李貝貝　劉崇懷　姜建福

摘要：品種鑒定是葡萄種質(zhì)資源保存、研究、開發(fā)利用以及新品種品種權保護的重要依據(jù)。隨著分子生物學技術的深入發(fā)展，出現(xiàn)了多種基于DNA水平的分子標記技術用于品種鑒定。本文綜述了目前國內(nèi)外幾種主要的分子標記技術（AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP、iPBS）在葡萄品種鑒定中的應用與研究進展，并闡述了各種標記方法的基本原理和特點，以期為今后葡萄品種鑒定提供參考依據(jù)。

關鍵詞：葡萄；分子標記；品種鑒定；研究進展；基本原理；特點

中圖分類號：S663.101 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2017）15-0015-06

葡萄為葡萄科（Vitaceae）葡萄屬（Vitis L.）植物，是世界范圍內(nèi)栽培最廣泛的樹種之一，目前世界已經(jīng)報道的葡萄品種有6 000～10 000個[1]。在葡萄的生產(chǎn)過程中，優(yōu)良品種是提高葡萄質(zhì)量和種植效益的必要條件，也是其產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要保障，回顧我國葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展歷程，每一個快速發(fā)展時期都伴隨著新品種的引進、選育與推廣，新品種對促進葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮著越來越重要的作用[2]。

葡萄多為無性繁殖，扦插繁殖容易，不同地區(qū)之間品種交流頻繁，導致其種類和品種繁多，同名異物及同物異名現(xiàn)象嚴重[3]。另外，由于國內(nèi)現(xiàn)階段的種苗市場管理還不完善，部分不法苗木商為了自身利益，導致市場上以劣充優(yōu)、以假亂真現(xiàn)象時有發(fā)生[4]。因此，為了保護育種者的權益及保證葡萄產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，對葡萄品種進行快速、準確可靠的鑒定顯得尤為重要。同時，隨著我國加入世貿(mào)組織和國際植物新品種保護聯(lián)盟后，一個新品種的推廣、產(chǎn)權保護都必須提供該品種特異的鑒定標記[5]。而傳統(tǒng)的品種鑒定都以形態(tài)學標記為主，該方法易受環(huán)境及季節(jié)的影響，且鑒定時間長、工作量大。此外，由于新品種選育技術的同質(zhì)化，品種之間的形態(tài)差異也越來越小，目測區(qū)分植株性狀就顯得越來越困難。

近年來，隨著分子生物學技術的發(fā)展與成熟，使根據(jù)遺傳物質(zhì)DNA在不同生物個體之間的差異來鑒別生物物種成為可能，并且取得了顯著成果。分子標記技術是一種以DNA多態(tài)性為基礎，通過檢測DNA分子由于缺失、插入、易位、倒位、重排或存在長短與排列不一的重復序列等機制而產(chǎn)生多態(tài)性的技術[6]，該技術不受環(huán)境因素及發(fā)育階段的影響，具有快速、簡單、準確、可靠、穩(wěn)定、經(jīng)濟等特點。國際植物品種權保護聯(lián)盟（International Union for the Protection of New Varieties of Plants，簡稱UPOV）也將DNA分子標記鑒定作為農(nóng)作物品種DUS（distinctness uniformity and stability）測試的輔助手段[7]。已經(jīng)發(fā)展起來的分子標記多達60多種，應用較廣的主要有AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP以及iPBS等。目前，DNA分子標記鑒定技術已在多種作物上開展了廣泛的研究，在葡萄品種的鑒定方面取得了很大的進展，本文對目前國內(nèi)外7種主要的分子標記技術原理以及在葡萄品種鑒定上的應用進展作一綜述，以期為今后葡萄品種鑒定技術的選擇提供參考依據(jù)。

1國內(nèi)外葡萄品種的鑒定技術

1.1RAPD技術

隨機擴增多態(tài)DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）分子標記發(fā)展于1990年[8-9]，它是以基因組DNA為模板，利用人工合成的單鏈隨機引物（一般8～10 bp）對其進行PCR擴增，通過凝膠電泳檢測擴增片段，從而得到多態(tài)性標記的一種技術。RAPD標記簡便、快速、成本低，無須了解基因組序列信息，DNA用量少，基于以上優(yōu)點，被廣泛應用于種質(zhì)資源鑒定及遺傳關系分析等方面[10-14]。

