楊錦濤，程 希，陳紅偉，吳俊偉*，曾楊梅

(1. 西南大學動物科學學院，重慶 402460；2. 重慶布爾動物藥業(yè)有限公司，重慶 402460)

白術屬于菊科、蒼術屬多年生草本植物。喜涼爽氣候，常以根莖入藥，將其根莖用水或米泔水浸泡軟后切片，生用、麩炒或土炒用?，F在主要產自浙江、安徽等地。白術味甘、苦，性微溫，歸脾胃經，具有益氣健脾，利水燥濕，止汗固表和安胎等多種藥用功效，中醫(yī)臨床主要用于食少脾虛，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，自汗，水腫和胎動不安等。近年來研究發(fā)現：白術中含有豐富的多糖、皂苷、揮發(fā)油、氨基酸等多種有效成分[1]，這些活性成分可以作用于消化系統、免疫系統和泌尿系統等[2]。其中，白術多糖(PAM,Polysaccharide ofAtractylodesmacrocephala)是白術的主要生物活性成分之一，常用來作為機體的免疫調節(jié)劑，同時PAM還具有抗氧化、抗衰老、降血糖、抗腫瘤和作用于心肌細胞等作用，臨床上已經用于治療肝炎、腫瘤等疾病[3]。目前，PAM在免疫調節(jié)方面已有大量研究，現對其作用機制綜述如下。

1 PAM對免疫器官的影響

免疫器官是機體執(zhí)行免疫功能的組織結構，也是淋巴細胞和其它免疫細胞增殖分化、成熟定居以及產生免疫應答的場所。免疫器官主要由中樞免疫器官(包括骨髓、胸腺和禽類的法氏囊)和外周免疫器官(包括脾臟、淋巴結和黏膜免疫系統)組成。免疫器官發(fā)育狀況的好壞在一定程度上直接影響和體現了機體免疫力的高低。白術多糖對免疫器官的作用主要是增加動物機體脾臟和胸腺的重量，對免疫器官損傷的拮抗性作用[4-5]，以及作用于腸道黏膜免疫系統等。

陳紅偉等[6]采用不同提取工藝提取白術多糖，然后給免疫抑制小鼠分別灌胃不同提取工藝制備的PAM，灌胃14 d后采血、處死小鼠，測定各項指標。結果表明，不同提取工藝制備的PAM均能夠提高免疫抑制小鼠的脾臟指數和胸腺指數。說明白術多糖能夠提高機體免疫器官重量，這與湯新慧[7]的研究結果相一致。Xie Feng等[8]給小鼠皮下注射口蹄疫疫苗，然后給小鼠灌胃白術多糖0.05 g/只，2周后采血、處死小鼠，測定血清中IgG和腸黏膜各項指標，結果發(fā)現PAM可以提高十二指腸中總sIgA的量，TGF-α，IL-6，TNF-α，IgA+細胞的mRNA表達量，說明PAM能夠提高部分腸黏膜免疫。

2 PAM對免疫細胞的影響

免疫細胞直接或間接參與機體的免疫應答，是機體免疫系統極為重要的組成部分。按照參與固有免疫還是適應性免疫，可將免疫細胞分為固有類免疫細胞和適應性免疫細胞，固有類免疫細胞主要由Mφ(巨噬細胞)、NK細胞(自然殺傷細胞)、粒細胞、肥大細胞，以及屬于固有類淋巴細胞的NKT細胞、γδ T細胞、B1細胞和邊緣區(qū)B細胞組成；適應性免疫細胞由T、B淋巴細胞和DC細胞(樹突狀細胞)組成[9]。PAM能增強機體的細胞免疫，主要體現在以下方面：

2.1 對T、B淋巴細胞的影響 T、B淋巴細胞在機體細胞免疫中具有十分重要的作用，T淋巴細胞及輔助T淋巴細胞(Th)可以刺激B淋巴細胞的生長和分化，同時還可以分泌細胞因子激活巨噬細胞參與細胞介導的免疫應答，B淋巴細胞則主要是產生抗體，在體液免疫中發(fā)揮作用。PAM對T、B淋巴細胞的作用主要是促進其增殖能力。

