孟贊

【摘 要】目的：以簡(jiǎn)單、高效的方法建立少突膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧模型。方法： 少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)至70～80%融合，將24孔培養(yǎng)板每6孔劃分為一組，分為：（1）對(duì)照組：細(xì)胞培養(yǎng)液換以常規(guī)培養(yǎng)液；（2）缺糖組：細(xì)胞培養(yǎng)液換以低糖培養(yǎng)液（3）缺氧組：細(xì)胞培養(yǎng)換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的常規(guī)培養(yǎng)液；（4）缺糖缺氧組：細(xì)胞培養(yǎng)液換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液。顯微鏡下觀察各組細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)的改變。Hoechst染色觀察凋亡小體。結(jié)果：（1）缺血缺氧組比較于對(duì)照組，有大量漂浮的細(xì)胞，僅有少量的細(xì)胞散在分布于瓶底或玻片上，大量細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，而且細(xì)胞突起、胞體嚴(yán)重回縮。（2）缺血缺氧組比較于對(duì)照組細(xì)胞量少，且呈小圓形形態(tài)，胞質(zhì)胞核深染。結(jié)論： 以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液可以獲得少突膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧模型。

【關(guān)鍵詞】少突膠質(zhì)細(xì)胞；缺血缺氧損傷模型

隨著社會(huì)人口老齡化，神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病率日益增高，不僅使患者的預(yù)期壽命和健康預(yù)期壽命縮短，而且給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，而臨床上目前對(duì)于這類疾病尚無(wú)有效控制病程進(jìn)展的措施。瑞士研究者發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病與髓鞘脫失有關(guān)，進(jìn)一步研究證明少突膠質(zhì)細(xì)胞退化導(dǎo)致脫髓鞘，研究表明少突膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)缺血缺氧損傷較其他膠質(zhì)細(xì)胞敏感。因此，有學(xué)者提出少突膠質(zhì)細(xì)胞的缺血缺氧損傷是神經(jīng)退行性疾病重要原因。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞系與其在體特性極其相關(guān)，通過(guò)體外培養(yǎng)可了解到少突膠質(zhì)細(xì)胞系的存活、增殖、分化以及發(fā)育過(guò)程細(xì)胞的生物化學(xué)變化等。本研究參照相關(guān)文獻(xiàn)，成功建立可行的少突膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧損傷模型，為研究少突膠質(zhì)細(xì)胞的損傷修復(fù)及其分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1.材料和方法

1.1 材料

器材：恒溫培養(yǎng)箱、電冰箱、離心機(jī)、顯微鏡、超凈工作臺(tái)、吸管、膠頭滴管、離心管、培養(yǎng)瓶、試管架、酒精燈。

試劑：DMEM培養(yǎng)液、血清、胰蛋白酶液，75%乙醇、DMSO、PBS、Na2S2O4。

B104 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株為第三軍醫(yī)大學(xué)贈(zèng)送。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方式

少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)至70～80%融合，將24孔培養(yǎng)板每6孔劃分為一組，分為：

（1）對(duì)照組：細(xì)胞換以常規(guī)培養(yǎng)液；

（2）缺糖組：細(xì)胞換以低糖培養(yǎng)液；

（3）缺氧組：細(xì)胞培養(yǎng)換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的常規(guī)培養(yǎng)液；

（4）缺糖缺氧組：細(xì)胞換以含Na2S2O4終濃度1mmol/L的低糖培養(yǎng)液。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

（1）顯微鏡下觀察

顯微鏡下觀察各組細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)的改變。

（2）Hoechst染色

Hoechst染色觀察凋亡小體

2.結(jié)果

2.1顯微鏡下觀察各組細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)的改變

缺血缺氧組比較于對(duì)照組，有大量漂浮的細(xì)胞，僅有少量的細(xì)胞散在分布于瓶底或玻片上，大量細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，而且細(xì)胞突起、胞體嚴(yán)重回縮。

2.2 Hoechst染色顯微鏡下觀察凋亡小體

缺血缺氧組細(xì)胞出現(xiàn)凋亡小體。（Fig.2）

隨著神經(jīng)科學(xué)的迅速發(fā)展，離體培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞將被越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于包括細(xì)胞功能，神經(jīng)發(fā)育，退行性疾病等在內(nèi)的多領(lǐng)域，多層次的研究。本實(shí)驗(yàn)建立了可行的少突膠質(zhì)細(xì)胞缺血缺氧損傷模型為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行打下基礎(chǔ)。

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