1997年，Stavrakakis利用15個RAPD標記鑒別了8個希臘品種，結果表明，RAPD標記技術適合用于葡萄品種鑒定[15]。王軍等利用RAPD標記技術分別分析了中國野生葡萄和鮮食葡萄，認為RAPD標記技術可有效區(qū)分葡萄種質(zhì)，是一種快速、經(jīng)濟實用的分子標記技術[16-17]。Bajraktari等以Rahovec的6個主栽品種為材料，利用10對高效的RAPD引物對其進行鑒定分析，鑒定結果與形態(tài)學檢測的結果完全一致，6份種質(zhì)均被區(qū)分開，排除了同名異物的存在[18]。2008年，李玉霞等依據(jù)RAPD技術對蛇龍珠葡萄的來源和親緣關系進行了分析，認為蛇龍珠可能為法國的嘎赫姆奈赫，而非以前被認為的品麗珠[19]。隨后，2012年李紅娟等利用RAPD分子標記對8個蛇龍珠營養(yǎng)系進行遺傳多樣性分析，并將其與赤霞珠和品麗珠之間的親緣關系進行驗證，結果顯示蛇龍珠的5個營養(yǎng)系之間沒有任何差別，其余3個營養(yǎng)系之間卻存在一定的差別，提出了蛇龍珠在遺傳基礎上與品麗珠有一定的差異，應屬不同品種[20]。Zhao等用基于RAPD標記的MCID法完成了對葡萄品種的鑒定，該方法對將來葡萄品種鑒定以及新品種權保護具有重要意義[21-23]。El-Sayed等僅用1對RAPD引物就將Thompson Seedless、Red Roomy、Palomino、Rish Baba、Ruby Seedless、Beauty Seedless、Superior和Flame Seedless等8個葡萄品種區(qū)分開，再次證明了RAPD標記鑒定葡萄品種的可行性[24]。另外，RAPD標記還可用于區(qū)分芽變品種，如張國海成功地應用RAPD分子標記鑒定了巨峰及其芽變品種98-2、京亞及其芽變品種洛浦早生[25]。RAPD分子標記以其獨特的優(yōu)勢在20世紀90年代前期得到了廣泛的應用，但在實際應用中也存在一定的缺陷，其穩(wěn)定性和重復性較差，這主要是因為該種標記是顯性標記，不能區(qū)別純合體和雜合體。

1.2AFLP技術

擴增片段長度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）標記是由荷蘭科學家Zabeau等發(fā)明的一種分子標記技術[26-27]。其基本原理是利用成對的限制性內(nèi)切酶對基因組DNA進行酶切，酶切片段與人工接頭（與酶切片段含有共同黏末端）連接，并通過引物（引物由接頭，酶切位點和2～3個核苷酸組成）擴增得到大量DNA片段，最后通過聚丙烯酰氨凝膠電泳對擴增片段多態(tài)性進行檢測。AFLP技術結合了RFLP與RAPD等2種分子標記技術的優(yōu)點，既有前者的可靠性，又有后者的靈敏性。endprint

AFLP技術以其重復性好、多態(tài)性高、分辨率高等優(yōu)勢常被用于葡萄無性系變異或突變品種的鑒定[28-29]。該技術可以解決同工酶標記、形態(tài)學、生物化學等不能解決的問題。Scott等成功地應用AFLP技術鑒定了火焰無核及其早熟突變體，這也是首次利用AFLP標記成功鑒定突變體[30]。Cervera等利用AFLP分子標記技術對35個鮮食品種及2個Napoleon無性系變異品種（N10-7、N76-7）進行鑒定，分別使用2個引物組合[2E（+ACC，+ACT）/M+CAT，2E（+ACC，+ACT）/M+CTG]和1個引物組合[2E（+ACC，+ACT）/M+CTT]將鮮食品種和無性系變異品種區(qū)分開，結果表明，AFLP技術是鑒定無性系變異品種的一種有效方法[31]。超藤葡萄是藤稔的芽變品種，二者親緣關系十分接近，鮑露等應用傳統(tǒng)的形態(tài)標記以及RAPD分子標記不易將其區(qū)分開，而利用AFLP標記成功地將其區(qū)分開，這突顯了AFLP標記的重復性強、多態(tài)性豐富的優(yōu)點[32]。2011年，Vlba等采用SSR標記與AFLP標記成功地鑒別開一對同物異名品種（Glianico Nero與Aglianico del Vulture Nero），而早在2001年Costacurta已提出了這樣的猜測，Vlba等對其進行了驗證，認為AFLP是區(qū)分同名異物或同物異名品種的有效方法[33]。無性系篩選是葡萄品種改良的重要方法，近年來育種家在無性系篩選方面也做了很多工作，Manjari Naveen是依據(jù)形態(tài)學篩選出的一個無核白雞心的無性系變異品種，2013年Shinde等對Manjari Naveen與無核白雞心的DNA進行了AFLP分析，結果顯示Manjari Naveen與無核白雞心為2個不同的品種[34]。雖然AFLP分子標記穩(wěn)定性好、準確性高、能有效區(qū)分親緣關系較近的品種，但其對DNA質(zhì)量要求較高，并且操作復雜、成本較高。