朱南山等[10]采用MTT法體外培養(yǎng)豬外周血淋巴細胞，并采用不同濃度的PAM處理，結果發(fā)現，不同濃度的PAM均可顯著提高豬外周血淋巴細胞的增殖反應(P<0.05)，其中以200 μg/mL的PAM作用最為明顯。在25～400 μg/mL范圍內基本呈鐘罩形(先升后降)。推測其原因是PAM具有T淋巴細胞有絲分裂原的性質，可促進T淋巴細胞的分裂增殖。Sun等[11]通過試驗證明，RAMPStp和RAMPS60c可以單獨或與植物凝集素協同增強T淋巴細胞增殖。同時，RAMPStp和RAMPS60c可以促進淋巴細胞進入S和G2/M期。RAMPStp和RAMPS60c有效地提高了CD4+T細胞和CD8+T細胞的百分比。胡曉蕾等[12]在SD大鼠的基礎日糧中分別添加0.5%、1%、2%的白術和0.2%、0.5%的白術多糖，飼養(yǎng)5周后取外周血淋巴細胞和脾臟淋巴細胞進行淋巴細胞轉化試驗，結果發(fā)現，日糧中添加0.2%的白術多糖可以顯著提高外周血T、B淋巴細胞和脾臟T、B淋巴細胞的轉化率。

2.2 對單核吞噬細胞的影響 單核吞噬細胞包括血液中的單核細胞和組織中的吞噬細胞。在免疫功能中主要起到吞噬和殺傷作用、抗原加工和遞呈作用、以及合成和分泌各種活性因子。PAM能夠促進單核吞噬細胞的吞噬率和增殖率。

焦艷等[13]通過體內和體外試驗發(fā)現，PAM能增強Kupffer細胞對中性紅吞噬作用、增加ACP活性及NO和TNF-α的產生。但PAM在體外不增加肝實質細胞LDH漏出，對sALT和sGST的活性沒有影響。Wentao Fan等[14]分別將不同濃度的PAM、RAPS(黃芪多糖)和RSPS(防風多糖)通過體外試驗作用于雞巨噬細胞，結果發(fā)現三種多糖均可在適當濃度促進雞巨噬細胞的增殖率。此外，有研究還發(fā)現PAM能促進巨噬細胞的吞噬活性和刺激巨噬細胞產生NO，TNF-α和IFN-γ，PAM激活巨噬細胞產生NO和TNF-α的釋放過程中有NF-κB的參與[15-16]。

2.3 對樹突狀細胞的影響 樹突狀細胞(DC)可以通過吞噬或內噬方式捕獲抗原，之后遷移至血液和淋巴液并循環(huán)至淋巴器官將抗原遞呈給TH細胞，此外樹突狀細胞還能誘導T細胞極化，參與調節(jié)B細胞功能和固有免疫應答，在細胞免疫中具有重要作用。PAM對DC的影響主要是促進其表面分子的表達、影響其吞噬能力以及促進其分泌細胞因子。

汲廣全等[17]通過體外試驗將PAM作用于DC細胞，結果發(fā)現白術多糖能夠上調DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表達，并且呈出一定的劑量依賴性，當PAM為100 μg/mL時效果最好；成熟的DC吞噬能力弱，未成熟的DC吞噬能力強，試驗發(fā)現PAM同時還使DC吞噬能力下降，說明PAM能夠促進DC細胞成熟；此外，試驗還發(fā)現白術多糖能夠促進DC分泌IL-12、TNF-α和刺激DC TLR4表達的增加。

3 PAM對免疫分子的影響

免疫分子按照結構和類別來區(qū)分，可以分為細胞因子、趨化因子及其受體；補體及其調節(jié)分子；分化抗原(CD分子)；黏附分子；TCR、BCR和抗體分子；MHC基因產物[9]。PAM對免疫分子的作用主要體現在細胞因子、補體分子和抗體分子方面。

3.1 對細胞因子的影響 細胞因子是一類高活性多功能蛋白質多肽分子，作為細胞間信號傳遞分子，主要介導和調節(jié)免疫應答及炎癥反應，刺激造血功能，并參與組織修復等，在抗感染免疫、抗腫瘤免疫、抗排斥反應、自身免疫病治療以及恢復造血功能等方面具有重要作用。PAM可以促進機體細胞對IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌，此外，有研究表明PAM還可提高脾臟中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α和NF-AT的mRNA量[18-19]。IL-2主要由CD4 Th1細胞產生，CD8 T細胞也可產生少量IL-2，IL-2是T細胞激活并進入細胞分裂的關鍵成分，它還可以刺激NK細胞的生長和增強其殺傷力，并激發(fā)B細胞生長和抗體產生。IL-6能夠誘導Th細胞表達IL-2R，可與IL-1和TNF協同刺激T細胞，在全身炎癥反應過程中具有非常重要的作用，此外，它還能促進B細胞的增殖與分化和造血干細胞的再生與血小板產生。IFN-γ可以增加巨噬細胞殺傷和吞噬細菌的能力，誘導和增加多種細胞表達MHCⅠ類和MHCⅡ類分子和促進T細胞分化等。

