王艷玲 沈陽市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 （遼寧 沈陽 110032）

內(nèi)容提要： 目的：探討熒光免疫層析法降鈣素原檢測(cè)試劑盒的臨床性能。方法：使用熒光免疫層析法和ELISA檢測(cè)法，通過對(duì)比檢測(cè)結(jié)果的精密度、相對(duì)靈敏度、特異度，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析評(píng)價(jià)熒光免疫層析法降鈣素原檢測(cè)試劑盒的價(jià)值，為臨床工作提供科學(xué)的依據(jù)。結(jié)果：與ELISA檢測(cè)法相比較，熒光免疫層析法檢測(cè)的結(jié)果精密度更好，低濃度和高濃度樣本的精密度系數(shù)分別為8.6%和4.8%；線性結(jié)果提示，在試劑盒標(biāo)注的檢測(cè)范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系（r=0.9978）；兩種方法試劑盒檢測(cè)結(jié)果一致性良好（r=0.9681）；在0.5ng/mL和2.0ng/mL兩個(gè)特定濃度值時(shí)，熒光免疫層析法的靈敏度和特異度均高于85%。結(jié)論：熒光免疫層析法降鈣素原檢測(cè)試劑盒準(zhǔn)確度更高、臨床應(yīng)用的靈敏度和特異度均高，線性關(guān)系良好，與ELISA檢測(cè)比較效果更佳，臨床價(jià)值更高。

降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體，它的組成包含一定量的氨基酸，是一種大分子量的糖蛋白。PCT在正常生理情況下是由甲狀腺C細(xì)胞分泌而成[1]，當(dāng)機(jī)體收到外界感染而產(chǎn)生的應(yīng)激應(yīng)答時(shí)，除甲狀腺C細(xì)胞分泌PCT以外，還有其他細(xì)胞和組織同樣分泌PCT，此時(shí)檢測(cè)體內(nèi)的PCT含量則明顯高于正常健康狀態(tài)下的含量，因此，PCT也是臨床上診斷感染、化膿炎癥等的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。在感染最初的3h內(nèi)可以檢測(cè)到PCT含量，當(dāng)6～12h時(shí)，感染體內(nèi)的PCT分泌量達(dá)最高[2]，為感染峰值，然后會(huì)隨著時(shí)間推移慢慢下降，相關(guān)文獻(xiàn)分析所得，PCT含量和感染嚴(yán)重程度有很大相關(guān)性，感染越嚴(yán)重，PCT含量越高，且該物質(zhì)在體內(nèi)的半衰期較長，代謝較慢，對(duì)人體危害很大，早期發(fā)現(xiàn)、早期檢測(cè)、早期治療對(duì)患者感染預(yù)后有至關(guān)重要的意義。本文探討熒光免疫層析試劑盒檢測(cè)方法的效果，將ELISA作為對(duì)照，評(píng)價(jià)該方法的準(zhǔn)確性和綜合價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇本市某醫(yī)院2016年2月～2018年2月門診登記的疑似細(xì)菌感染病例共100例為研究對(duì)象，排除采血樣本中的溶血、脂血、黃疸等疾病病例，選擇共100例血液樣本參加檢測(cè)。100份樣本中無年齡、性別等一般資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。血清PCT濃度檢測(cè)范圍覆蓋了試劑盒標(biāo)準(zhǔn)范圍（0.01～100ng/mL），根據(jù) VIDAS酶聯(lián)免疫熒光法來分析PCT濃度檢測(cè)結(jié)果：濃度在0.25ng/mL及以下的共有18例、超過0.25ng/mL不高于0.5ng/mL的共有10例、超過0.5ng/mL不高于2ng/mL的共有26例、超過2ng/mL不高于10ng/mL的共有27例、超過10ng/mL的共有19例。所應(yīng)用的儀器為梅里埃VIDAS酶聯(lián)免疫熒光法分析系統(tǒng)及PCT檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)為1002934040），生產(chǎn)廠家為梅里埃診斷產(chǎn)品上海分公司[3]，天寶頌原生物熒光免疫分析儀（TEBSUN）及PCT檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)為01220140426），生產(chǎn)廠家為北京瑞禾宏業(yè)生物技術(shù)有限公司[4]。