1.3ISSR技術

簡單重復間序列（inter simple sequence repeat，ISSR）是基于微衛(wèi)星標記（SSR）發(fā)展而來的一種分子標記，由Zietkiewicz等于1994年提出[35]。[JP2]它是在微衛(wèi)星序列的3′端或5′端錨定2～4個核苷酸，以其為引物對SSR之間的DNA片段進行擴增。ISSR技術即利用了豐富的SSR序列信息，同時又克服了RFLP技術的局限性和RAPD的假陽性[36]，以其簡單迅速、多態(tài)性豐富、穩(wěn)定高效等特點被廣泛應用于品種鑒定、親緣關系鑒定、遺傳多樣性分析以及遺傳圖譜構建等方面。[JP]

Argade等以印度的43份無籽葡萄品種（歐亞種）為材料，利用ISSR分子標記方法對其進行鑒定，篩選出的14個多態(tài)性引物能夠準確地將樣本區(qū)分開，其中有3對ISSR引物（UBC857、888和890）能將該42個無籽葡萄品種全部清楚地區(qū)分開[37]。Hassan等依據(jù)表型、ISSR標記對3份埃及葡萄品種進行分析，經(jīng)UPGMA軟件聚類發(fā)現(xiàn)Red Romy與Matrouh親緣關系較近，與Bez E1-anza較遠，認為ISSR標記適合于葡萄品種鑒定[38]。2014年，Choudhary等用ISSR分子標記技術，采用10對ISSR引物對Nanasaheb purple、Sonaka、Thompson seedless和Ganesh的遺傳變異進行了分析，再次證明ISSR標記用于葡萄品種鑒定的可行性[39]。錢春等利用ISSR分子標記方法分別鑒定了白香蕉及其芽變品種和巨峰及其芽變株系，結果表明，ISSR標記能有效用于芽變鑒定[40-41]。李繼洋等對新疆19份葡萄品種的DNA進行了ISSR分析，建立了14個葡萄品種的DNA指紋圖譜，為葡萄品種的快速鑒定奠定了基礎[42]。張永輝等應用ISSR技術分析了81份葡萄品種的遺傳關系，根據(jù)聚類結果，將誤定為毛葡萄的毛葡萄1099確定為桑葉葡萄，并確定福建野葡萄和華東葡萄1058屬于同物異名材料[43]。張娜以新疆的137份葡萄種質(zhì)為試驗材料，采用ISSR標記對其遺傳多樣性進行了分析，根據(jù)聚類結果得知新疆本地葡萄品種并非野生種，而是由歐亞種演變而來的[44]。綜上所述，ISSR技術適合用于葡萄品種鑒定，但ISSR也存在一定的缺點，即其只是部分共顯性，不能有效區(qū)分檢測位點的純合與雜合。

1.4SRAP技術

相關序列擴增多態(tài)性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）發(fā)展于2001年，由美國加州大學的Li等提出[45]。其原理是利用設計的引物對開放閱讀框（open reading frames，ORFs）進行擴增[46]，正向引物對外顯子進行擴增，反向引物對內(nèi)含子和啟動子區(qū)域進行擴增，由于不同物種以及個體間的內(nèi)含子、啟動子和間隔序列存在很大的變異，從而擴增出多態(tài)性片段。SRAP分子標記技術具有操作簡單、可靠性好、重復性好等特點，且優(yōu)于AFLP、ISSR和RAPD，在種質(zhì)資源遺傳多樣性分析以及品種鑒定上得到廣泛應用。

