張應(yīng)龍 ，張學(xué)娜 ，杜國輝 ，劉永慧 ，徐翠翠

（1.山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東濟(jì)南 250103；2.山東商院食品檢測(cè)有限公司，山東濟(jì)南 250014）

茶葉是我國一種傳統(tǒng)的健康飲品，具有潤嗓、養(yǎng)生等作用，近些年來愈加受到國內(nèi)外消費(fèi)者的喜愛，每年的外貿(mào)出口量都很大。我國是世界上最大的茶葉種植國，茶葉產(chǎn)品出口量位居世界第三，為國民經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)總值提升做出了巨大貢獻(xiàn)。隨著茶產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和出口量的連年增加，茶產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)日益提高，工作重點(diǎn)從過去的產(chǎn)品質(zhì)量等級(jí)檢測(cè)向安全衛(wèi)生檢測(cè)轉(zhuǎn)變，這就要求加大茶葉中的農(nóng)藥殘留測(cè)定工作，將農(nóng)藥含量控制在允許范圍內(nèi)，保證茶葉產(chǎn)品健康。

1 我國茶葉農(nóng)藥使用情況

茶樹一般生長于溫暖濕潤的氣候環(huán)境下，容易發(fā)生病蟲害。據(jù)資料顯示，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的茶樹病害超過一百三十種，茶樹蟲害超過八百種，嚴(yán)重危及茶樹健康成長，所以使用農(nóng)藥是茶葉生長過程中的必要養(yǎng)護(hù)管理手段，是茶樹健康、茁壯成長的基本保障。根據(jù)相關(guān)機(jī)構(gòu)公布的資料顯示，茶樹、茶葉使用的農(nóng)藥已經(jīng)超過了八十種，以化學(xué)類農(nóng)藥為主，生物類及其他類型的農(nóng)藥減少。其中，常用的農(nóng)藥有殺蟲劑、殺菌劑、除草劑等。隨著藥劑的不斷使用，害蟲抗藥性越來越高，人們開始使用復(fù)配農(nóng)藥，用以防治茶樹、茶葉的病蟲害。雖然農(nóng)藥可以防治病蟲害，但是它的危害性很大，若殘留量過大，很可能危及食用者的生命健康安全。

2 茶葉中農(nóng)藥殘留測(cè)定技術(shù)分析

2.1 樣品前處理

2.1.1 固相萃取技術(shù)

這一種樣品前處理技術(shù)是在液固萃取和液相色譜相結(jié)合基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，是常用的一種農(nóng)藥殘留凈化手段。該種技術(shù)通過固體吸附劑吸附液體樣品中的化合物，使基體與干擾化合物分離開來，再加熱吸附，實(shí)現(xiàn)分離與富集目標(biāo)。

2.1.2 固相微萃取技術(shù)

該種技術(shù)集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣等于一體，于1994年應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，效果十分顯著。實(shí)際操作中，通過改變石英纖維表面固定液的pH值、厚度或樣品加熱等來保證固相微萃取的靈敏性。同時(shí)，固相微萃取技術(shù)與CG等技術(shù)聯(lián)用，可直接對(duì)均相樣品進(jìn)行分析。

2.1.3 基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)

該種技術(shù)是1989年提出的，它將樣品與反相填料混合起來，均勻攪拌成半固定樁柱后再淋洗，將傳統(tǒng)的樣品前處理過程中的勻化、提取等環(huán)節(jié)濃縮起來，是一種比較簡化的樣品提取凈化方法。大量事實(shí)證明，該種技術(shù)十分適用于極性農(nóng)藥和分子結(jié)構(gòu)農(nóng)藥的樣品提取凈化。

2.1.4 液相微萃取技術(shù)

該種技術(shù)是新發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)，具有靈敏度高、快速、精確及環(huán)境友好等特點(diǎn)。這一種樣品前處理技術(shù)把樣品采樣、萃取、濃縮等操作融于一體，其先進(jìn)性、有效性有目共睹。

2.2 樣品檢測(cè)

2.2.1 儀器分析法

在茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，儀器分析法是常用的一種技術(shù)，具有精確、高靈敏度等技術(shù)優(yōu)勢(shì)。儀器分析法包括光譜法、薄層色譜法等。