1.2 方法

ELISA檢測(cè)：免疫測(cè)定夾心法與最終的熒光檢測(cè)相結(jié)合是其工作原理，首先配置好待檢測(cè)的樣本溶液備用，然后與固定相的抗PCT抗體結(jié)合，再結(jié)合堿性磷酸酶標(biāo)記的抗PCT單克隆抗體，將制備好待檢測(cè)的溶液置于波長405nm下，看水解后的熒光強(qiáng)度所反映的PCT濃度值。線性范圍區(qū)間是0.05～200ng/mL。

熒光免疫層析法：層析夾心法工作原理，在層析進(jìn)行時(shí)，樣本的PCT與標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合，從硝酸纖維素膜層逐漸移動(dòng)至檢測(cè)區(qū)層，結(jié)合物最后沉淀在T區(qū)，標(biāo)記熒光結(jié)合物向系統(tǒng)發(fā)出信號(hào)，收到反饋后轉(zhuǎn)化為定量的數(shù)據(jù)結(jié)果。與ELISA檢測(cè)不同的是線性范圍區(qū)間是0.01～100ng/mL。

比較兩種方法測(cè)定的結(jié)果的精密度、方法學(xué)本身操作、線性范圍、特異度及靈敏度、質(zhì)量控制上述幾項(xiàng)指標(biāo)。

2.結(jié)果

2.1 精密度比較（準(zhǔn)確性）

參照標(biāo)準(zhǔn)是美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）定制的EP5-A程序[5]，重復(fù)試驗(yàn)20次分別測(cè)量試劑盒高低值，計(jì)算平均值誤差在3以上的均作為離群點(diǎn)，離群點(diǎn)是影響結(jié)果準(zhǔn)確性即精密度判斷的重要影響因素[6]。經(jīng)測(cè)得和計(jì)算得出熒光免疫層析法的高（高濃度）低（低濃度）值變異系數(shù)分別為8.6%和4.8%，與試劑盒要求的結(jié)果范圍相符，精密度良好。各個(gè)離散點(diǎn)和離散點(diǎn)的平均誤差值較小，繪制回歸曲線線性關(guān)系良好。

2.2 方法學(xué)比較

本次試驗(yàn)檢測(cè)的樣本量為100份，其中出現(xiàn)2例檢測(cè)結(jié)果超過試劑盒標(biāo)準(zhǔn)范圍區(qū)間，統(tǒng)計(jì)學(xué)不采用該結(jié)果，予以剔除，另外有7例結(jié)果接近于0.05ng/mL，計(jì)算數(shù)據(jù)時(shí)按照0.05ng/mL錄入，108份樣本采用配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析，得出t值為-0.586，P＞0.05，成對(duì)樣本的相關(guān)系數(shù)r為0.9681，P＜0.01，兩樣本試劑盒結(jié)果值呈正相關(guān)關(guān)系。

2.3 靈敏度和特異度

（臨界值0.5ng/mL）TEBSUN試劑盒相對(duì)于VIDAS試劑盒的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算的靈敏度達(dá)96.54%，相對(duì)特異度為85.33%；（臨界值2.0ng/mL）TEMSUN試劑盒相對(duì)于VIDAS試劑盒的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算的靈敏度達(dá)86.01%，相對(duì)特異度為97.89%，總體符合率達(dá)94.33%。

3.討論

近年來，細(xì)菌譜逐漸擴(kuò)大，抗生素也隨之增加，然而醫(yī)學(xué)對(duì)于臨床上不同菌株的快速診斷和鑒別也有了新的要求[7]。檢測(cè)方法和精準(zhǔn)的操作對(duì)于結(jié)果有著不同的意義。本文探討的是熒光免疫層析法來檢測(cè)降鈣素原試劑盒的臨床性能情況，收到了很好的試驗(yàn)結(jié)果，檢測(cè)的靈敏度、特異度、精準(zhǔn)度都較高，較于其他檢測(cè)方法更有優(yōu)勢(shì)。早期快速準(zhǔn)確的檢測(cè)病菌、及時(shí)做出準(zhǔn)確的診斷對(duì)患者預(yù)后結(jié)局有很重要的意義。熒光免疫層析法有著很高的精準(zhǔn)度、相對(duì)靈敏度和特異度也較高，檢測(cè)時(shí)限也較短，這種方法更適用于急診重癥感染的患者。PCT熒光染色因?yàn)樗休^高的識(shí)別性，當(dāng)細(xì)菌感染后，進(jìn)行熒光標(biāo)記被檢測(cè)到的時(shí)間很短[8]，所以臨床上被實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用。全身炎癥綜合反應(yīng)如膿毒血癥等利用熒光層析法可以得到快速準(zhǔn)確的結(jié)果輔助臨床鑒別診斷。