苑煒建立了適于葡萄SRAP分析的技術體系，應用SRAP分析標記評價了156份葡萄種質(zhì)的親緣關系及遺傳多樣性水平[47]。Guo等利用19對SRAP引物區(qū)分開了包括歐亞種、歐美雜種、中國野生種在內(nèi)的76份葡萄種質(zhì)，其中包含洛浦早生與京亞、98-1與緋紅、98-2與巨峰，表明SRAP也可鑒定芽變品種[48]。Liu等以中國野生葡萄為試驗材料，應用SRAP技術對其遺傳多樣性進行了分析，在遺傳相似系數(shù)為0.84處可清楚地區(qū)分開所有品種，聚類結果也驗證了桑葉葡萄是毛葡萄的亞種[49]。張旭彤等也利用SRAP標記技術對中國野生葡萄進行了研究，進一步證明了SRAP標記鑒定葡萄品種的可行性[50-53]。但是，SRAP標記也存在一定的限制，其沒有通用的退火溫度，研究者需要對不同植物材料的退火溫度進行摸索，從而延長了SRAP標記的試驗周期，且SRAP是針對ORFs區(qū)域進行擴增，對基因組的擴增范圍有限。endprint

1.5SNP技術

單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）分子標記是在1996年由Lander提出的第3代DNA遺傳標記[54]，是指基因組DNA序列上單個堿基的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，這種變異是由單個堿基的轉(zhuǎn)換、顛換所致。SNP標記是用于檢測種內(nèi)個體間遺傳變異的分子單位最小的技術，穩(wěn)定性好、數(shù)量巨大且分布廣泛，其多樣性是目前所有分子標記中最豐富的一種。目前SNP已廣泛應用于遺傳多樣性分析、品種鑒定等方面。

Dong等設計9對SNP引物成功地區(qū)分開了16個葡萄品種，結果證實SNP標記可用于葡萄品種鑒定以及遺傳多樣性分析[55]。Riahi等利用73個SNP標記對44份突尼斯葡萄品種的[WTBX][STBX]VvmybA1基因、VvmybA2[WTBZ][STBZ]基因進行分析，研究品種之間的親緣關系及遺傳多樣性，結果分別用27個SNP標記和22個SNP標記區(qū)分開了22份突尼斯栽培種以及22份突尼斯野生種，認為開發(fā)的2套SNP標記對今后的品種鑒定有巨大的幫助[56]。Ghaffari等同樣也以突尼斯葡萄品種為試驗材料，采用SNP分子標記技術對其中的29份野生種與28份栽培種的親緣關系進行了分析，結果表明，突尼斯的野生種并非是當?shù)仄贩N，可能來自其他地區(qū)，同時發(fā)現(xiàn)2個錯誤命名品種（Turki與Reine de Vignes）[57]。Cabezas等通過對挑選出的11個樣本進行重測序并獲得了300多個SNP標記，對其進行分析后最終篩選出48個均勻分布于葡萄19條染色體上的具有高分辨率的SNP標記，將其作為葡萄基因分型的一套標準，并利用該標準成功鑒定了來自世界各地的一組葡萄品種，充分證明SNP分子標記技術的可靠性及穩(wěn)定性[58]。所有這些研究都證實了SNP分子標記可以用于葡萄品種的鑒定。但是用于檢測SNP的DNA芯片設計成本高，且由于DNA樣品的復雜性，有些SNP不能被檢測到。

1.6SSR技術

簡單重復序列（simple sequence repeat，SSR）別稱微衛(wèi)星DNA（microsatellite DNA），由Moore等于1991年創(chuàng)立[59]，是一類由1～6個堿基為重復單元組成的簡單串聯(lián)重復序列。這些簡單重復序列均勻、隨機、廣泛地分布于真核生物的基因組上，具有豐富的多態(tài)性。其基本原理是根據(jù)SSR兩端的保守互補序列設計1對特異引物，利用PCR對其進行擴增，因重復單元的次數(shù)不同，擴增片段長度就產(chǎn)生了差異，從而體現(xiàn)出SSR座位上的多態(tài)性。SSR分子標記具有標記數(shù)量多、多態(tài)性高、信息量高、試驗穩(wěn)定性和重復性強、操作簡單方便、對DNA質(zhì)量要求低、呈共顯性遺傳等獨特優(yōu)勢，已經(jīng)成為目前分子標記技術的熱點，在國內(nèi)外得到了廣泛的應用。