光譜法通過對(duì)農(nóng)藥中的官能團(tuán)、還原產(chǎn)物與顯色劑的氧化、酷化等反應(yīng)下產(chǎn)生的特定波長顏色進(jìn)行測(cè)定來檢測(cè)農(nóng)藥殘留量。該種技術(shù)主要對(duì)商品農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定，檢出限在級(jí)。實(shí)際應(yīng)用中，該種檢測(cè)技術(shù)的干擾因素較多，容易出現(xiàn)假陰性，所以用多測(cè)檢測(cè)測(cè)定，或采用其他測(cè)定方法校驗(yàn)。

薄層色譜法利用特殊類型的顯色劑來觀察斑點(diǎn)顏色，對(duì)復(fù)雜混合物的分離、測(cè)定有著顯著效果，所以應(yīng)用于茶葉農(nóng)藥殘留有特殊作用。周永德等人利用該種技術(shù)方法測(cè)定甲胺磷農(nóng)藥，結(jié)果顯示濃度0.12ug/L。

2.2.2 酶抑制法

這種農(nóng)藥檢測(cè)技術(shù)利用有機(jī)磷類農(nóng)藥的可特異性對(duì)昆蟲中樞中的乙酞膽堿酷酶進(jìn)行抑制，破壞掉正常的神經(jīng)傳導(dǎo)，使昆蟲死亡的原理，通過分析活性受到抑制情況來判斷樣品中是否含有機(jī)磷類農(nóng)藥。根據(jù)這樣的原理，行業(yè)內(nèi)技術(shù)人員已經(jīng)成功研制出了速測(cè)卡、速測(cè)儀等檢定儀器設(shè)備，用來檢測(cè)茶葉中是否含有有機(jī)磷類農(nóng)藥。

2.2.3 生物傳感器法

所謂的生物傳感器法就是基于生物傳感器發(fā)展起來的一種農(nóng)藥殘留測(cè)定技術(shù)，其中的生物傳感器是一種轉(zhuǎn)換器與生物敏感部件相互配合的裝置，對(duì)生物活性物具有良好的可逆響應(yīng)。利用生物傳感器對(duì)樣品的pH值、電導(dǎo)等進(jìn)行測(cè)定，從而茶葉中的農(nóng)藥殘留物進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。目前，生物傳感器采用的生物物質(zhì)包括全細(xì)胞、酶、受體、細(xì)胞器、抗體等，所以生物物質(zhì)不同，生物傳感器的具體類型也不同，現(xiàn)有酶生物傳感器、免疫傳感器、全細(xì)胞生物傳感器等。免疫傳感器的成功研發(fā)與應(yīng)用，極大提高了農(nóng)藥殘留測(cè)定的靈敏度，可縮短檢測(cè)時(shí)間。

行業(yè)中現(xiàn)有的光熱生物傳感器可以對(duì)洋蔥、色拉等植物樣品中的農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定，能夠檢測(cè)出樣品中是否含有有機(jī)磷類農(nóng)藥。鑒于這種生物傳感器在農(nóng)藥殘留測(cè)定上有著突出效果，可將其應(yīng)用于茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)上，勢(shì)必也可以達(dá)到良好的效果。生物傳感器在農(nóng)藥殘留檢測(cè)上具備實(shí)時(shí)、操作簡單、攜帶方便等優(yōu)勢(shì)，且成本相對(duì)的較低，不僅是對(duì)傳統(tǒng)農(nóng)藥檢測(cè)技術(shù)方法的補(bǔ)充，也是農(nóng)藥殘留測(cè)定領(lǐng)域的一項(xiàng)技術(shù)創(chuàng)新，有著廣闊的發(fā)展前景，值得大力應(yīng)用推廣。

2.2.4 免疫分析法

這種農(nóng)藥檢測(cè)方式是一種利用抗體原反映，結(jié)合現(xiàn)代測(cè)試手段進(jìn)行測(cè)定分析的方法。用于農(nóng)藥免疫分析抗體標(biāo)記類型包括四種，分別為酶標(biāo)記、放射性標(biāo)記、熒光抗體標(biāo)記、生物素標(biāo)記等。其中，酶標(biāo)記抗體的敏感度高，保存時(shí)間長，能夠直接利用光譜進(jìn)行分析，所以通過檢測(cè)農(nóng)藥殘留快速、方便，是一種常用的農(nóng)藥殘留定性、定量分析方法。從總體上看，免疫分析法的優(yōu)勢(shì)十分突出，主要體現(xiàn)在成本低、方便快速、安全可靠、分析容量大等方面。當(dāng)然，除了優(yōu)勢(shì)突出外，它的缺陷也是比較明顯的，如變異系數(shù)大，酶標(biāo)記抗體的使用量大，一次只能對(duì)一個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，而且試劑的選擇性高，與結(jié)構(gòu)類化合物會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，無法同時(shí)測(cè)量分析多種成分。