毛俊浩等[20]研究了白術多糖在體內和體外對小鼠脾淋巴細胞的調節(jié)作用，結果發(fā)現：PAM在適當濃度范圍內能夠單獨激活或協同Con A/PHA促進正常小鼠淋巴細胞轉化，體外試驗還表明，當PAM濃度為5 mg/L和10 mg/L時，PAM能夠顯著提高正常小鼠脾臟T淋巴細胞分泌IL-2的能力。盧一松等[21]從中藥白術中提取多糖成分，然后分別將不同濃度白術多糖水溶液腹腔注射給小鼠，6 d后檢測小鼠血清中IFN-γ水平、脾指數和胸腺指數，結果發(fā)現中劑量組(0.8 mg/只)和高劑量組(1.6 mg/只)小鼠血清中IFN-γ水平顯著高于空白對照組小鼠血清中IFN-γ水平，且高劑量組差異性最為顯著。

周劍等[22]將不同濃度的PAM作用于H22肝癌小鼠，結果發(fā)現，各種濃度的PAM均可顯著提高血清中IL-2，降低血清中VEGF水平，同時下調Bcl-2基因的表達，而上調p21基因表達。而Xu Danning等[23]給雞進行熱應激，然后給其分別飼喂硒、白術多糖或硒化白術多糖，結果發(fā)現，熱應激能夠顯著提高雞脾臟和胸腺中IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的mRNA量，而白術多糖能夠顯著降低熱應激所致的這種變化，說明白術多糖能夠使機體IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的mRNA量恢復正常。

3.2 對補體分子的影響 補體是廣泛存在于血清中的一組不耐熱具有酶活性的球蛋白，激活后的補體具有細胞溶解、細胞粘附調理、免疫調節(jié)、介導炎癥反應、中和病毒、免疫復合物溶解和清除等重要的生物學效應。PAM能夠提高血清中的C3、C4補體成分。C3、C4補體主要在肝、脾、肺、淋巴組織、巨噬細胞和骨髓合成。

胡曉蕾等[12]在SD大鼠的基礎日糧中分別添加0.5%、1%、2%的白術和0.2%、0.5%的白術多糖，飼養(yǎng)5周后檢測相關指標，結果發(fā)現除0.5%白術多糖添加組外，其他添加白術組和白術多糖組均可顯著提高血清抗體IgG水平，同時對IgM和IgA水平和血清補體C3、C4水平均有提高的趨勢，但統計學上差異不顯著。

3.3 對抗體分子的影響 抗體是能與抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白，根據其結構大體可以分為IgG、IgA、IgM、IgE和IgD，不同的抗體在機體的不同時期、不同部位具有不同的作用。PAM可以提高機體的IgG和IgM抗體水平，IgG在抗感染免疫中具有非常重要的作用，同時它還參與抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗毒素等免疫過程。而IgM在動物機體初次體液免疫反應過程中最早產生，它具有抗菌、抗病毒、中和毒素、抗腫瘤等免疫活性。

孫文平等[24]通過試驗證明，PAM能夠刺激小鼠產生相應的特異性IgG類抗體，同時還能在一定程度上激發(fā)非特異性IgG類抗體。柴日弈等[25]以卵清白蛋白(OVA)為模式抗原，然后分別設含150、300、600 μg的白術多糖，將抗原與佐劑混合后腹部皮下注射，共注射2次，間隔2周，于第2次給藥2周后摘除眼球采血，然后采用間接EL1SA法檢測血清抗OVA抗體及其亞類水平。結果顯示，在OVA疫苗中添加150 μg和300 μg白術多糖能顯著提高ICR小鼠血清中抗OVA特異性IgG水平，與不加多糖的對照組比較，白術多糖組(300 μg)可顯著提高小鼠血清抗OVA特異性IgG亞類IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的水平(P<0.05)。此外，L.L.Li等[18]在早期斷奶仔豬的基礎日糧中添加純化白術多糖、白術粗多糖或混合粗多糖，結果發(fā)現三者均可顯著提高血清中IgM抗體水平(P<0.05)。

4 結 語

綜上所述，PAM可以通過調節(jié)免疫器官、免疫細胞、免疫分子三個層次，共同協調發(fā)揮對機體的免疫調節(jié)作用，既作用于機體的特異性免疫，同時又作用于機體的非特異性免疫，對正常及非正常機體都發(fā)揮著免疫調節(jié)作用。白術多糖與其它中藥制劑一樣，具有毒副作用小、無殘留等特點，在臨床應用中具有一定優(yōu)勢。但是目前對PAM的研究大多僅限于粗多糖和藥效的研究，對于在多少濃度范圍內的PAM、帶有何種結構和多少分子量的PAM能夠顯著影響機體免疫能力還不清楚，同時對于具體影響機體的哪一部分免疫系統以及具體的影響機制也仍需進一步研究。

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