Thomas等相繼在1993、1996、1999年報道了VVS2、VVMD5、VVMD7、VVMD32、VVMD28、VVMD27、VVMD25[60-62]等7個適合葡萄品種鑒定的SSR引物。1999年，Sefc等為了豐富SSR標記多態(tài)性，又開發(fā)了2對SSR引物VrZAG79和VrZAG62[63]。因該9對引物均勻分布于葡萄19條染色體上且具有高的多態(tài)性而被國外視為通用引物，并且法國、意大利、德國、瑞士、美國等國研究者利用該9對引物構建了數(shù)據(jù)庫。2006年Kiss等利用SSR分子標記方法構建了109個葡萄品種的SSR指紋圖譜，可以方便其他研究者利用該指紋圖譜進行品種鑒定[64]。韓國研究者Cho等利用SSR-PCR標記技術對30個葡萄品種進行了鑒定，研究表明Jinok與康拜爾早生相似系數(shù)為1，可能為同一品種，同時僅用3對SSR引物（VVIt60、VVIn61、VVIu20）就將剩余的28份種質(zhì)區(qū)分開[65]。Durán等采用SSR技術從分子水平上分析了阿根廷品種Pedro Giménez和西班牙品種Pedro Ximénez的差異，證明了兩者并非是同一品種，并認為Pedro Giménez是Muscat of Alexandria和Criolla Chica的后代[66]。Jahnke等依據(jù)SSR分子標記技術完成了砧木品種的分析鑒定[67]。2015年Mihaljevic等以克羅地亞和黑山的284個地方品種為試驗材料，利用9對SSR引物對其進行遺傳多樣性分析，結果檢測出25個之前未曾報道過的基因型，并將得到的數(shù)據(jù)與歐洲數(shù)據(jù)庫以及其他已報道的相關研究結果進行比對，發(fā)現(xiàn)了一些新的同名異物和同物異名品種[68]。SSR分子標記還可用于親本鑒定[69]、無性系鑒定[70-71]以及同物異名和同名異物品種的鑒定[72-74]。目前國內(nèi)也開展了SSR標記鑒定葡萄品種的研究，例如樊秀彩等以山葡萄、河岸葡萄以及239株二者的雜交后代為材料，從12對SSR引物中篩選出7對能擴增出父本特異條帶的引物，作為雜種鑒定的標記，利用該7對特異引物對供試材料進行快速鑒定，結果表明，雜交后代中有161株被確認為真雜種，認為SSR標記可有效地對葡萄屬種間雜種進行鑒定[75]。杜晶晶應用9對SSR引物鑒別了80份葡萄種質(zhì)，并構建了80份葡萄種質(zhì)的有效分子身份證[76]。李慧等利用SSR標記和IRAP標記對關口葡萄的親緣關系進行了分析，結果表明關口葡萄屬于歐美雜交種，既不是尼加拉也不是白香蕉[77]。成冰等對13個釀酒白葡萄品種進行了SSR分析與鑒定，研究表明引物VrZAG62和VVIb66都可以將這13個釀酒白葡萄品種區(qū)分開[78]。憲立杰等對取自中國農(nóng)業(yè)科學院鄭州果樹研究所葡萄資源圃的45份葡萄種質(zhì)進行了SSR分析，利用19對核心引物擴增出76條帶，其中74條具有多態(tài)性，并利用SSR標記初步建立了一個SSR基因型指紋庫，為鑒定葡萄品種或品系提供了基礎數(shù)據(jù)[79]。郭春苗等以新疆44個適宜制干葡萄品種為試材，從52對引物中篩選出8對多態(tài)性高的引物并對其進行SSR分析，利用4條引物構建了品種DNA指紋圖譜，通過統(tǒng)計測驗可將44份葡萄種質(zhì)區(qū)分開來，認為SSR分子標記技術可準確地鑒定葡萄品種[80]。李雪雁等以75個葡萄栽培品種為材料，選用19對核心SSR引物對其進行研究，建立了一套適合于葡萄DNA指紋圖譜構建的技術體系，為葡萄種質(zhì)資源的鑒定提供了依據(jù)[81]。尹玲等對我國新育成的24份葡萄種質(zhì)進行了SSR分析，結果表明，所用的6對SSR引物可以明確地區(qū)分開供試葡萄品種，還能正確地鑒定出品種的倍性，并建立了24份葡萄品種的SSR指紋圖譜，為品種鑒定、親緣關系分析以及植物品種權保護提供參考依據(jù)[82]。研究者普遍認為，SSR分子標記具有高的多態(tài)性，非常適用于葡萄品種鑒定和DNA指紋圖譜的構建。endprint

