品的保存溫度要適宜。尤其是抗體檢測，樣品要進行分裝若干份，嚴禁反復凍融樣品，被檢樣品在反復凍融過程中會破壞蛋白質結構，在檢測過程中易形成假陽性，因此，被檢樣品在嚴禁反復凍融。

3 人為操作因素

人為因素也是影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結果的主要因素，人為因素主要表現(xiàn)在加樣、溫育、洗板、顯色、結果判定等眾多因素均可以影響實驗結果。

3.1 加樣操作因素

不同類型抗體檢測技術被應用于動物傳染性疾病抗體效價檢測中，在檢測過程中加樣成為影響動物傳染性疾病抗體效價主要因素。尤其在添加樣品過程中，一定要注意加樣過程中不能出現(xiàn)氣泡，加樣要均勻，加樣過程中一定要定量，一般為50μl樣品，輕輕加到被檢樣品孔。另外，要注意樣品在檢測前一定要解凍完全，樣品在使用之前提前拿出來，在室溫解凍后，混合均勻后，在進行檢測。

3.2 孵育時間與溫度

ELISA檢測相關抗體時，被檢樣品在加完后，一般進行孵育，使被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結合，在被檢樣品和所包被抗原或者抗體更好的結合時需要合適溫度與時間。不同類型抗體檢測過程中應參照說明書要求進行孵育，孵育時間和溫度嚴格按照說明書推薦進行操作。使ELISA包被的抗原或者抗體失活后，使被檢樣品不能與抗體或者抗原結合形成抗原符合物，嚴重影響實驗結果。

3.3 洗板次數(shù)因素

ELISA檢測相關抗體時，加完二抗進行孵育后需進行洗板，一般情況性有手工洗板和機器洗板兩種方式。尤其在洗板過程中，洗滌次數(shù)應該合理，洗滌次數(shù)過多容易洗掉反應結合的復合物，洗板次數(shù)過少導致洗滌不干凈，容易造成二抗稀釋液的殘留，影響反應結果。在洗滌完后注意拍板，把多余洗滌液甩出去，以免影響實驗結果。

3.4 結果判定因素

在檢測過程中，顯色反應結束，加終止液，將酶標板放在酶標儀上讀取結果要在15min內完成，設定的波長要與試劑說明書保持一致，酶標儀使用前先預熱15～30min后，空白板自檢1～2次再進行樣品測試[2]。

4 環(huán)境因素

溫度、濕度等外界的環(huán)境對ELISA檢測結果影響極大。實驗室溫度過高或過低都會影響試劑的穩(wěn)定性、敏感性和樣品與試劑的有效結合，實驗室檢測時適宜的溫度是20～25℃。

綜上所述，用不同類型的ELISA檢測動物相關傳染性疾病抗體效價時，操作過程中應嚴格按照說明書進行操作，避免出現(xiàn)不良因素影響實驗結果，因此，在實驗過程中嚴格進行操作，減少誤差，提高實驗的準確性。

參考文獻：

[1]王奧.化學實驗室檢測結果質量控制的影響因素及對策[J].化工設計通訊,2017,43(2):125,143.

[2]李清竹.影響血凝和血凝抑制試驗結果的因素[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2012(5):70.