2.2.5 生物芯片技術(shù)

這種農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)首先將大量的生存信息存儲(chǔ)在一個(gè)小片固相載體上，然后利用生物化學(xué)處理技術(shù)進(jìn)行處理，是農(nóng)藥檢測(cè)領(lǐng)域新興的一種方法。如，對(duì)有機(jī)磷類農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)分析時(shí)，先將抗有機(jī)磷類農(nóng)藥的抗體存儲(chǔ)在生物芯片上并固定住，再使這一抗體與被標(biāo)記過的抗原相結(jié)合，發(fā)生相應(yīng)的反應(yīng)，通過觀察與分析反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)對(duì)有機(jī)磷類農(nóng)藥的測(cè)定。在有機(jī)磷類農(nóng)藥檢測(cè)中常用的顯色技術(shù)主要包括發(fā)光免疫標(biāo)記技術(shù)、酶標(biāo)技術(shù)和熒光素標(biāo)記技術(shù)等。那么，如何篩選抗體呢？主要方法是將己知蛋白點(diǎn)印在PvDF膜上，制作成為蛋白微陳列，然后與芯片發(fā)生相應(yīng)的孵化反應(yīng)，之后再用酶標(biāo)抗體的第二抗體與芯片一抗體再次發(fā)生復(fù)合反應(yīng)，利用它們之間的顯色反應(yīng)來檢測(cè)是是否存在抗體，進(jìn)而完成抗體篩選，對(duì)茶葉中的農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定。

2.2.6 活體檢測(cè)法

這種檢測(cè)方法直接用活的生物對(duì)茶葉中的農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定。如果茶葉中有農(nóng)藥殘留，家蠅勢(shì)可能會(huì)中毒，基于這樣的現(xiàn)實(shí)情況，現(xiàn)選用敏感系的家蠅，用標(biāo)本喂食家蠅，然后通過檢測(cè)家蠅中的農(nóng)藥殘留量來測(cè)定茶葉中的農(nóng)藥殘留量。這種農(nóng)藥測(cè)定方法一般可以在4-6個(gè)小時(shí)內(nèi)完成農(nóng)藥殘留測(cè)定。但是實(shí)際應(yīng)用中，這種農(nóng)藥測(cè)定方法只對(duì)少數(shù)農(nóng)藥藥劑有效，且不能分辨出農(nóng)藥種類，從中可以明顯看出這一種技術(shù)的操作過程簡單，無需使用復(fù)雜的儀器設(shè)備，茶農(nóng)可自行利用這種技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)語

綜上所述，茶葉是人們生活中的必需品，很多人喜愛飲茶，愛好茶道，將飲茶看作是生活中不可缺少的一部分。所以，為了保證食用者的生命健康，必須做好茶葉中的農(nóng)藥測(cè)定工作，嚴(yán)控農(nóng)藥殘留量。除了采用文中提及的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)外，還應(yīng)當(dāng)鼓勵(lì)茶農(nóng)少使用農(nóng)藥，從源頭上杜絕農(nóng)藥污染，控制并降低茶葉產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量，確保茶產(chǎn)品質(zhì)量、衛(wèi)生達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，讓人們放心飲用。

[1]文洋，譚君，譚斌，劉仲華.茶葉中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2017，8（03）：826-831.

[2]王文敏.GC-MS法測(cè)定茶葉中有機(jī)氯組分的前處理技術(shù)綜述[J].廣東化工，2016，43（02）：117-118.

[3]劉騰飛，董明輝，楊代鳳，張存政，顧俊榮，徐德良.茶葉質(zhì)量安全主要化學(xué)影響因素分析方法進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2017，1（25）：12-25.

[4]劉子艷，李嘉林.茶葉中農(nóng)藥殘留物質(zhì)的測(cè)定方法分析[J].福建茶葉，2016，38（03）：13-14.