1.7iPBS技術

引物結合位點間擴增（inter primer binding site，iPBS）標記是一種新型、簡單、快速、高效的分子標記方法，該技術由Kalendar等在2010年建立[83]。它是以長末端重復序列（long terminal repeats，LTR）類反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子保守位點設計引物對該類反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子中2個引物結合位點（PBS）區(qū)間進行擴增的一種分子標記技術，與早期基于反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的分子標記方法不同，不須要預先獲知LTR的序列。iPBS標記技術是葡萄種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及鑒定的一種新的技術手段。近些年，iPBS標記在杏[84]、楊梅[85]、雪蓮果[86]、虎杖[87]、牡丹[88]等植物上都有所研究。

2014年張瀟玉等以巨峰葡萄為試材，iPBS引物2249為擴增引物，對葡萄iPBS-PCR反應體系的各個成分以及退火溫度進行優(yōu)化，利用優(yōu)化后的iPBS-PCR反應體系對18份葡萄種質(zhì)進行擴增檢測，獲得的條帶清晰、穩(wěn)定且多態(tài)性高，為葡萄種質(zhì)資源鑒定及遺傳多樣性評價提供了重要的技術支持[89]。Guo等對35份葡萄種質(zhì)進行了iPBS分析，利用15對iPBS引物擴增出99條DNA譜帶，其中86.3%具有多態(tài)性，由軟件UPGMA進行聚類，結果表明葡萄栽培種和野生種存在明顯的差異，且擁有豐富的遺傳多樣性[90]。iPBS也存在自身的限制，其對模板DNA純度和片段大小要求較高。iPBS作為一種剛發(fā)展起來的新型分子標記，在葡萄品種鑒定上的應用剛起步。

2小結與展望

葡萄品種的鑒定方法從最初的形態(tài)學鑒定發(fā)展到同工酶鑒定，再到現(xiàn)在常用的分子標記鑒定，經(jīng)歷了從形態(tài)學到分子生物學，從外部到內(nèi)部的過程。傳統(tǒng)的形態(tài)學標記及同工酶鑒定易受環(huán)境因素的影響，同時也受不同發(fā)育時期的限制。而分子標記則不存在上述問題，它是從分子的角度展示了不同品種間存在的差異。本文所介紹的幾種DNA分子標記技術在葡萄品種鑒定應用中各有優(yōu)缺點，在鑒定一些不易區(qū)分的親緣關系較近的品種或芽變品種時，可將幾種分子標記方法相結合以達到最終目標。DNA分子標記的發(fā)展是永無止境的，今后不僅要加速開發(fā)新型的DNA指紋技術，還要對現(xiàn)有DNA分子標記技術加以改進，建立快速鑒定葡萄品種的方法體系，從而實現(xiàn)品種鑒定的簡單化、自動化。

隨著分子生物學技術的發(fā)展，以DNA分子標記為基礎的指紋圖譜構建逐漸成為熱點，因其具有準確可靠、簡便快速、易于自動化等優(yōu)點已成為品種鑒定的重要技術手段。國際植物品種權保護保護聯(lián)盟（UPOV）在BMT測試指南草案中已經(jīng)將構建DNA指紋數(shù)據(jù)庫的標記方法確定為SSR和SNP[4]，SSR標記以其獨特的優(yōu)勢，成為當前構建指紋圖庫以及品種鑒定的首選標記。隨著生物技術和互聯(lián)網(wǎng)信息技術的發(fā)展壯大，構建品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫和全國統(tǒng)一查詢平臺勢在必行?？梢栽诶眯螒B(tài)學鑒定品種的同時，通過篩選適合葡萄品種鑒定的核心引物，建立現(xiàn)有葡萄品種的DNA指紋數(shù)據(jù)庫，并利用計算機技術將該指紋數(shù)據(jù)庫與對應品種的形態(tài)學數(shù)據(jù)相結合建立一個平臺，從而實現(xiàn)快速鑒定葡萄品種的目的。該平臺的建立可以使試驗數(shù)據(jù)在不同實驗室得到共享，可有效保護葡萄育成品種的知識產(chǎn)權和育種者的權益，保證葡萄產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。

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